GB-T生物產品降解氨基甲酸酯類農藥功效評價技術規(guī)范征求意見稿

ICS07.080

A21

中華人民共和國國家標準

GB/TXXXXX—201X

生物產品降解氨基甲酸酯類農藥功效評價

技術規(guī)范

Technicalspecificationforefficacyevaluationof

Carbamatepesticidebiodegradation

（征求意見稿）

201X-XX-XX發(fā)布201X-XX-XX實施

中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局

中國國家標準1化管理委員會

GB/T××××—201×

GB/T××××—201×

生物產品降解氨基甲酸酯類農藥功效評價技術規(guī)范

1范圍

本標準規(guī)定了生物產品降解氨基甲酸酯類農藥的功效評價原理、試劑與材料、儀器設備與器具、分

析步驟和結果分析。

本標準適用于微生物和酶生物產品降解氨基甲酸酯類農藥的效果評價。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T15818培養(yǎng)基配置方法

NY/T761-2008降解產物氨基甲酸酯農藥的提取方法

GB23200.90-2016氨基甲酸酯農藥的液相色譜-質譜測定方法

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文本。

3.1

生物產品biologicproducts

利用生物技術獲得的微生物和酶產品。

3.2

氨基甲酸酯類農藥carbamatepesticides

為氨基甲酸的N-甲基取代酯類。

3.3

降解效果degradationeffect

生物產品降解能力。

4原理

1

GB/T××××—201×

生物產品對氨基甲酸酯類農藥降解處理后，經液液萃取，濃縮、定容后，采用液相色譜-質譜聯(lián)用

技術檢測，外標法定量。計算生物制品對氨基甲酸酯類農藥的降解效率。

5儀器和設備

5.1恒溫振蕩器：震動0-300r/min；溫控范圍，室溫-100℃。

5.2分光光度計：波長330nm-800nm。

5.3pH計：精度0.01。

5.4高速冷凍離心機：g。

5.5分析天平：精度0.0001g。

6試劑和材料

除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水為符合GB/T6682中規(guī)定的一級水。

6.1氨基甲酸酯類農藥

氨基甲酸酯類農藥純度≥99％。

6.2基礎液體培養(yǎng)基

按照GB/T15818中方法配制。

6.30.01mol/L磷酸鹽緩沖液，pH8.0

分別配制0.2mol/L的Na2HPO4和0.2mol/L的NaH2PO4，量取Na2HPO461mL,NaH2PO439mL,用3

mol/L的稀鹽酸和1mol/L的氫氧化鈉調節(jié)溶液pH備用。

7分析步驟

7.1試驗設計

不同類型生物產品降解氨基甲酸酯類農藥效果試驗設計應符合表1要求。

表1.生物產品降解有機磷類農藥效果試驗設計

產品種類

項目

微生物產品酶產品

1.供測樣品

處理設計2.失活樣品

3.空白對照

2

GB/T××××—201×

雜環(huán)甲基氨基甲酸酯類：克百威；

萘基氨基甲酸酯類：西維因；

氨基甲酸酯類農藥選擇

苯基氨基甲酸酯類：葉蟬散；

氨基甲酸肟酯類：涕滅威；

將有氨基甲酸酯類農藥標準物質用甲醇配制成100mg/L的儲

農藥處理

備溶液，4℃冷藏保存?zhèn)溆?/p>

重復次數(shù)不少于3次

降解反應條件按正交試驗結果確定

7.2供試微生物產品試驗實施

7.2.1培養(yǎng)基制備

選擇基礎培養(yǎng)基，或根據(jù)微生物特殊生長需要對培養(yǎng)基進行改良。

7.2.2供試樣品處理

塊狀固體產品應進行研磨處理。

7.2.3失活樣品處理

取供試的固體或液體微生物樣品進行121oC，30min殺菌處理。

7.2.4最佳反應體系確定

設計正交試驗，影響因素宜選取微生物添加量、反應溫度、反應轉速、反應時間、底物濃度等，確

定最佳反應體系條件。

7.2.5降解試驗

取250mL三角瓶9個，空白樣3個，供試樣品瓶3個，失活樣品瓶3個。按照最佳反應體系確定

的底物濃度，制備底物溶液，滅菌后備用。然后根據(jù)微生物添加量，制備成反應體系為100mL的培養(yǎng)

液，在最佳反應體系條件下進行降解反應。

7.3供測酶試驗實施

7.3.1供試樣品處理

固體酶產品應進行研磨處理，稱取一定質量的供測固體酶粉，采用不同pH的磷酸鹽緩沖液按要求稀

釋為不同濃度（g/mL）備用；若供測樣品為液體，用不同pH的磷酸鹽緩沖液按要求稀釋為不同濃度（mL/mL）

備用。

7.3.2失活樣品處理

取供試的固體或液體酶樣品在100oC環(huán)境下進行30min的去酶活處理。

7.3.3最佳反應條件確定

設計正交實驗，影響因素宜選擇酶濃度、底物濃度、反應溫度、反應時間、pH值等，確定最佳反

3

GB/T××××—201×

應體系條件。

7.3.4降解試驗

取25mL離心管9個，空白樣3個，供試樣品瓶3個，失活樣品瓶3個。按照最佳反應體系確定

的微生物添加量、底物濃度，制備成反應體系為10mL的反應液，在最佳反應體系條件下進行降解反

應。

7.4濃度測定

反應液按照NY/T761要求進行處理，然后按照GB23200.90要求進行測定。

8結果分析

8.1結果計算

降解率按照式（1）計算：

..............................(1)

(?????)???????(?????)

?=??×100%

式中：

R——降解率（%）；

Xi——底物原始濃度（mg/L）；

Xa——為供試樣品降解反應終點底物濃度（mg/L）；

Xb——為失活樣品降解反應終點底物濃度（mg/L）；

Xc——為空白樣品降解反應終點底物濃度（mg/L）。

以平行樣的平均值為最終的降解率值，計算結果保留到小數(shù)點后兩位。

8.2結果判定

以降解率的大小評價被測試生物產品的降解功效：降解率大于等于80%，小于100%時，降解效果為

好；降解率大于等于60%，小于80%時，降解效果為良好；降解率大于等于40%，小于60%時，降解效果為

較好；降