MDCK細(xì)胞流感疫苗的安全性

MDCK細(xì)胞流感疫苗的

安全性SolvayPharmaceuticalsPresentationtoVRBPACNovember16,2005.5/9/20240MDCK細(xì)胞流感疫苗的安全性目錄Solvay公司的背景和流感疫苗Solvay公司開(kāi)發(fā)MDCK流感疫苗的計(jì)劃MDCK細(xì)胞疫苗的安全性結(jié)論.SolvayPharmaceuticals簡(jiǎn)介Solvay藥業(yè)是SolvayGroup的一部分名列全球前40家的大藥廠有12,800員工2004年銷(xiāo)售額為:28億美元研究和開(kāi)發(fā)的主要地點(diǎn)Marietta,GA法國(guó):DijonandParis德國(guó):Hanover荷蘭:Weesp,.SolvayPharmaceuticals和Influenza疫苗雞胚流感疫苗本公司是歐洲第一家生產(chǎn)流感疫苗的廠家(1950)55年來(lái)生產(chǎn)從位間斷總生產(chǎn)量>2.5億劑量全球第四大流感疫苗供應(yīng)廠家;超過(guò)50個(gè)國(guó)家.SolvayPharmaceuticals和Influenza疫苗Solvay公司生產(chǎn)的雞胚疫苗供應(yīng)國(guó)家分布在全球荷蘭Weesp流感疫苗生產(chǎn)設(shè)施美國(guó)總部

Marietta,GA.Whyacell-basedvaccineproject?雞胚疫苗是開(kāi)放性生產(chǎn)系統(tǒng),易于污染由于會(huì)發(fā)生禽病,雞胚可能不會(huì)保證供應(yīng)

.為何使用MDCK細(xì)胞?對(duì)流感病毒的敏感譜廣;在流感的研究和檢測(cè)中有扎實(shí)的經(jīng)驗(yàn)病毒產(chǎn)量高在經(jīng)濟(jì)上合算病毒純度高

.SolvayPharmaceuticals公司的MDCK

細(xì)胞流感疫苗計(jì)劃已經(jīng)有10年以上的經(jīng)驗(yàn)

微載體,無(wú)血清進(jìn)行了臨床前和臨床開(kāi)發(fā)計(jì)劃獲得荷蘭的許可商業(yè)性生產(chǎn)規(guī)模設(shè)施將獲得商業(yè)性生產(chǎn)許可,接著是全球許可,包括美國(guó).SolvayPharmaceuticals公司生產(chǎn)

MDCK疫苗的設(shè)施荷蘭SolvayPharmaceuticals公司(Weesp城).細(xì)胞系的潛在性風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行了定性和定量的檢定在下游生產(chǎn)過(guò)程中(DSP)量化減少了這些風(fēng)險(xiǎn)保留在接種者疫苗成份中MDCK細(xì)胞的殘留物的潛在風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行了定量CBER’sDefined-RisksApproachLewisAMJr,KrauseP,PedenK.DevBiol.2001,vol106,pp513-535MDCK細(xì)胞的安全性評(píng)估.細(xì)胞系的檢定生產(chǎn)的下有過(guò)程終產(chǎn)品的安全性MDCK細(xì)胞安全性評(píng)估.MDCK細(xì)胞安全性評(píng)估細(xì)胞系的特征傳代歷史可能的外來(lái)因子,包括病原體致癌性.1a.細(xì)胞系的特征–歷史未污染牛海綿狀(組織)腦病樣的病原(BovineSpongiformEncephalopathy-likeagents)1958:從狗腎分離1964:存放在美國(guó)ATCC1991:在ATCC制備日常儲(chǔ)備1992:制備主細(xì)胞庫(kù)和工作細(xì)胞庫(kù).1a.細(xì)胞系特征-傳代歷史傳代用于疫苗生產(chǎn)

