免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座

免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第1頁

第一節(jié)免疫學(xué)診療一、抗原抗體檢測二、淋巴細(xì)胞檢測免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第2頁一、抗原抗體檢測原理：

Ag與對應(yīng)Ab在體內(nèi)與體外可發(fā)生特異性結(jié)合檢測標(biāo)準(zhǔn)：1.已知Ag檢測未知Ab2.已知Ab檢測未知Ag免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第3頁細(xì)菌學(xué)診療標(biāo)本采集時應(yīng)注意無菌操作，盡可能防止雜菌污染。依據(jù)致病菌在不一樣病期體內(nèi)分布和排出部位，采取不一樣標(biāo)本。應(yīng)在使用抗菌藥品前采集標(biāo)本，不然在培養(yǎng)時應(yīng)加入拮抗劑。盡可能采集病變顯著部位材料。標(biāo)本必須新鮮，采集后盡快送檢。送檢過程中要采取適當(dāng)保留方式。標(biāo)本采集與送檢標(biāo)準(zhǔn)免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第4頁致病菌檢驗程序標(biāo)本生化試驗血清學(xué)試驗動物試驗藥敏試驗直接涂片檢驗分離培養(yǎng)分子生物學(xué)技術(shù)（核酸雜交、PCR）

其它(HPLC)免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第5頁人體受致病菌感染后，其免疫系統(tǒng)被刺激后發(fā)生免疫應(yīng)答而產(chǎn)生特異性抗體?？贵w量常隨感染過程而增多，表現(xiàn)為效價（滴度）升高。所以，用已知細(xì)菌或其特異性抗原檢測患者體液中有沒有對應(yīng)特異抗體和其效價動態(tài)改變，可作為一些傳染病輔助診療。普通采取病人血清進(jìn)行試驗，故稱為血清學(xué)診療(serologicaldiagnosis)。血清學(xué)診療試驗最好取患者急性期和恢復(fù)期雙份血清標(biāo)本，當(dāng)后者抗體效價比前者升高大于等于4倍時方有意義。常見方法：直接凝集試驗、乳膠凝集試驗、沉淀試驗、補(bǔ)體結(jié)合試驗、中和試驗、ELISA。血清學(xué)診療免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第6頁體外抗原抗體反應(yīng)免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第7頁

抗原抗體反應(yīng)1、抗原抗體結(jié)合與析出2、抗原抗體反應(yīng)特點3、抗原抗體反應(yīng)影響原因免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第8頁引發(fā)抗原抗體結(jié)合作用力1、電荷引力（庫侖引力）2、電子云引力（VanderWaals力）3、氫鍵結(jié)協(xié)力4、疏水作用力免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第9頁抗原抗體結(jié)合物析出原因析出+—

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—++—+—+—免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第10頁

抗原抗體反應(yīng)特點1、特異性2、適合百分比性3、可逆性免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第11頁網(wǎng)格學(xué)說（latticetheory）抗體過?？乖^?？贵w抗體百分比適當(dāng)免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第12頁可逆性K（親和常數(shù)）=Ag+AbAgAb免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第13頁

抗原抗體反應(yīng)影響原因1、電解質(zhì)2、酸堿度（pH值6-8）3、溫度（37-42。C）免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第14頁經(jīng)典血清學(xué)反應(yīng)免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第15頁抗原或抗體檢測方法類型抗原抗體輔助物敏感度（

g抗體氮）凝集反應(yīng)顆粒性凝集素0.01沉淀反應(yīng)可溶性沉淀素5-10補(bǔ)體溶血反應(yīng)紅細(xì)胞溶血素補(bǔ)體0.001-0.3G-細(xì)菌溶菌素補(bǔ)體（同上）補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)固定補(bǔ)體抗體補(bǔ)體SRBC溶血素0.1

中和反應(yīng)外毒素抗毒素靶細(xì)胞0.01

病毒中和抗體靶細(xì)胞（同上）免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第16頁凝集反應(yīng)免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第17頁直接凝集反應(yīng)

