GB-T生物產(chǎn)品降解擬除蟲菊酯農(nóng)藥功效評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范征求意見稿

ICS07.080

A20/39

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/TXXXXX—XXXX

生物產(chǎn)品降解擬除蟲菊酯農(nóng)藥功效評(píng)價(jià)

技術(shù)規(guī)范

Technicalspecificationsforefficacyevaluationofdegradationof

pyrethroidsbybiologicalproducts

（征求意見稿）

201X-XX-XX發(fā)布201X-XX-XX實(shí)施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局

中國國家標(biāo)準(zhǔn)1化管理委員會(huì)

發(fā)布

2

生物產(chǎn)品降解擬除蟲菊酯類農(nóng)藥功效評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了生物產(chǎn)品降解擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的功效評(píng)價(jià)原理、試劑與材料、儀器設(shè)備

與器具、分析步驟和結(jié)果分析。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于微生物和酶生物產(chǎn)品降解擬除蟲菊酯類農(nóng)藥降解效果評(píng)價(jià)。

2規(guī)范性引用文件

本標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容引用了下列文件和其中的條款，凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本

適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB23200.85擬除蟲菊酯農(nóng)藥氣相色譜方法

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水

GB/T15818培養(yǎng)基配置方法

NY/T761-2008降解產(chǎn)物擬除蟲菊酯農(nóng)藥的提取方法

NY/788-2018相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差要求

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文本。

3.1

生物產(chǎn)品biologicproducts

利用生物技術(shù)獲得的產(chǎn)品。

3.2

擬除蟲菊酯類農(nóng)藥pyrethroids

模擬天然除蟲菊素合成的含有多個(gè)苯環(huán)結(jié)構(gòu)的農(nóng)藥。

3.3

降解效果degradationeffect

生物產(chǎn)品降解擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的能力。

4原理

3

用生物產(chǎn)品對(duì)擬除蟲菊酯類農(nóng)藥進(jìn)行處理，采用液液萃取法萃取生物制品降解反應(yīng)結(jié)束

后反應(yīng)體系中擬除蟲菊酯農(nóng)藥，用氣相色譜測定擬除蟲菊酯含量，計(jì)算生物產(chǎn)品對(duì)擬除蟲菊

酯類農(nóng)藥的降解率，評(píng)價(jià)生物產(chǎn)品降解擬除蟲菊酯農(nóng)藥的降解效果。

5試劑和材料

所有試劑除另有說明外，均為分析純，水為符合GB/T6682中規(guī)定的一級(jí)水。

5.1擬除蟲菊酯農(nóng)藥

擬除蟲菊酯農(nóng)藥純度均≥99％。

5.2基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基

按照GB/T15818中方法配制

5.30.01mol/L磷酸鹽緩沖液，pH8.0

分別配制0.2mol/L的Na2HPO4和0.2mol/L的NaH2PO4，量取Na2HPO461mL,NaH2PO439

mL,用3mol/L的稀鹽酸和1mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH備用。

6儀器和設(shè)備

6.1氣相色譜儀：配有電子轟擊源（EI）。

6.2分析天平：感量為0.0001g。

6.3離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于4000r/min。

6.4氮吹儀

6.5渦流混勻機(jī)

6.6生化培養(yǎng)箱

6.7氣浴恒溫振蕩器：轉(zhuǎn)速范圍，起動(dòng)-300r/min；溫控范圍，室溫-100℃。

6.9低溫冷凍多管離心機(jī)：轉(zhuǎn)速可達(dá)10000rpm以上。

6.10旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：轉(zhuǎn)速范圍：20-280rpm；恒溫鍋?zhàn)罡邷囟龋?85℃。

7分析步驟

7.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)

4

不同類型生物產(chǎn)品降解擬除蟲菊酯農(nóng)藥效果試驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)符合表1要求。

表1生物產(chǎn)品降解擬除蟲菊酯類農(nóng)藥效果試驗(yàn)設(shè)計(jì)

