GB-T生物產(chǎn)品中光合細(xì)菌測(cè)定征求意見稿

ICS07.080

A20/39

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/TXXXXX—201X

生物產(chǎn)品中光合細(xì)菌測(cè)定

Determinationofphotosyntheticbacteriainbiologicproducts

（征求意見稿）

201X-XX-XX發(fā)布201X-XX-XX實(shí)施

國家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局

發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

1

GB/T××××—201×

I

GB/T××××—201×

生物產(chǎn)品中光合細(xì)菌測(cè)定

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了生物產(chǎn)品中光合細(xì)菌生化測(cè)定和MNP標(biāo)記測(cè)定原理、試劑與材料、儀器與設(shè)備、操

作步驟及結(jié)果分析。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于生物產(chǎn)品中一種或多種紅螺菌科光合細(xì)菌的測(cè)定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本適應(yīng)于本標(biāo)準(zhǔn)。

GB4789.1食品安全國際標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)總則

GB4789.28食品微生物學(xué)檢驗(yàn)培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求

GB19489實(shí)驗(yàn)室生物安全通用安全

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T27405實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品微生物檢測(cè)

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

生物產(chǎn)品biologicproducts

利用生物技術(shù)獲得的產(chǎn)品。

3.2

光合細(xì)菌photosyntheticbacteria

一類能利用多種基質(zhì)，可營異養(yǎng)、自養(yǎng)或兼性營養(yǎng)的原核生物。

注：屬于細(xì)菌門真細(xì)菌綱紅螺菌目，包括紅螺菌科（Rhodospirillaceae）、著色菌科（Chromatiaceae）、綠硫菌

科（Chlorobiaceae）、綠色絲狀菌科（Chloroflexaceae）等4科。

3.3

單核苷酸多態(tài)性singlenucleotidepolymorphism，SNP

在基因組水平上由單個(gè)核苷酸引起的序列多態(tài)性。

1

GB/T××××—201×

3.4

多核苷酸多態(tài)性multiplenucleotidepolymorphism，MNP

一段核苷酸區(qū)域內(nèi)多個(gè)核苷酸引起的序列多態(tài)性。

3.5

覆蓋倍數(shù)averagecoverageofmarkers

檢測(cè)到的標(biāo)記的測(cè)序片段的數(shù)目。

3.6

檢出標(biāo)記detectedmarkers

覆蓋倍數(shù)大于50的標(biāo)記。

第一法培養(yǎng)法

4原理

將待分離的樣品進(jìn)行稀釋后，接種于選擇性培養(yǎng)基中，由單個(gè)細(xì)胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落。

隨機(jī)挑取平板中的5個(gè)菌落進(jìn)行生理生化鑒定，根據(jù)平板的菌落數(shù)及挑取菌落的生理生化鑒定結(jié)果，對(duì)

生物產(chǎn)品中的光合細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)。

5試劑和材料

本方法所用試劑均為分析純，除特殊說明外，實(shí)驗(yàn)用水均為GB/T6882規(guī)定的二級(jí)水。

5.1AT培養(yǎng)基：參見附錄A。

5.2光合細(xì)菌分離瓊脂：參見附錄A。

5.3磷酸鹽緩沖稀釋液：參見附錄A。

5.4革蘭氏染色液：參見附錄A。

6設(shè)備和器具

6.1光照恒溫培養(yǎng)箱：照度不小于2000lx。

6.2天平：精度為0.001g。

6.3真空過濾裝置。

6.4水相濾膜：微孔徑0.45μm。

6.5微需氧培養(yǎng)罐：能維持1%氧濃度的透明培養(yǎng)容器裝置。

6.6微量移液器。

6.7顯微鏡：最低100×。

7操作步驟

2

GB/T××××—201×

7.1樣品的稀釋

7.1.1固體樣品：稱取25g樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000r/min～10000r/min

均質(zhì)1min～2min，或放入盛有225mL稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min，

制成1:10的樣品勻液。

7.1.2液體樣品：以無菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液的無菌錐形瓶（瓶內(nèi)預(yù)置適

