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關(guān)于尿液常規(guī)檢查方法尿液有形成分檢查
尿液有形成分是檢查通過尿液排出體外能在顯微鏡下觀察到的有形物,是來自腎臟或尿道脫落的細(xì)胞、還是腎實(shí)質(zhì)發(fā)生病理改變形成的管型、感染的微生物、寄生蟲及各種生理和病理性的結(jié)晶。1:檢查方法光學(xué)顯微鏡、儀器法、特殊顯微鏡法(透射電鏡法、偏振光顯微鏡法、相差顯微鏡法)尿沉渣顯微鏡法是目前尿有形成分檢查的金標(biāo)準(zhǔn)。2:方法學(xué)評(píng)價(jià)(1)顯微鏡檢查
1)直接鏡檢法:簡(jiǎn)便但陽性率低,重復(fù)性差,易漏診。適用于外觀渾濁尿有形成分增多的標(biāo)本。
2)離心法:細(xì)胞陽性率高,但繁瑣、費(fèi)時(shí)‘結(jié)果易受離心的尿量、轉(zhuǎn)速和時(shí)間影響。第2頁,共15頁,2024年2月25日,星期天3)定量尿沉渣計(jì)數(shù)板法:使尿沉渣檢查更符合標(biāo)準(zhǔn)化的要求。4)染色法(ternheirener-Malbin、巴士染色法、特殊染色)有助于識(shí)別細(xì)胞、管型等(二)儀器法:靈敏度高、重復(fù)性好、速度快但目前尿沉渣分析儀特異性扔有待提高。第3頁,共15頁,2024年2月25日,星期天尿液化學(xué)檢查方法一:尿液酸堿度測(cè)定(一)定義
尿液酸堿度是反映腎臟調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)環(huán)境體液酸堿平衡能力的重要指標(biāo)之一,通常簡(jiǎn)稱為尿液酸度。尿液酸度分兩種:可滴定酸度和真正酸度。前者可用酸堿滴定法進(jìn)行滴定,相當(dāng)于尿液酸度總量,后者是指尿液中所有能離解的氫離子濃度,通常用pH來表示。(二)檢測(cè)方法及評(píng)價(jià)
1.試帶法:用pH廣泛試帶浸入尿液中,立即取出與標(biāo)準(zhǔn)色板比較測(cè)定。用肉眼判斷出尿液的pH,或用儀器判讀結(jié)果。本法操作簡(jiǎn)單,可目測(cè)或用尿液分析儀檢測(cè),是目前最廣泛應(yīng)用的篩檢方法,但試帶易吸潮變質(zhì),易影響準(zhǔn)確性。
2.指示劑法:常用的指示劑為0.4g/L溴麝香草酚藍(lán)溶液,顯示黃色為酸性尿;顯藍(lán)色為堿性尿;顯綠色為中性尿。本法操作簡(jiǎn)單,但溴麝香草酚藍(lán)的pH變色范圍為6.0~7.6,當(dāng)尿液pH偏離范圍時(shí),檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。黃疸尿、血尿易干擾指示劑法。
3.滴定法:本法可檢查尿液酸度的總量。臨床上,可用于觀察尿液酸度的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè),但操作復(fù)雜。
4.pH計(jì)法:用pH電極能直接精確地測(cè)定出尿液的pH。本法精確度較高,可用于酸負(fù)荷試驗(yàn)后尿液pH檢查,對(duì)于腎小管酸中毒的定位診斷、分型、鑒別診斷,有一定的應(yīng)用價(jià)值,但需要特殊儀器,且操作更繁瑣。
第4頁,共15頁,2024年2月25日,星期天(三)質(zhì)量控制
1.標(biāo)本必須新鮮:陳舊標(biāo)本可因尿C02揮發(fā)或細(xì)菌生長(zhǎng)使pH增高,也可因細(xì)菌和酵母菌作用,使尿中葡萄糖降解為酸和乙醇而pH減低。
2.試帶法:試帶應(yīng)滿足生理和病理尿pH的變化范圍,未被酸、堿污染,未吸潮變質(zhì)。
3.指示劑法:一般指示劑多不易溶于水,配制指示劑溶液時(shí),應(yīng)先用少許堿液(如NaOH稀溶液)助溶后,再加蒸餾水稀釋到適當(dāng)濃度,以滿足指示劑顏色變化范圍,因?yàn)橹甘緞┑慕怆x質(zhì)點(diǎn)狀態(tài)與未解離質(zhì)點(diǎn)狀態(tài)呈現(xiàn)不同的顏色。
