高中風(fēng)險(xiǎn)地區(qū)大規(guī)模篩查新冠核酸檢測經(jīng)驗(yàn)分享

2/2高中風(fēng)險(xiǎn)地區(qū)大規(guī)模篩查新冠核酸檢測經(jīng)驗(yàn)分享一區(qū)試劑配制試劑配制是核酸檢測的第一步，也是全流程完善完備的起跑線，決定了后續(xù)工作的有效性。（一）時間及流程優(yōu)化建議氣模實(shí)驗(yàn)室每天的檢測任務(wù)一般是4-8萬管，因此，試劑配制工作量非常大，節(jié)約時間、提高效率是很重要。可以從以下幾方面節(jié)約時間：1.擴(kuò)增試劑的提前解凍?，F(xiàn)場后勤工作人員可以根據(jù)標(biāo)本量，在核酸檢測人員到達(dá)場地的1-2小時前將一定比例的擴(kuò)增試劑放置室溫，提前解凍。2.擴(kuò)增試劑的反應(yīng)液與酶可以數(shù)支按照正確比例同時倒入50ml離心管中進(jìn)行混勻，而不是分別混合混勻。這樣可以節(jié)約開蓋擰蓋的次數(shù)，減少污染，省時省力。3.使用全自動液體工作站進(jìn)行自動分液，而不是使用排槍分液。排槍分液操作要求高，連續(xù)使用移液器槍頭會松動，易導(dǎo)致分液體積不準(zhǔn)。使用全自動液體工作站省時、省力、精準(zhǔn)度高。（二）注意事項(xiàng)1.試劑配制的量盡可能與檢測量齊平。試劑配制后，放置時間過久，將導(dǎo)致酶失活，出現(xiàn)假陰性；以及探針斷裂致使熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)游離，擴(kuò)增出現(xiàn)假的單基因起跳情況。在人員充足的情況下，可以安排專人在一區(qū)根據(jù)實(shí)際檢測量進(jìn)行動態(tài)的試劑配制。2.動作輕柔，嚴(yán)防人源性污染。物品進(jìn)入一區(qū)前，應(yīng)該消毒。盡量減少未被防護(hù)裝備遮蓋的身體部位直接與一區(qū)內(nèi)物品接觸。試劑混合、分液、分裝動作都應(yīng)輕柔，手套避免接觸管口、管蓋等部位。二區(qū)樣本制備

樣本制備是核酸檢測中工作量最重、最繁瑣的一個區(qū)域，人員多、崗位多、設(shè)備雜、空間擁擠。樣本制備的每一個步驟都至關(guān)重要。（一）時間及流程優(yōu)化建議1.由于崗位復(fù)雜，建議各個崗位的人員相對固定，可以降低失誤率。2.標(biāo)本接收后，需震蕩混勻，10混1管和20混1管需適當(dāng)延長震蕩時間。震蕩完成，靜置5分鐘后，再進(jìn)行加樣，減少開蓋時的液體飛濺和氣溶膠污染。3.每行標(biāo)本的首尾應(yīng)使用標(biāo)記筆進(jìn)行標(biāo)記和編號。4.如果加樣錯誤，如果能明確知道加樣錯誤位置，在布板單上標(biāo)注清楚；如不明確，需整板重做。5.加樣完成后，標(biāo)本的擺放：可按照加樣人的不同分開擺放。在標(biāo)本架上用便簽紙粘貼板號以及加樣人-加樣板信息，如“某某-1”，以方便查找。同時，流轉(zhuǎn)單上也需標(biāo)注。6.標(biāo)本的丟棄：整板標(biāo)本結(jié)果上傳完畢，由三區(qū)核對后發(fā)出指令，二區(qū)人員方可丟棄標(biāo)本（每板標(biāo)本分別打包丟棄，黃色小垃圾袋外標(biāo)注板號）。如遇某板標(biāo)本中有復(fù)查標(biāo)本，此板標(biāo)本需暫存，直至復(fù)查完畢。7.復(fù)查需單獨(dú)布板，且相鄰位置盡量不同時加陽性復(fù)查標(biāo)本。（二）注意事項(xiàng)1.核酸提取過程所有的試劑（裂解液、洗滌液、磁珠、洗脫液等）都應(yīng)屬于同一批號，寫上板號和順序號，且標(biāo)記的位置朝向一致。2.如因試劑順序擺放錯誤導(dǎo)致無擴(kuò)增結(jié)果，需整板重做。3.提取試劑使用前需抽樣檢查底部是否有結(jié)晶形成，胍鹽結(jié)晶可導(dǎo)致磁珠吸附和釋放效能降低，造成核酸提取失敗。如因?yàn)闅鉁靥蛯?dǎo)致的結(jié)晶，需37攝氏度復(fù)溫，其他原因?qū)е碌慕Y(jié)晶，需更換試劑。4.提取完成后，若發(fā)現(xiàn)磁棒套殘留磁珠過多，以及洗脫液內(nèi)殘留磁珠，此臺提取儀應(yīng)停用，聯(lián)系儀器工程師。5.點(diǎn)樣和貼膜/加蓋崗位，尤其需注意手套導(dǎo)致的攜帶污染，需常更換或消毒。6.若加樣人員發(fā)現(xiàn)采樣管內(nèi)無拭子，一律按退單處理（環(huán)境采樣除外）。7.上機(jī)前需將96孔板瞬時離心后方可上機(jī)擴(kuò)增，如疊放，需考慮離心力是否會將遠(yuǎn)端板的貼膜擠壓，導(dǎo)致密封性降低。三區(qū)擴(kuò)增及分析