當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1:10的樣品勻液。

7.1.3用1mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1mL，沿管壁緩沖注入盛有9mL稀釋液的無

菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合

均勻，制成1:100樣品勻液。

7.1.4按6.1.3操作，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1次1mL無菌吸管或吸頭。

7.1.5根據(jù)對(duì)樣品中光合細(xì)菌數(shù)量的估計(jì)，選擇2個(gè)～3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原

液），在進(jìn)行10倍遞增稀釋時(shí)，吸取1mL樣品勻液于無菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。同時(shí)，分

別吸取1mL空白稀釋液加入兩個(gè)無菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。

7.1.6及時(shí)將15mL～20mL冷卻至46℃的光合細(xì)菌分離瓊脂培養(yǎng)基傾注平皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合

均勻。

7.2培養(yǎng)

待瓊脂凝固后，將平皿翻轉(zhuǎn)，將其置于微需氧培養(yǎng)罐中30℃±1℃光照培養(yǎng)5d。

7.3菌落計(jì)數(shù)

7.3.1可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計(jì)數(shù)以菌

落形成單位（colony-formingunits,CFU）表示。

7.3.2選取菌落數(shù)在30～300之間、無蔓延菌落生長的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。低于30CFU的平板記錄具

體菌落數(shù)，大于300CFU的可記錄為多不可計(jì)。每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。

7.3.3其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度

的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個(gè)平板后乘以2，

代表一個(gè)平板菌落數(shù)。

7.3.4當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長時(shí)，則將每條單鏈作為一個(gè)菌落計(jì)數(shù)。

3

GB/T××××—201×

7.4光合細(xì)菌的鑒定

7.4.1菌落挑選和純培養(yǎng)

挑取計(jì)數(shù)平板上5個(gè)菌落大、紅色、表面光滑、質(zhì)地柔軟、邊緣整齊的菌落分別接種于光合細(xì)菌分

離瓊脂平板，置微需氧培養(yǎng)罐中，30℃±1℃光照培養(yǎng)2～3d。

7.4.2形態(tài)學(xué)鑒定

挑取斜面上的純培養(yǎng)物，進(jìn)行染色鏡檢，光合細(xì)菌紅螺菌科中各屬的形態(tài)特征見附錄B.1。

7.4.3生化鑒定

使用細(xì)菌生化鑒定試劑盒進(jìn)行生化鑒定。紅螺菌科中代表屬種的生理生化鑒定特征見附錄B.2-B.6。

7.5結(jié)果計(jì)算

7.5.1光合細(xì)菌菌落的計(jì)算見公式（1）：

b

aC??????????????????????????????????????公式（1）

A

式中：

a——每塊平板上的某種特定光合細(xì)菌菌落數(shù)；

b——挑取后經(jīng)證實(shí)為某種特定光合細(xì)菌的菌落數(shù)；

A——挑取平板上用于驗(yàn)證的菌落數(shù)；

C——平板上的所有特征菌落數(shù)。

7.5.2菌落總數(shù)的計(jì)算方法

7.5.2.1若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平

均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每g（mL）樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。

7.5.2.2若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí)，按式（2）計(jì)算：

Ca

N····························（2）

n0.1nd5

12

式中：

N——樣品中某一種光合細(xì)菌的活菌數(shù)

C——平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和；

n1——第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)；

n2——第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)；

4

GB/T××××—201×

d——稀釋因子（第一稀釋度）；

a——7.4鑒定結(jié)果中某一種光合細(xì)菌的陽性數(shù)；

5——每個(gè)計(jì)數(shù)平板中挑出的5個(gè)菌落數(shù)；

7.5.2.3若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于300CFU，則對(duì)稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，其他平板可

記錄為多不可計(jì)，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。

7.5.2.4若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于30CFU，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)

計(jì)算。

7.5.2.4若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。

7.5.2.5若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30~300CFU之間，其中一部分小于30CFU或大于

300CFU時(shí)，則以最接近30CFU或300CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。