玻片法：ABO血型判定試管法：肥達(dá)試驗顆粒性抗原抗體（凝集素）免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第18頁正向間接凝集反應(yīng)如：類風(fēng)濕因子檢測可溶性抗原載體顆?？贵w（凝集素）免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第19頁反向間接凝集反應(yīng)抗體可溶性抗原載體顆粒免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第20頁間接凝集抑制反應(yīng)如妊娠診療試驗檢測HCG凝集凝集抑制待檢樣品待檢樣品免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第21頁沉淀反應(yīng)免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第22頁液相內(nèi)沉淀反應(yīng)絮狀沉淀反應(yīng)環(huán)狀沉淀反應(yīng)如法醫(yī)學(xué)血跡判定++——抗血清抗原抗原抗體免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第23頁凝膠內(nèi)沉淀反應(yīng)免疫擴(kuò)散技術(shù)免疫電泳技術(shù)單向擴(kuò)散試驗雙向擴(kuò)散試驗火箭電泳對流電泳免疫電泳免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第24頁免疫標(biāo)識技術(shù)免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第25頁主要免疫標(biāo)識物類別標(biāo)識物用途熒光素

FITC、RB200、TRITC免疫組化鑭系元素螯合物免疫分析測定放射性核素

3H、14C、32P、57Gr免疫分析測定

125I、131I酶

HRP、AP免疫組化免疫分析測定化學(xué)發(fā)光物L(fēng)uminol、lucigenin免疫分析測定金屬顆粒膠體金、鐵蛋白免疫組化免疫分析測定

免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第26頁標(biāo)識免疫技術(shù)分類一、按測定用途分類：1、免疫組化技術(shù)2、免疫測定技術(shù)二、按標(biāo)識物分類：1、酶免疫技術(shù)2、熒光免疫技術(shù)3、放射免疫技術(shù)4、發(fā)光免疫技術(shù)5、金免疫技術(shù)免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第27頁免疫熒光技術(shù)免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第28頁直接法間接法補(bǔ)體法雙標(biāo)識法免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第29頁放射免疫分析免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第30頁結(jié)合相游離相免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第31頁酶聯(lián)免疫吸附試驗ELISA免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第32頁間接法免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第33頁夾心法免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第34頁競爭法免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第35頁二、免疫細(xì)胞檢測技術(shù)1、細(xì)胞表面標(biāo)志檢測2、細(xì)胞功效檢測3、細(xì)胞因子檢測免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第36頁表面標(biāo)志檢測免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第37頁常見免疫細(xì)胞表面標(biāo)志檢測技術(shù)一、免疫標(biāo)識檢測1、熒光抗體法2、酶免疫檢測法3、免疫金銀染色法二、補(bǔ)體依賴細(xì)胞毒試驗（CDC）三、E花環(huán)形成試驗免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第38頁SmIg熒光抗體檢測法免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第39頁SmIg酶免疫檢測法免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第40頁補(bǔ)體依賴細(xì)胞毒試驗（CDC）染料補(bǔ)體免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第41頁E-花環(huán)T細(xì)胞B細(xì)胞花環(huán)形成細(xì)胞綿羊紅細(xì)胞免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第42頁細(xì)胞功效檢測免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第43頁一、轉(zhuǎn)化、增殖試驗1、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗2、混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)二、細(xì)胞毒檢測1、T細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒試驗2、NK活性測定3、ADCC作用測定常見免疫細(xì)胞功效檢測技術(shù)免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第44頁放射性測定3H-TdR絲裂原（抗原）刺激淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗原理示意免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第45頁放射性測定細(xì)胞毒試驗原理示意靶細(xì)胞效應(yīng)細(xì)胞分離上清免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第46頁細(xì)胞因子檢測免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第47頁可檢測細(xì)胞因子白細(xì)胞介素（Interleukin）——IL-1、IL-2、……IL-18干擾素（Interferon）——IFN-

、IFN-、IFN-腫瘤壞死因子（Tumornecrosisfactor）——TNF-、TNF-集落刺激因子（Colony-stimulatingfactor）——M-CSF、G-CSF轉(zhuǎn)化生長因子（Transforminggrowthfactor）——TGF-趨化因子（Chemokine）——IL-8、GROs、MCP-1生長因子（Growthfactor）——EGF、FGF、IGF、PDGF免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第48頁細(xì)胞因子檢測特點1、免疫原性較弱2、樣品含量低3、樣品含有時效性4、生物效應(yīng)特異性差免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第49頁細(xì)胞因子檢測方法1、免疫標(biāo)識技術(shù)檢測——抗原性測定2、細(xì)胞生物學(xué)方法檢測——生物活性測定3、分子生物學(xué)技術(shù)檢測——mRNA表示測定免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第50頁特異性免疫取得方式：自然免疫、人工免疫自然被動免疫：如胎兒從母體取得IgG嬰兒從母體取得IgM自然自動免疫：感染病原體后取得免疫力人工自動免疫:接種類毒素、疫苗等人工被動免疫：注射抗毒素、丙種球蛋白等第二節(jié)

