T-CPMA 028-2023 人呼吸道合胞病毒感染診斷

準(zhǔn)Diagnosisforhumanrespiratorysyncytialvirus中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會發(fā)布T/CPMA028-2023 1 1 1 1 1 2 2 3 4 8 T/CPMA028-2023請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。床醫(yī)學(xué)研究中心/重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院、中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院病原生物學(xué)研究所、長春市兒童醫(yī)院、河南省疾病預(yù)防控制中心、甘肅省疾病預(yù)防控制中心、深圳市兒童醫(yī)院、中日友好醫(yī)院。T/CPMA028-2023人呼吸道合胞病毒是世界范圍內(nèi)引起5歲以下兒童、老年人及免疫低下人群急性下呼吸道感染最重要的病毒病原之一。人呼吸道合胞病毒感染后的臨床表現(xiàn)與其他呼吸道病毒感染引起的臨床表現(xiàn)難人呼吸道合胞病毒感染診斷3.1人呼吸道合胞病毒HumanrespiratorysyCPE：細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathicDEPC：焦碳酸二乙酯（diethylpyrocarboDFA：直接免疫熒光法（directimmunofluorescenceaDNA：脫氧核糖核酸（deoxyribonucleicacFBS：胎牛血清（fetalbovineserum）FITC：異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocyanHRSV：人呼吸道合胞病毒（humanrespiratorysyncytialIFA：間接免疫熒光法（indirecttimmunofluorescenceasIgG：免疫球蛋白G（immunoglobuPBS：磷酸緩沖鹽溶液（phosphatebuffersaliPBST：含0.1%Tween-20的磷酸緩沖鹽溶液(phosphatebuffersalineTween)RNA：核糖核酸(ribonucleicacRT-PCR：逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（reversetranscription-polymeras25.1.2學(xué)齡前期兒童5.1.3學(xué)齡期和青春期兒童5.1.4成人5.1.5老年人及有基礎(chǔ)疾病人群5.2.1呼吸道標(biāo)本中檢測HRSV特異性抗原陽性，詳細(xì)實驗流程按附錄A的規(guī)定執(zhí)行。體、肺炎支原體等引起的呼吸系統(tǒng)感染進(jìn)行鑒別診斷，見附錄C4A.1抗原檢測A.1.1.1標(biāo)本類型與處理A.1.1.2操作步驟吸取適量A.1.1.1中處理后的待檢標(biāo)本處理液加入到標(biāo)本檢測孔中，水平放置；或?qū)⒃嚰垪l浸漬區(qū)A.1.1.3結(jié)果判定A.1.2.1標(biāo)本類型與處理A.1.2.2操作步驟在生物安全柜內(nèi)，吸取15μLA.1.2.1中細(xì)胞懸液滴加在潔凈玻璃片上，）；A.1.2.3結(jié)果判定A.1.3.1標(biāo)本類型與處理5A.1.3.2操作步驟在待檢標(biāo)本片和對照玻片的細(xì)胞點位滴加約20μL1：500倍稀釋（用含1/40000伊文斯藍(lán)的母液和先用PBST沖洗掉玻片液體，后用PBST浸洗玻片2次；除去多余液體，在細(xì)胞點位滴加A.1.3.3結(jié)果判定A.1.4注意事項標(biāo)本采集后應(yīng)在4℃條件下運(yùn)送至實驗室進(jìn)行檢測，4℃保存時間宜不超過4發(fā)病初期或病程較長的患者以及成人，不宜進(jìn)行HRSV抗原檢測；凍存過的標(biāo)本不宜進(jìn)行HRSV抗標(biāo)本細(xì)胞數(shù)不足或源自呼吸道其他部位的標(biāo)本標(biāo)本檢測步驟應(yīng)在遵守質(zhì)量控制和生物安全防護(hù)要求的條件下進(jìn)行操作。應(yīng)制定實驗室質(zhì)量保證A.2核酸檢測A.2.1標(biāo)本的類型與處理使用國家食品藥品監(jiān)督管理總局注冊批準(zhǔn)的試劑盒或自動核酸提取儀進(jìn)行核酸提取。嚴(yán)格按照試劑盒說明書和/或自動核酸提取儀儀器使用說明以及質(zhì)量控制和實驗室生物安全防護(hù)要6A.2.3.2反應(yīng)體系及反應(yīng)條件A.2.3.3結(jié)果判定在儀器正常，同一實驗中陰性對照、陽性對A.2.4注意事項儀器噪音情況進(jìn)行調(diào)整。