7.6菌落總數(shù)報(bào)告

7.6.1菌落數(shù)小于100CFU時(shí)，按“四舍五入”原則修約，以整數(shù)報(bào)告。

7.6.2菌落數(shù)大于或等于100CFU時(shí)，第3位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前2位數(shù)字，后面用

0代替位數(shù)；也可用10的指數(shù)形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。

7.6.3若所有平板上為蔓延菌落而無法計(jì)數(shù)，則報(bào)告菌落蔓延。

7.6.4若空白對(duì)照上有菌落生長，則此次檢測(cè)結(jié)果無效。

7.6.5稱重取樣以CFU/g為單位報(bào)告，體積取樣以CFU/mL為單位報(bào)告。

第二法MNP標(biāo)記法

8原理

利用多重PCR和二代高通量測(cè)序擴(kuò)增并檢測(cè)樣品的中MNP標(biāo)記位點(diǎn)，利用生物信息學(xué)軟件分析

測(cè)序產(chǎn)物，得出鑒定結(jié)果。

9試劑與材料

本方法所用試劑均為分析純，除特殊說明外，實(shí)驗(yàn)用水均為GB/T6882規(guī)定的一級(jí)水。

9.1多重PCR擴(kuò)增與文庫構(gòu)建試劑盒。

9.2高通量測(cè)序試劑盒。

9.3引物：見附錄C

10儀器與設(shè)備

10.1PCR擴(kuò)增儀。

5

GB/T××××—201×

10.2離心機(jī)，轉(zhuǎn)速可達(dá)12000rpm以上。

10.3電泳儀。

10.4凝膠成像儀。

10.5超微量分光光度計(jì)。

10.6實(shí)時(shí)定量PCR儀。

10.7高通量測(cè)序儀。

11操作步驟

11.1樣品要求

樣品在檢測(cè)前應(yīng)充分混勻，取少量樣品進(jìn)行總DNA的提取。

11.2樣品DNA提取

提取與純化的DNA溶液在260nm與230nm處的吸光度值的比值大于2.0；在260nm與280nm處的吸

光度值的比值介于1.7與1.9之間；DNA電泳主帶明顯，無明顯降解；無明顯RNA殘留。

11.3多重PCR擴(kuò)增與文庫構(gòu)建

按多重PCR擴(kuò)增與文庫構(gòu)建試劑盒的說明書進(jìn)行DNA質(zhì)控、多重PCR擴(kuò)增、文庫構(gòu)建與純化，且多

重PCR的擴(kuò)增循環(huán)數(shù)不高于20個(gè)。

11.4高通量測(cè)序

按高通量測(cè)序試劑盒和高通量測(cè)序儀的操作說明進(jìn)行高通量測(cè)序與測(cè)序質(zhì)控。

高通量測(cè)序的平均覆蓋倍數(shù)設(shè)置為700倍以上，測(cè)序長度大于標(biāo)記引物在參考基因組上的擴(kuò)增長度。

12實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)質(zhì)量控制

利用光合細(xì)菌鑒定軟件將樣品的測(cè)序數(shù)據(jù)比對(duì)到參考基因組的標(biāo)記位點(diǎn)上，統(tǒng)計(jì)標(biāo)記位點(diǎn)的平均覆

蓋倍數(shù)。

當(dāng)C1時(shí)，判定樣品的測(cè)序數(shù)據(jù)量不足，從11.4或之前的步驟開始重新實(shí)驗(yàn)。

當(dāng)C1<500時(shí)，判定測(cè)序數(shù)據(jù)合格。

13結(jié)果C判1≥定500

利用光合細(xì)菌鑒定軟件統(tǒng)計(jì)光合細(xì)菌的檢出標(biāo)記的數(shù)目N，并輸出判定結(jié)論。

若，判定結(jié)論為“待測(cè)樣品中不存在該光合細(xì)菌”；

若N=0或，判定結(jié)論為“待測(cè)樣品中可能存在該光合細(xì)菌”