由于氣膜實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的PCR擴(kuò)增儀可能品牌和型號眾多，擴(kuò)增區(qū)工作人員應(yīng)對不同PCR擴(kuò)增儀都有一定的了解，進(jìn)艙前熟悉操作。擴(kuò)增區(qū)的操作人員，應(yīng)當(dāng)熟練掌握熒光PCR的原理、CT值的意義、基線的調(diào)整、陰陽性質(zhì)控的意義、結(jié)果的判讀等，且細(xì)心、謹(jǐn)慎。（一）時間及流程優(yōu)化建議1.陽性或弱陽性結(jié)果，需雙人確認(rèn)，雙簽字。2.每批復(fù)查的布板單和原始單都應(yīng)匯總在一起，簡單裝訂，方便核實(shí)。3.原始單最下面結(jié)果分析部分，應(yīng)該對該板結(jié)果進(jìn)行總結(jié)，如“全陰”、“1個內(nèi)標(biāo)未起復(fù)查”、“1個雙陽復(fù)查”、“1個單陽復(fù)查”等，并簽名，以便結(jié)果錄入。（二）注意事項(xiàng)1.注意擴(kuò)增儀的熒光信號收集方式，是側(cè)面掃描或頂部掃描。如側(cè)面掃描，則不能使用不透明的擴(kuò)增管。如果頂部掃描，則不能使用硅膠蓋板或不透明/磨砂的八連管蓋。2.所有的擴(kuò)增管上機(jī)前，需再次確認(rèn)每個管管蓋嚴(yán)密性。3.擴(kuò)增儀上機(jī)后，需標(biāo)注陰性和陽性質(zhì)控位置，其余的樣本孔需編號，與布板單一致。4.盡量在程序結(jié)束、冷卻后再打開擴(kuò)增儀熱蓋，防止爆蓋。5.結(jié)果分析時，不同的試劑尤其需要注意各個通道代表的是哪種靶基因，不能混淆。6.結(jié)果分析時，如擴(kuò)增曲線出現(xiàn)斜線、非正立的S型曲線等情況，需注意查看原始曲線，并調(diào)整基線，重新分析。7.不同的試劑進(jìn)行同一管陽性標(biāo)本復(fù)查時，兩者CT值的差距需要在合理范圍內(nèi)（根據(jù)程序設(shè)置方式、點(diǎn)樣量、總體積等提前計(jì)算）。8.出現(xiàn)非?？亢蟮膯位蚱鹛瑹o論說明書是否已經(jīng)判斷為陰性，都應(yīng)該進(jìn)行雙試劑復(fù)查。在病例較多的地區(qū)，患者呼吸道排毒量個體差異較大，非?？亢蟮膯位蚱鹛?，可能是少量排毒期，排除污染后，可上報(bào)可疑。9.有效控制艙內(nèi)溫度，多臺擴(kuò)增儀散熱量巨大，應(yīng)減少由于環(huán)境溫度過高導(dǎo)致擴(kuò)增儀損壞。各區(qū)域交流環(huán)節(jié)各區(qū)之間的交流是很重要的，下面對各區(qū)都需注意或涉及到的注意事項(xiàng)進(jìn)行總結(jié)。1.擴(kuò)增試劑在點(diǎn)樣前和點(diǎn)樣后，都應(yīng)該避免紫外線的照射，盡量避光。2.每一板標(biāo)本的流轉(zhuǎn)都應(yīng)該隨時攜帶流轉(zhuǎn)單，流轉(zhuǎn)單上應(yīng)標(biāo)注板號、加樣人-加樣板如“某某-1”、提取人、提取儀編號、擴(kuò)增上機(jī)人、擴(kuò)增儀編號、結(jié)果分析人員等信息。3.各區(qū)域之間盡量減少不必要的人員、物品流動。尤其避免人員和物品的逆向流動。如需流動，需做好消殺、嚴(yán)防產(chǎn)物污染。4.如出現(xiàn)某一板有多個內(nèi)標(biāo)不出的情況，先確定是否為環(huán)境樣本，檢查采樣管的基本情況。再通知二區(qū)將標(biāo)本再次震蕩后，更換加樣人整板重新加樣、更換提取儀提取、更換擴(kuò)增儀進(jìn)行擴(kuò)增。如情況仍然未得到改善，可通知重新采樣。5.若初篩出現(xiàn)雙陽標(biāo)本，原管復(fù)查后變成陰性，應(yīng)找出原始板，整板進(jìn)行復(fù)查。6.75%酒精能殺滅新冠病毒，防止生物危害，但是并不能有效防止產(chǎn)物污染，且易燃易爆。因此，杜絕核酸產(chǎn)物污染，盡可能使用含氯消毒液或核酸清除劑。7.如大量標(biāo)本出現(xiàn)