免疫預(yù)防免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第51頁

思索題：1.你知道注射“乙肝疫苗、卡介苗、白白破三聯(lián)疫苗”目標(biāo)是什么？機(jī)制？屬于何種免疫？2.你知道注射“丙球、胎盤球蛋白、抗毒素、IL-2、IFN”目標(biāo)是什么？機(jī)制？屬于何種免疫？3.注射疫苗和注射丙球等制劑取得免疫力方式各有什么特點？4．請你舉一個實例說明何時使用疫苗、何時使用丙球等制劑？理由及注意事項。免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第52頁人工免疫定義：依據(jù)特異性免疫應(yīng)答原理，采取人工方法將Ag/Ab制成各種制劑，接種于人體，使其產(chǎn)生/取得特異性免疫力，到達(dá)預(yù)防一些疾病目標(biāo)。分類：1、人工主動免疫用疫苗或類毒素等抗原接種機(jī)體，使之產(chǎn)生特異免疫，從而預(yù)防感染辦法。

2、人工被動免疫用抗體或細(xì)胞因子等制劑，使之取得特異免疫，以治療或緊急預(yù)防感染辦法。免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第53頁一、人工主動免疫

(artificialactiveimmunity)：定義：人工主動免疫將疫苗(vaccine)或類毒素接種于人體，使機(jī)體產(chǎn)生取得性免疫力一個防治微生物感染辦法，主要用于預(yù)防。免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第54頁人工主動免疫生物制劑：滅活疫苗（死疫苗）：選取免疫原性強(qiáng)細(xì)菌，經(jīng)人工大量培養(yǎng)后，用理化方法殺死而成。減毒活疫苗：用減毒或無毒力活病原體制成。類毒素：細(xì)菌外毒素經(jīng)0.3%-0.4%甲醛液作用3-4周后，毒性消失但仍保持免疫原性。亞單位疫苗：依據(jù)細(xì)菌抗原分析，查明不一樣致病菌主要保護(hù)性免疫原存在組分，然后將之制成疫苗。DNA重組疫苗：經(jīng)過DNA重組技術(shù)制備所需疫苗。核酸疫苗：或稱DNA疫苗、基因疫苗，是將能編碼引發(fā)保護(hù)性免疫應(yīng)答病原體免疫原基因片段和質(zhì)粒載體直接注射入宿主體以表示目標(biāo)免疫原，進(jìn)而誘導(dǎo)出體液和細(xì)胞免疫新型疫苗。治療性疫苗免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第55頁

1、疫苗

死疫苗與活疫苗比較種類死疫苗活疫苗制劑性狀殺死病原體毒力減弱（無毒）活病原體接種次數(shù)及量2-3次，用量大（間隔7-10天）1次，用量小穩(wěn)定性穩(wěn)定，易保留穩(wěn)定性差，不易保留副作用無毒力回復(fù)突變有毒力回復(fù)突變免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第56頁

2、類毒素（接種2次，吸收遲緩，間隔4-6周）

外毒素0.3-0.4%甲醛類毒素如：百-白-破精巧吸附類毒素

3、新型疫苗1）亞單位疫苗：提取有效免疫原成份。(降低不良反應(yīng)，排除致癌可能性）如HA、NA，HBSAg

免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第57頁2）合成肽疫苗：人工合成抗原肽。（無需培養(yǎng)微生物，可大量生產(chǎn)，無致癌、返祖危險性）3）基因工程疫苗圖示：編碼免疫原基因→載體→體內(nèi) ↓ 酵母菌、大腸桿菌（體外培養(yǎng)）如：重組抗原疫苗、重組載體疫苗、DNA疫苗、轉(zhuǎn)基因植物疫苗等免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第58頁人工主動免疫注意事項接種對象：凡免疫力差、與病原體接觸機(jī)會多、疾病危害大、流行地域易感者。接種劑量、次數(shù)和間隔時間（計劃免疫程序表）接種路徑：皮內(nèi)、皮下、吸入、口服接種后反應(yīng)：24h內(nèi)局部紅腫、疼痛、淋巴結(jié)大；全身發(fā)燒、頭痛、惡心，數(shù)天恢復(fù)。禁忌癥：高熱、急性傳染病、嚴(yán)重心血管病、本身免疫病、免疫缺點病。免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第59頁免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第60頁二、人工被動免疫