4.滴定法:氫氧化物溶液濃度必須標(biāo)準(zhǔn)。
5.pH汁法:應(yīng)經(jīng)常校準(zhǔn)pH計(jì),確保儀器在正常良好狀態(tài)下檢測(cè)。
(四)參考值
在正常飲食條件下,晨尿多偏弱酸性,多數(shù)尿標(biāo)本pH5.5~6.5,平均pH6.0。隨機(jī)pH4.5~8.0。尿可滴定酸度為20~40mmol/24h尿。
第5頁,共15頁,2024年2月25日,星期天二:尿液蛋白質(zhì)檢查(一)定義
尿液中蛋白質(zhì)超過150mg/24h或超過100mg/L時(shí),蛋白定性試驗(yàn)呈陽性,即稱為蛋白尿。
(二)檢測(cè)方法及評(píng)價(jià)
1.尿蛋白定性試驗(yàn):為蛋白尿的過篩試驗(yàn)。
(1)試帶法:利用pH指示劑的蛋白誤差原理。本法對(duì)清蛋白較敏感,對(duì)球蛋白不敏感,僅為清蛋白的1/100~1/50,且可漏檢本周蛋白。尿液pH增高可產(chǎn)生假陽性。本法快速、簡(jiǎn)便、易于標(biāo)準(zhǔn)化,適于健康普查或臨床篩檢。
(2)加熱乙酸法:為傳統(tǒng)的經(jīng)典方法,特異性強(qiáng)、干擾因素少。能同時(shí)檢出清蛋白及球蛋白尿,但敏感度較低,一般在0.15g/L左右。本法能使含造影劑尿液變清,可用于鑒別試驗(yàn)。
(3)磺基水楊酸法:又稱磺柳酸法。操作簡(jiǎn)便、反應(yīng)靈敏、結(jié)果顯示快,與清蛋白、球蛋白、糖蛋白和本周蛋白等均能發(fā)生反應(yīng);敏感度高達(dá)0.05~0.1g/L,因而有一定的假陽性。被NCCLS作為干化學(xué)法檢查尿蛋白的參考方法,并推薦為檢查尿蛋白的確證試驗(yàn)。
2.尿蛋白定量試驗(yàn)
檢查方法有:沉淀法、比色法、比濁法、染料結(jié)合法、免疫測(cè)定法和尿蛋白電泳法等。第6頁,共15頁,2024年2月25日,星期天(三)質(zhì)量控制
1.試帶法:必須使用標(biāo)準(zhǔn)合格的試帶,并嚴(yán)格按照注意事項(xiàng)操作(參見尿液分析儀及臨床應(yīng)用一章)。
2.加熱乙酸法:控制加酸量及鹽類濃度,加酸過少、過多,導(dǎo)致遠(yuǎn)離蛋白質(zhì)等電點(diǎn)時(shí),可使陽性程度減弱。如尿液鹽類濃度過低,又可致假陰性,此時(shí)可加飽和氯化鈉溶液1~2滴后,再進(jìn)行檢查。
3.磺基水楊酸法:使用某些藥物(如青霉素鉀鹽、復(fù)方新諾明、對(duì)氨基水楊酸等)及有機(jī)碘造影劑時(shí),以及尿內(nèi)含有高濃度尿酸、草酸鹽或粘蛋白時(shí),可呈假陽性反應(yīng)。此時(shí),可通過加熱煮沸后濁度是否消失予以鑒別。
4.注意方法間差異,加強(qiáng)質(zhì)量控制用于尿蛋白定量的各種方法之間存在較大差異;應(yīng)盡力作到:標(biāo)本、試劑合格,操作規(guī)范,結(jié)果有可比性。
(四)參考值
定性試驗(yàn):陰性。
定量試驗(yàn):<0.1g/L;或<0.15g/24h。
第7頁,共15頁,2024年2月25日,星期天三、尿液糖檢查(一)定義
正常人尿液幾乎不含或僅含微量葡萄糖,一般尿糖定性試驗(yàn)為陰性。尿糖定性試驗(yàn)呈陽性的尿液稱為糖尿,葡萄糖是尿糖的主要成分,偶爾亦可見乳糖、半乳糖、果糖、戊糖等。葡萄糖是否出現(xiàn)于尿液中,主要取決于3個(gè)因素:①血糖濃度;②腎血流量;③腎糖閾:當(dāng)血糖濃度超過8.88mmol/L時(shí),尿液中開始出現(xiàn)葡萄糖。
(二)檢測(cè)方法及評(píng)價(jià)