若N=1，判N=定2結(jié)論為“待測(cè)樣品中存在該光合細(xì)菌”。

對(duì)于N≥判定3結(jié)論為“待測(cè)樣品中可能存在該光合細(xì)菌”的樣品，可采用本標(biāo)準(zhǔn)第一法進(jìn)行鑒定。

6

GB/T××××—201×

14防污染措施

樣品準(zhǔn)備、核酸提取、多重PCR擴(kuò)增與高通量測(cè)序在規(guī)定的區(qū)域按單一方向進(jìn)行操作且保持實(shí)驗(yàn)室

通風(fēng)良好。不同區(qū)域的儀器和設(shè)備應(yīng)專用。

7

GB/T××××—201×

附錄A

（資料性附錄）

培養(yǎng)基

A.1AT培養(yǎng)基

A.1.1基礎(chǔ)培養(yǎng)基成分

乙酸鈉3.0g

碳酸氫鈉1.0g

酵母膏2.0g

磷酸氫二鉀0.5g

氯化銨1.0g

氯化鎂0.2g

氯化鈉5.0g

乙二胺四乙酸鐵鈉1.0mL

蒸餾水1000mL

A.1.2微量元素添加液

A.1.2.1成分

氯化鐵1.8g

氯化鈷250mg

氯化鎳10mg

氯化銅10mg

氯化錳70mg

氯化鋅100mg

硼酸500mg

鉬酸鈉30mg

亞硒酸鈉10mg

A.1.2.2制法

上述鹽分別溶解到約900mL水中，用1mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH為2～3，定容至1L。

A.1.3維生素添加液

A.1.3.1成分

8

GB/T××××—201×

對(duì)-氨基苯甲酸20mg

生物素10mg

蒸餾水100mL

A.1.3.2制法

經(jīng)0.22μm濾膜過濾，保存在無菌容器中，冷藏保存。

A.1.4抗壞血酸添加液

A.1.4.1成分

抗壞血酸5.0g

蒸餾水100mL

A.1.4.2制法

經(jīng)0.22μm濾膜過濾，保存在無菌容器中，冷藏避光保存。

A.1.4.3制法

臨用前，1000mLA.1.1基礎(chǔ)液中添加1mLA.1.2微量元素添加液、1mLA.1.3維生素添加液和10mL

A.1.4抗壞血酸添加液，調(diào)節(jié)pH6.9±0.1，培養(yǎng)基經(jīng)0.45μm濾膜過濾，分裝到13mL滅菌螺口試管中，每

管裝液12mL。加入

A.1.5不同碳源AT培養(yǎng)基

將A1.1基礎(chǔ)液中乙酸鈉換為其他所需碳源，其他成分及制法同A1.4.3

A.2光合細(xì)菌分離瓊脂

A.2.1基礎(chǔ)培養(yǎng)基

A.2.1.1成分

乙酸鈉3.0g

碳酸氫鈉1.0g

酵母膏2.0g

磷酸氫二鉀0.5g

氯化銨1.0g

氯化鎂0.2g

氯化鈉5.0g

乙二胺四乙酸鐵鈉1.0mL

瓊脂粉10g

9

GB/T××××—201×

蒸餾水1000mL

A.2.1.2制法

除瓊脂外，將其余成分溶解于蒸餾水中，pH6.9，加入瓊脂，加熱溶解，定量分裝適宜容器，121℃

高壓滅菌15min。

A.2.2乙二胺四乙酸鐵鈉溶解

硫酸亞鐵557mg

乙二胺四乙酸二鈉鹽745mg

蒸餾水100mL

A.2.3光合細(xì)菌分離瓊脂制法

臨用前，將A.2.1基礎(chǔ)培養(yǎng)基融化，保溫于46℃水浴，1000mLA.2.1基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入5mLA.1.4

抗壞血酸添加液。搖勻后備用。

A.3磷酸鹽緩沖稀釋液

A.3.1貯存液

A.3.1.1成分

磷酸二氫鉀34.0g

蒸餾水500mL

A.3.1.2制法

用大約175mL的1mol/L氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)pH至7.2，用蒸餾水稀釋至1000mL后貯存于冰箱中。