(artificialpasstiveimmunity)人工被動免疫定義：注射含有特異性抗體免疫血清或純化免疫球蛋白，或細(xì)胞因子等免疫制劑，使機(jī)體即刻取得特異性免疫，因而作用及時。但這些免疫物質(zhì)不是病人自己產(chǎn)生，故維持時間短。主要用于治療或緊急預(yù)防。免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第61頁人工被動免疫生物制品：抗毒素(antitoxin)：外/類毒素→馬→Ab丙種球蛋白：正常人血清或健康產(chǎn)婦胎盤中提取人特異性Ig：1.含高效價特異性抗體且超敏反應(yīng)發(fā)生率低

2.起源①恢復(fù)期病人，含高效價特異性抗體供血者血漿②接種疫苗/類毒素免疫者血漿。免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第62頁人工被動免疫注意事項：注意預(yù)防超敏反應(yīng)早期和足量不濫用丙球應(yīng)用范圍：易感人群、患者免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第63頁人工主動免疫與人工被動免疫區(qū)分區(qū)分關(guān)鍵點人工主動免疫人工被動免疫輸入物質(zhì)抗原抗體或細(xì)胞因子免疫生效時間慢，2-4周快，馬上免疫維持時間長，數(shù)月-數(shù)年短，2-3周主要用途預(yù)防治療或緊急預(yù)防區(qū)分點免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第64頁第三節(jié)免疫治療

概念：依據(jù)免疫學(xué)原理，應(yīng)用物理、化學(xué)和生物學(xué)方法增強(qiáng)或抑制機(jī)體免疫機(jī)能，人為地糾正免疫異常狀態(tài)，到達(dá)治療目標(biāo)辦法。

免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第65頁分類（作用機(jī)制）：1、免疫增強(qiáng)療法免疫抑制療法2、特異性免疫治療非特異性免疫治療3、主動免疫治療：主動增強(qiáng)，“疫苗”，直接作用 被動免疫治療：被動增強(qiáng)，抗體、免疫效應(yīng)細(xì)胞、小分子免疫肽，間接作用，過繼免疫免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第66頁一抗體為基礎(chǔ)免疫治療二抗原為基礎(chǔ)免疫治療三細(xì)胞因子及其拮抗劑為基礎(chǔ)免疫治療四細(xì)胞為基礎(chǔ)免疫治療五免疫調(diào)整劑治療六免疫重建免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第67頁一、特異性被動免疫治療

（抗體為基礎(chǔ)免疫治療）定義：輸入特異性免疫效應(yīng)物質(zhì)，使機(jī)體馬上取得某種特定免疫力，以到達(dá)治療目標(biāo)。特點：見效快，維持時間短作用：緊急預(yù)防和治療傳染病、抗腫瘤和抗移植物排斥反應(yīng)。如：破傷風(fēng)、白喉抗毒素，丙種球蛋白抗病毒血清、抗淋巴細(xì)胞丙種球蛋白腫瘤特異性McAb（免疫導(dǎo)向療法）免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第68頁二、特異性主動免疫治療

（抗原為基礎(chǔ)免疫治療）定義：利用抗原性疫苗對機(jī)體進(jìn)行免疫接種，誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答或免疫耐受，到達(dá)治療目標(biāo)。特點：見效慢，維持時間長作用：預(yù)防傳染病、抗腫瘤。如：卡介苗、乙肝V多肽疫苗、流感V亞單位疫苗、腫瘤疫苗免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第69頁三、非特異性免疫治療

（細(xì)胞因子及其拮抗劑為基礎(chǔ)免疫治療）定義：采取非特異性免疫調(diào)整劑（如細(xì)胞因子及其拮抗劑）來調(diào)整機(jī)體免疫功效失衡情況，以到達(dá)治療或輔助治療目標(biāo)。BRM：（生物應(yīng)答調(diào)整劑）調(diào)整機(jī)體免疫功效，抵抗病原微生物或癌細(xì)胞侵襲。免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第70頁免疫學(xué)應(yīng)用專題知識講座第71頁四、過繼性細(xì)胞免疫治療

（細(xì)胞為基礎(chǔ)免疫治療）

定義：將自體或同種異體免疫細(xì)胞，經(jīng)體外激活誘導(dǎo)