1.班氏法:利用葡萄糖的還原性,是傳統(tǒng)尿糖定性試驗(yàn)方法。本法是非特異性測(cè)定葡萄糖的試驗(yàn),可檢出多種尿糖,簡(jiǎn)便,但易受其他還原物質(zhì)干擾,傾向于淘汰。
2.試帶法:采用葡萄糖氧化酶法。本法檢測(cè)葡萄糖的特異性強(qiáng)、靈敏度高、簡(jiǎn)便快速,適用于自動(dòng)化分析。
3.薄層層析法:操作復(fù)雜、費(fèi)時(shí)、成本高,多用于臨床或基礎(chǔ)研究,臨床上一般情況少用。第8頁,共15頁,2024年2月25日,星期天(三)質(zhì)量控制
1.班氏法:試驗(yàn)前,必須首先煮沸班氏試劑,避免試劑變質(zhì)。維生素C可使其假陽性。
2.試帶法:①避免假陽性:假陽性可見于尿標(biāo)本容器殘留強(qiáng)氧化性物質(zhì)如漂白粉、次亞氯酸等或低比密尿等。②避免假陰性:尿液含有高濃度酮體、維生素C、阿斯匹林;使用氟化鈉保存尿液;標(biāo)本久置,葡萄糖被細(xì)菌或細(xì)胞酶分解,可引起假陰性。
3.容器清潔:不含氧化性物質(zhì)入漂白粉、次亞氯酸,否則易導(dǎo)致班氏法假陰性而試帶法假陽性。
4.高比密及高酮體尿:可使試帶法糖定性呈假陰性。
5.及時(shí)送檢:尿液必須信箋,若長(zhǎng)時(shí)間放置,細(xì)菌繁殖等造成假陰性結(jié)果。
(四)參考值定性試驗(yàn):陰性。定量:0.56~5.0mmol/24h。第9頁,共15頁,2024年2月25日,星期天四:尿液酮體檢查(一)定義
尿酮體(KET)是尿液中乙酰乙酸(占20%)、β-羥丁酸(占78%)及丙酮(占2%)的總稱。酮體是機(jī)體脂肪氧化代謝產(chǎn)生的中間代謝產(chǎn)物,當(dāng)糖代謝發(fā)生障礙、脂肪分解增高,酮體產(chǎn)生速度超過機(jī)體組織利用速度時(shí),可出現(xiàn)酮血癥,酮體血濃度一旦超過腎閾值,就可產(chǎn)生酮尿。
(二)檢測(cè)方法及評(píng)價(jià)
1.試帶法
基于傳統(tǒng)的濕化學(xué)亞硝基鐵氰化鈉法而設(shè)計(jì),是目前臨床上最常用的尿酮體篩檢方法。檢測(cè)過程簡(jiǎn)易快速,尤其適合于床邊檢驗(yàn)。應(yīng)注意不同試帶對(duì)丙酮和乙酰乙酸的靈敏度不一。
2.濕化學(xué)法
(1)Rothera法:在堿性條件下,亞硝基鐵氰化鈉可與尿中的乙酰乙酸、丙酮起反應(yīng)呈現(xiàn)紫色,但不與β-羥丁酸起反應(yīng)。
(2)Gerhardt法:高鐵離子(Fe3+)與乙酰乙酸的烯醇式基團(tuán)發(fā)生螯合,形成酒紅色復(fù)合物。
3.片劑法
基本原理為亞硝基鐵氰化鈉法。
(三)質(zhì)量控制
細(xì)菌在體內(nèi)外可導(dǎo)致乙酰乙酸的丟失;室溫保存,丙酮易丟失,密閉冷藏可避免揮發(fā),但試驗(yàn)時(shí)標(biāo)本應(yīng)置于室溫中恢復(fù)溫度后再檢測(cè)。(四)參考值
定性:陰性。定量:酮體(以丙酮計(jì))170~420mg/L;乙酰乙酸≤20mg/L。第10頁,共15頁,2024年2月25日,星期天五、尿液膽紅素檢查(一)概述
血漿膽紅素有3種:未結(jié)合膽紅素(UCB)、結(jié)合膽紅素(CB)和δ-膽紅素。成人每日平均產(chǎn)生250~350mg膽紅素,其中,約75%來自衰老紅細(xì)胞中血紅蛋白的分解,另25%主要來自骨髓內(nèi)未成熟紅細(xì)胞的分解及其他非血紅蛋白的血紅素分解產(chǎn)物。UCB不溶于水,在血中與蛋白質(zhì)結(jié)合不能通過腎小球?yàn)V膜。UCB入肝后在葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶作用下形成膽紅素葡萄糖醛酸,即為CB。CB相對(duì)分子質(zhì)量小,溶解度高,可通過腎小球?yàn)V膜由尿中排出。δ-膽紅素的反應(yīng)性與結(jié)合膽紅素相似,但它是未結(jié)合膽紅素與清蛋白通過非酶促反應(yīng)形成的共價(jià)結(jié)合物,通常在血漿中含量很低。當(dāng)血中CB增高,超過腎閾值時(shí),結(jié)合膽紅素即從尿中排出,尿膽紅素試驗(yàn)可呈陽性反應(yīng)。