A.3.2稀釋液

用蒸餾水稀釋1.25mL貯存液至1000mL，分裝于適宜容器中，121℃高壓滅菌15min。

A.4革蘭氏染色法

A.4.1結(jié)晶紫染色液

A.4.1.1成分

結(jié)晶紫1.0g

95%乙醇20mL

1%草酸銨水溶液80mL

A.4.1.2制法

10

GB/T××××—201×

將結(jié)晶紫完全溶解于乙醇中，然后與草酸銨溶液混合。

A.4.2革蘭氏碘液

A.4.2.1成分

碘1.0g

碘化鉀2.0g

蒸餾水300mL

A.4.2.2制法

將碘與碘化鉀先行混合，加入蒸餾水少許充分振搖，待完全溶解后，再加蒸餾水至300mL。

A.4.3復(fù)染液

A.4.3.1成分

沙黃0.25g

95%乙醇10mL

蒸餾水90mL

A.4.3.2制法

將沙黃溶解于乙醇中，然后用蒸餾水稀釋。

A.4.4染色法

A.4.4.1將涂片在火焰上固定，滴加結(jié)晶紫染色液，染色1min，水洗；

A.4.4.2滴加革蘭氏碘液，作用1min，水洗；

A.4.4.3滴加95%乙醇脫色，約30s，水洗；或?qū)⒁掖嫉螡M整個(gè)涂片，立即傾去，再用乙醇滴滿整個(gè)涂片，

脫色10s；

A.4.4.4水洗，滴加沙黃復(fù)染液，復(fù)染1min，水洗，待干，鏡檢。

A.4.4.5結(jié)果：革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。

11

GB/T××××—201×

附錄B

（規(guī)范性附錄）

光和細(xì)菌形態(tài)和生化特征

B.1紫色非硫細(xì)菌形態(tài)特征j見表B.1

表B.1紫色非硫細(xì)菌形態(tài)特征

特征紅螺菌屬紅假單胞菌屬紅微菌屬

培養(yǎng)液顏色紅色或棕色紅色棕色

細(xì)胞形態(tài)螺旋形或弧形球形或卵圓形球形或卵圓形

鞭毛極生鞭毛極生鞭毛周生鞭毛

B.2深紅紅螺菌生理生化特征見表B.2

表B.2深紅紅螺菌生理生化特征

鑒定項(xiàng)目特征深紅紅螺菌鑒定項(xiàng)目特征深紅紅螺菌

pH7.0+乙醇+

37℃-天門冬酰胺+

葡萄糖-硫代硫酸鈉-

丙氨酸+硫化鈉-

谷氨酰胺+

注：+表示不小于90%陽性,-表示陰性

B.3黃褐紅螺菌生理生化特征見表B.3

表B.3黃褐紅螺菌生理生化特征

鑒定項(xiàng)目特征黃褐紅螺菌鑒定項(xiàng)目特征黃褐紅螺菌

pH7.0+葡萄糖-

37℃-果糖-

苯甲酸鹽+糖醇-

琥珀酸鹽+硫代硫酸鹽-

乙醇+

注：+表示不小于90%陽性,-表示陰性

B.4沼澤紅假單胞菌生理生化特征見表B.4

表B.4沼澤紅假單胞菌生理生化特征

鑒定項(xiàng)目特征沼澤紅假單胞菌鑒定項(xiàng)目特征沼澤紅假單胞菌

pH5.5+檸檬酸+

37℃+硫代硫酸鈉+

葡萄糖-觸酶+

苯甲酸+氫化酶+

12

GB/T××××—201×

酒石酸+甲酸脫氫酶+

乙醇+

注：+表示不小于90%陽性,-表示陰性

B.5莢膜紅假單胞菌生理生化特征見表B.5

表B.5莢膜紅假單胞菌生理生化特征

鑒定項(xiàng)目特征莢膜紅假單胞菌鑒定項(xiàng)目特征莢膜紅假單胞菌

pH5.5+山梨醇-

25℃+亮氨酸-

果糖-硫代硫酸鈉-

葡萄糖+甘油-

甘露醇-氫化酶+

乙醇-甲酸脫氫酶+

注：+表示不小于90%陽性，-表示陰性

B.6球形紅假單胞菌生理生化特征見表B.6

表B.6球形紅假單胞菌生理生化特征

