實(shí)驗(yàn)紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量

分光光度法1實(shí)驗(yàn)紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量5/8/20242實(shí)驗(yàn)紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量5/8/2024分光光度法的原理Lambert-Beer定律（光吸收定律）溶液的質(zhì)量濃度（C）越大，液層厚度（L）越厚，則溶液對(duì)光線吸收得越多。當(dāng)入射波長、液層厚度和溶液溫度一定時(shí)（即K吸光系數(shù)為定值），溶液對(duì)光線的吸收與溶液中吸光物質(zhì)的濃度成正比。

所以可通過測量溶液的吸光度來求得被測組分的含量。

入射光

I0出射光It反射光

IrIa吸收光3實(shí)驗(yàn)紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量5/8/2024It／I0＝

TT（

transmittance）稱為透光度，表示透過光的強(qiáng)度是入射光強(qiáng)度的百分比。A∝C光密度與濃度成正比T與C成反比，濃度愈大，T愈小A=-lg=KCLT

A（Absorbance）稱為吸光度，指溶液對(duì)光線的吸收程度又稱為光密度（Opticaldensity，OD）。4實(shí)驗(yàn)紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量5/8/2024分光光度法的應(yīng)用用標(biāo)準(zhǔn)管法計(jì)算待測液濃度在相同條件下測定已知濃度（CS）標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度（AS），及未知濃度（CU）溶液的吸光度（AU），根據(jù)定律得：

AU=KUCULU

；

AS=KSCSLS

因?yàn)镵U=KS，

LU=LS

所以AS與AU之比值也等于兩濃度之比值即AU/AS=CU/CS

，CU=AUAS×CS5實(shí)驗(yàn)紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量5/8/2024分光光度法的應(yīng)用

用標(biāo)準(zhǔn)曲線法求出待測溶液的濃度先配制一系列已知濃度的測定物溶液，分別測得各管的吸光度。以各管吸光度為縱坐標(biāo)，測定物含量為橫坐標(biāo)；在方格坐標(biāo)紙上作圖即得標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。吸光度A蛋白質(zhì)濃度C（μg/ml）0.20.40.6....40801201606實(shí)驗(yàn)紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量5/8/2024分光光度法分光光度法是利用物質(zhì)所特有的吸收光譜來鑒別物質(zhì)或測定其含量的一項(xiàng)技術(shù)。特點(diǎn)：分光光度法靈敏度較高、精確度高、操作簡便、快速。分光光度法所使用的光譜范圍主要是波譜圖中200～1000nm為一段波長的光譜。紫外光區(qū)200～400nm可見光區(qū)400～760nm

紅外光區(qū)760～1000nm7實(shí)驗(yàn)紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量5/8/2024么么么么方面Sds絕對(duì)是假的8實(shí)驗(yàn)紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量5/8/2024么么么么方面Sds絕對(duì)是假的9實(shí)驗(yàn)紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量5/8/2024分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)光源單色光器吸收池測光機(jī)構(gòu)鎢絲燈氫燈氘燈棱鏡衍射光柵玻璃比色杯石英比色杯硒光電池光電管光電倍增管

將光能轉(zhuǎn)變?yōu)殡娔?，光電流的?qiáng)弱與溶液的吸光量強(qiáng)弱有關(guān)。10實(shí)驗(yàn)紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量5/8/202411實(shí)驗(yàn)紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量5/8/2024開機(jī)，預(yù)熱20~30分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)波長旋鈕，調(diào)所需波長。調(diào)零測量并讀數(shù)結(jié)束/關(guān)機(jī)清洗比色杯，收拾好儀器及配件，蓋上防塵蓋，登記儀器使用登記本。12實(shí)驗(yàn)紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量5/8/2024分光光度計(jì)使用的注意事項(xiàng)試管架或試劑瓶不得放置于儀器上，以防試劑濺出腐蝕機(jī)殼。拉桿動(dòng)作要輕，防溶液濺出，腐蝕機(jī)件。比色杯應(yīng)與分光光度計(jì)相配對(duì)，禁止隨意挪用。比色杯應(yīng)持其側(cè)壁的毛玻璃面。盛液時(shí)不能太滿（約達(dá)比色杯2/3體積），外壁如有液體，只能用濾紙沾去水份，再用擦鏡紙擦干凈。測畢，比色液一般應(yīng)倒回原試管中，直至計(jì)算無誤后方可倒掉。13實(shí)驗(yàn)紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量5/8/2024原理大多數(shù)蛋白質(zhì)都含有色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)和苯丙氨酸(Phe)。這些氨基酸有苯環(huán)共軛雙鍵，在紫外光區(qū)280nm顯示最大光吸收，且吸光度與濃度成正比。蛋白質(zhì)定量——紫外分光光度法14實(shí)驗(yàn)紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量5/8/2024試劑配制表（ml）試管012345標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液（1mg/ml）——0.51.52.54.01.0（待）蒸餾水4.03.52.51.5——3.0濃度00.1250.3750.6251A280蛋白質(zhì)定量——紫外分光光度法15實(shí)驗(yàn)紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量5/8/20241.標(biāo)準(zhǔn)管法（以第三管為標(biāo)準(zhǔn)管）蛋白質(zhì)定量——紫外分光光度法結(jié)果處理A測A標(biāo)×C標(biāo)×4（稀釋倍數(shù)）C測=2