(二)檢測(cè)方法及評(píng)價(jià)
1.重氮法
干化學(xué)試帶法多用此原理,操作簡(jiǎn)單,且可用于尿自動(dòng)化分析儀,目前多用此法作定性篩檢試驗(yàn),如果反應(yīng)不典型,應(yīng)進(jìn)一步分析鑒定。在尿液pH較低時(shí),某些藥物或其代謝產(chǎn)物如吡啶和依托度酸可引起假陽性反應(yīng);尿蘭母產(chǎn)生橘紅色或紅色而干擾結(jié)果。VitC濃度達(dá)1.42mmol/L和亞硝酸鹽存在時(shí),可抑制重氮反應(yīng)而假陰性。
2.氧化法
Smith碘環(huán)法最為簡(jiǎn)單,但靈敏度低,目前已很少使用;Harrison法操作稍繁,但靈敏度較高。
(三)質(zhì)量控制
膽紅素在陽光照射下易轉(zhuǎn)變?yōu)槟懢G素,因此檢測(cè)時(shí)應(yīng)使用新鮮尿液標(biāo)本,為避光宜用棕色容器收集標(biāo)本。VitC、亞硝酸鹽和某些藥物,可引起假陰性結(jié)果。
(四)參考值
定性:陰性。第11頁,共15頁,2024年2月25日,星期天六、尿液尿膽原和尿膽素檢查(一)概述
結(jié)合膽紅素排入腸腔轉(zhuǎn)化為尿膽原,從糞便中排出為糞膽原。大部分UBG從腸道重吸收經(jīng)肝轉(zhuǎn)化為結(jié)合膽紅素再排入腸腔,小部分UEG從腎小球?yàn)V過或腎小管排出后即為尿UBG。無色UBG經(jīng)空氣氧化及光線照射后轉(zhuǎn)變成黃色的尿膽素。尿膽紅素、UBG及尿膽素,俗稱尿三膽。由于送檢的標(biāo)本多為新鮮尿標(biāo)本,UBG尚未氧化成尿膽素,故一般檢查膽紅素和UBG,又俗稱尿二膽。
(二)檢測(cè)方法
1.尿膽原:①濕化學(xué)Ehrlich法:UBG在酸性溶液中,與對(duì)二甲氨基苯甲醛(Ehrlich試劑)反應(yīng),生成櫻紅色化合物。具體操作是:于試管中加新鮮尿液5ml,加Ehrlich試劑0.5ml,混勻,室溫下反應(yīng)10min,在白色背景下,直持試管,從管口向管底觀察反應(yīng)的色澤,如為陰性,可直接報(bào)告;如呈陽性反應(yīng),需將尿液稀釋后繼續(xù)試驗(yàn),報(bào)告出現(xiàn)陽性的最高稀釋倍數(shù)。②試帶法:檢測(cè)原理基于Ehrlich法。UBG檢測(cè)已成為尿分析儀試帶法分析項(xiàng)目組合之一,用于疾病的尿篩檢。采用Ehrlich醛反應(yīng)方法,可用于定性和定量。
2.尿膽素:用濕化學(xué)Schleisinger法。
第12頁,共15頁,2024年2月25日,星期天(三)質(zhì)量控制
1.尿膽原排出后易氧化為尿膽素,故應(yīng)以新鮮尿作及時(shí)檢查,否則導(dǎo)致結(jié)果假陰性。維生素C等還原性物質(zhì)易抑制Ehrlich法檢測(cè)尿膽原。
2.如尿中含有結(jié)合膽紅素,加Ehrlich試劑后顯綠色,干擾尿膽原檢測(cè)??杉勇然^溶液吸附膽紅素,離心沉淀后上清進(jìn)行Ehrlich試驗(yàn)。
3.尿膽原排出量每天波動(dòng)很大,夜間和上午量少,于午后2~4h達(dá)高峰,同時(shí)尿膽原的清除與尿pH相關(guān)。囑患者服碳酸氫鈉,堿化尿液,收集午后2~4h排出的尿液進(jìn)行測(cè)定,可提高尿膽原檢出的陽性率。(四)參考值
尿膽原定性:陰性或弱陽性(1:20稀釋后陰性)。尿膽素定性:陰性。第13頁,共15頁,2024年2月25日,星期天七、尿血紅蛋白檢查(一)概述
血紅蛋白為含
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