鑒定項(xiàng)目特征球形紅假單胞菌鑒定項(xiàng)目特征球形紅假單胞菌

pH6.0+山梨醇+

25℃+乙醇+

果糖+苯甲酸鈉-

葡萄糖+硫代硫酸鈉-

甘露糖+氫化酶+

甘油+甲酸脫氫酶+

注：+表示不小于90%陽性,-表示陰性

附錄C

13

GB/T××××—201×

（規(guī)范性附錄）

MNP標(biāo)記引物

MNP標(biāo)記引物見表C.1

表C.1MNP標(biāo)記引物

物種標(biāo)記位點(diǎn)編號(hào)引物類別引物序列（5'端到3'端）

正向引物GATGGGCGTCAAGGTCGA

沼澤紅假單胞菌1

反向引物ACCGGCTTCGGCATGAA

正向引物ATCAAGATCAACCACGAGACCCA

沼澤紅假單胞菌2

反向引物GAGACGTGGATCAGGCCTTC

正向引物CGGGTGCTGATGATGCTGT

沼澤紅假單胞菌3

反向引物ACGCCGTCGGTGCTTAAA

正向引物TCTTGCCGACCACGATCG

沼澤紅假單胞菌4

反向引物CGACCGAAGTCGAGGTCAAG

正向引物GGCGAAATCGTCGCCTG

沼澤紅假單胞菌5

反向引物GAGCACGCTTTGGACGAAC

正向引物ATCAACGCCTTCACCAACCC

沼澤紅假單胞菌6

反向引物CGGACCCGGATCGATCTTG

正向引物GGCACGCTGTTCACCTTC

沼澤紅假單胞菌7

反向引物CTTGATGTCGCCCTTGGC

正向引物TAACGGCTGGCATTCATCGTTTA

沼澤紅假單胞菌8

反向引物TGATACTGGAAGTCTTGAGTATGGCA

正向引物CCTGCTCGTCGGTCTTCATG

沼澤紅假單胞菌9

反向引物CGGTTGAACTCGCAGCTGAT

正向引物AAGTGGTGCTGGTCGGC

沼澤紅假單胞菌10

反向引物CGAGAACACCTGGCTCTTCTTG

正向引物CGGCACTTCCATGCCGA

沼澤紅假單胞菌11

反向引物GTCAACTTCGAAGAGCCGC

正向引物GGGAAATTGGAATGGGCGAAGAT

莢膜紅假單胞菌12

反向引物GGTCGATCAGCGTGCTGAA

正向引物GGAAGCGCGTCTGTTCAAATAC

莢膜紅假單胞菌13

反向引物TCGATGACCTTCCAGTTGATGAATTC

正向引物ATGCGGGAACGCGCAGATA

莢膜紅假單胞菌14

反向引物ATGGTCGGAGCGAGAGGAT

正向引物CGCGCAATACTACATGAACCAC

莢膜紅假單胞菌15

反向引物CCATGCCCAGACGTTCTTTCTT

正向引物TAGCGCACCACATCCTCG

莢膜紅假單胞菌16

反向引物ATCCCGGTGGCGGTGAAGA

正向引物CTGATCTTTGACGCCTGCG

莢膜紅假單胞菌17

反向引物AGGTGAATGCCCAGCGC

莢膜紅假單胞菌18正向引物TTGACCACCTGCACCAGCAT

14

GB/T××××—201×

反向引物AGCATGACCACGATCACCATG

正向引物CGGTCTGGGCAAGACCTA

莢膜紅假單胞菌19

反向引物GCTTGCCCAGATAGGTCGA

正向引物GCGATGCTGCGCAAGAAC

莢膜紅假單胞菌20

反向引物GTCGGCCTTCACCACCAGAC

正向引物GCCTGCAAGCGCAAGATC

莢膜紅假單胞菌21

反向引物CCGATCATCAC