產(chǎn)品種類

項(xiàng)目

微生物產(chǎn)品酶產(chǎn)品

1.供測樣品

處理設(shè)計(jì)2.失活樣品

3.空白對(duì)照

按照結(jié)構(gòu)選擇4種：環(huán)丙烷羧酸類：甲氰菊酯；鹵

擬除蟲菊酯農(nóng)藥選擇代環(huán)丙烷羧酸類：氯氰菊酯；非環(huán)丙烷羧酸類：氟氰菊

酯；非羧酸酯類：肟醚菊酯。

擬除蟲菊酯農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品用正己烷配制成儲(chǔ)備溶液，

農(nóng)藥處理4℃保存?zhèn)溆茫囼?yàn)時(shí)稀釋成一定濃度的工作液，現(xiàn)用

現(xiàn)配。

重復(fù)次數(shù)不少于3次

降解反應(yīng)條件按正交試驗(yàn)結(jié)果確定

7.2供試微生物產(chǎn)品試驗(yàn)實(shí)施

7.2.1培養(yǎng)基制備

選擇基礎(chǔ)培養(yǎng)基，或根據(jù)微生物特殊生長需要對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行改良。

7.2.2供試樣品處理

塊狀固體產(chǎn)品應(yīng)進(jìn)行研磨處理。

7.2.3失活樣品處理

取供試的固體或液體微生物樣品進(jìn)行121oC，30min殺菌處理。

7.2.4最佳反應(yīng)體系確定

設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，影響因素宜選取微生物添加量、反應(yīng)溫度、反應(yīng)轉(zhuǎn)速、反應(yīng)時(shí)間、底物

濃度等，確定最佳反應(yīng)體系條件。

7.2.5降解試驗(yàn)

取250mL三角瓶9個(gè)，空白樣3個(gè)，供試樣品瓶3個(gè)，失活樣品瓶3個(gè)。按照最佳反

應(yīng)體系確定的底物濃度，制備底物溶液，滅菌后備用。然后根據(jù)微生物添加量，制備成反應(yīng)

體系為100mL的培養(yǎng)液，在最佳反應(yīng)體系條件下進(jìn)行降解反應(yīng)。

5

7.3供測酶試驗(yàn)實(shí)施

7.3.1供試樣品處理

固體酶產(chǎn)品應(yīng)進(jìn)行研磨處理，稱取一定質(zhì)量的供測固體酶粉，采用不同pH的磷酸鹽緩沖

液按要求稀釋為不同濃度（g/mL）備用；若供測樣品為液體，用不同pH的磷酸鹽緩沖液按要

求稀釋為不同濃度（mL/mL）備用。

7.3.2失活樣品處理

取供試的固體或液體酶樣品在100oC環(huán)境下進(jìn)行30min的去酶活處理。

7.3.3最佳反應(yīng)條件確定

設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)，影響因素宜選擇酶濃度、底物濃度、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間、pH值等，

確定最佳反應(yīng)體系條件。

7.3.4降解試驗(yàn)

取25mL離心管9個(gè)，空白樣3個(gè)，供試樣品瓶3個(gè)，失活樣品瓶3個(gè)。按照最佳反

應(yīng)體系確定的微生物添加量、底物濃度，制備成反應(yīng)體系為10mL的反應(yīng)液，在最佳反應(yīng)

體系條件下進(jìn)行降解反應(yīng)。

7.4濃度測定

反應(yīng)液按照NY/T761要求進(jìn)行處理，然后按照GB23200.85要求進(jìn)行測定。

8分析分析

8.1結(jié)果計(jì)算

降解率按照式（1）計(jì)算：：

..............................(1)

(?????)???????(?????)

?=??×100%

式中：

R——降解率（%）；

Xi——底物原始濃度（mg/L）；

Xa——為供試樣品降解反應(yīng)終點(diǎn)底物濃度（mg/L）；

Xb——為失活樣品降解反應(yīng)終點(diǎn)底物濃度（mg/L）；

Xc——為空白樣品降解反應(yīng)終點(diǎn)底物濃度（mg/L）。

以平行樣的平均值為最終的降解率值，計(jì)算結(jié)果保留到小數(shù)點(diǎn)后兩位。

8.2結(jié)果判定

以降解率的大小評(píng)價(jià)被測試生物產(chǎn)品的降解功效：降解率大于等于80%，小于100%時(shí)，

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降解效果為好；降解率大于等于60%，小于80%時(shí)，降解效果為良好；降解率大于等于40%，

小于60%時(shí)，降解效果為