陰性對照為無典型S型擴(kuò)增曲線顯示；陽性對照呈典型S型擴(kuò)增曲線且CT值≤檢測步驟應(yīng)在同時遵循質(zhì)量控制和生物安全防護(hù)要求的條件下進(jìn)行A.3血清學(xué)檢測A.3.1血清標(biāo)本的采集與處理用真空負(fù)壓無抗凝劑的采血管采集血液標(biāo)本3mL～5mL，室溫靜置30min，250×g（1500r/min）~7表1ELISA法檢測HRSVIgG抗體微量孔A.3.2.7每孔內(nèi)加入100μL終止液，輕微振蕩微孔板以混合溶液。A.3.2.8讀取OD值：以底物空白孔為空白對照，60min內(nèi)讀取OD值。A.3.3結(jié)果判定根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)血清OD值計算CUT-OFF值上限和下限，根據(jù)試劑——標(biāo)本OD值≥CUT-OFF值上限，結(jié)果判定——標(biāo)本OD值＜CUT-OFF值下限,結(jié)果判A.3.4注意事項底物空白孔的OD值必須＜0.25；陰性對照必須為陰性；標(biāo)準(zhǔn)血清的平均OD值必須在有效范圍內(nèi)，應(yīng)制定實驗室質(zhì)量保證計劃和實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制制度。使用國家食品藥品監(jiān)督管理總局注冊批8敏感細(xì)胞系為異倍體細(xì)胞或二倍體細(xì)胞，如人喉癌上皮細(xì)胞Hep-2HRSV連續(xù)傳代，中間不應(yīng)凍化。復(fù)蘇時，將加入保護(hù)劑即FBS或蔗糖的毒株，經(jīng)20倍稀釋后接種9HRSV毒株或標(biāo)本需要放置于-70℃冰箱保存。96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中每孔加入0.1mLHe）；），棄96孔細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)培養(yǎng)液，陰性對照每孔加入200μL維持液，平行待檢血清平行做4個副孔，每孔加入100μL相應(yīng)稀2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，逐天觀察并記錄CPE至第7d。用Karber法或Reed-Muench法計算待檢血清的中和終點（即能夠保護(hù)50%細(xì)胞不受100CCID50病毒定的保護(hù)性，抗體滴度越高說明抗HRSVHRSVA（擴(kuò)增片段長度為540bp上游引物5’-GAAGTGTTCAACTTTGTACC-3’下游引物5’-CAACTCCATTGTTATTTGCC-3’HRSVB（擴(kuò)增片段長度為550bp上游引物5’-AAGATGATTACCATTTTGAAGT-3’下游引物5’-CAACTCCATTGTTATTTGCC-3’文庫完成后采用熒光染料法檢測濃度，同時通過熒光PCR法檢測文庫中有效連度。建庫后文庫的濃度應(yīng)不低于測序平臺上機(jī)要求的最低濃狀較輕，抗菌藥物治療無效，早期應(yīng)用抗流感病毒藥不同種鼻病毒引起的毛細(xì)支氣管炎臨床表現(xiàn)略不同，A種和感染鼻病毒可引起反復(fù)喘息甚至哮喘發(fā)生。依據(jù)病原學(xué)檢查可確好發(fā)于晚冬和春季，流行高峰與HRSV同步或稍后。相較于HRSV感染，人偏肺病毒感染患兒年齡染中毒癥狀重、呼吸衰竭等，早期咽部可出現(xiàn)石灰點樣分泌物。依據(jù)病原學(xué)檢查可確攣性咳嗽。病程可持續(xù)2周甚至更長。多數(shù)患兒精神狀況良好，多無氣促和呼吸困難。年長兒肺部體征T/CPMA028-2023[1]T/CPMA010—2020，[3]YuJ,LiuC,XiaoY,etal.RespiratorySrespiratorytractinfectionsinChinesechildren:ameta-analysis[J].TranslPediatr.2020;9(4):49[5]崔愛利,朱貞,毛乃穎,等.2009—2021年中國九省份發(fā)熱呼吸道癥候[6]SongJ,ZhuZ,SongJ,etal.CircvirusinChinaduring2008-2021.JMedVirol.2023;10.1002/jmv.28611.[7]LuoQ,LiM,LiA,etal.Geneticdiversityandepidemiologicalfeaturesofrespiratorysyncytialvirus,Beijing,2015-2019:Amulticenterandall-agegroupsstudy.[9]ChartrandC,TremblayN,RenaudC,PapenburgJ.DiagnosticaccuracyofrapidaOptionsforPreventionandTreatment[J].ClinMicrobiolRev.2017,30:2fordiagnosisofrespiratory