0:從狗腎分離49:儲(chǔ)存在美國(guó)ATCC52:制備成ATCC工作日常儲(chǔ)備庫(kù)存97:制備延長(zhǎng)的細(xì)胞庫(kù)56:制備成主細(xì)胞系庫(kù)57:制備成工作細(xì)胞庫(kù)傳代用于安全性評(píng)估.1b.細(xì)胞系特征–外源因子Adventitiousagents支原體無(wú)細(xì)菌和真菌在試管內(nèi)在檢測(cè)細(xì)胞系中共培養(yǎng)在機(jī)體水平檢測(cè)不同的種類(lèi)電鏡檢查反轉(zhuǎn)錄病毒檢測(cè)在Solvay公司的MDCK細(xì)胞中未發(fā)現(xiàn)有外源性微生物.特異性檢測(cè)自然感染的狗病毒特異性檢測(cè)對(duì)MDCK細(xì)胞敏感的病毒1b.細(xì)胞系特征–外源因子在Solvay公司的MDCK細(xì)胞中未發(fā)現(xiàn)有外來(lái)的病毒感染.1c.細(xì)胞系特征

–致癌性表型特征在動(dòng)物模型上腫瘤形成

疫苗成品檢測(cè)完整細(xì)胞

細(xì)胞成份殘余細(xì)胞DNA

在疫苗接種者中似無(wú)同種異體移植物排斥.完整細(xì)胞潛在的致瘤性

在成熟免疫缺損的4周裸鼠中研究6個(gè)月細(xì)胞溶離液的潛在的致瘤性

在成熟和新生的裸小鼠,新生的大鼠和新生的地鼠中觀察6個(gè)月DNA潛在的致癌性在成熟和新生的裸小鼠,新生的大鼠和新生的地鼠中觀察6個(gè)月1c.細(xì)胞系特征–致瘤性.完整細(xì)胞:在4周裸鼠研究6個(gè)月

完全消退---0/26101MDCK,p98sacsac10925/26陽(yáng)性對(duì)照(107HeLa)230223/26107MDCK,p56(ATCC)4272830/30107MDCK,p9856218/26105MDCK,p98---0/26103MDCK,p98---0/26陰性對(duì)照6mos40days瘤狀物大小(mm2)發(fā)病率1c.細(xì)胞系特征

–致瘤性.完整細(xì)胞:在4周裸鼠6個(gè)月的研究

注射部位瘤狀物在注射部位腫瘤(MDCK腺癌)脾臟腫瘤(hystiocytictumor)肺部腫瘤(腺瘤)陰性對(duì)照0/26---101MDCK,p980/26-1*-103MDCK,p980/26---105MDCK,p9818/266--107MDCK,p9830/3016-1107MDCK,p56(ATCC)23/26--11c.細(xì)胞系特征

–致瘤性*Non-MDCK.107

個(gè)細(xì)胞溶離液:6個(gè)月致癌性研究試驗(yàn)組數(shù)量在注射部位瘤狀物其它組織腫瘤4w+0-4d裸鼠細(xì)胞溶離液6800陰性對(duì)照50000-7d地鼠細(xì)胞溶離液9800陰性對(duì)照54000-7d大鼠細(xì)胞溶離液9100陰性對(duì)照58001c.細(xì)胞系特征

–致瘤性.0.1mgMDCK-DNA:6個(gè)月致癌性研究結(jié)果實(shí)驗(yàn)組數(shù)量在注射部位的瘤狀物其它組織腫瘤4w+0-4d裸鼠0.1mgDNA4802陰性對(duì)照48000-7d地鼠0.1mgDNA6400陰性對(duì)照48000-7d大白鼠0.1mgDNA6900陰性對(duì)照39001c.細(xì)胞系特征

–致瘤性.DNA研究腫瘤的特征組織病理1只鼠:肝臟的組織細(xì)胞瘤1只鼠:胸腔淋巴瘤在免疫缺損裸鼠沒(méi)有未意料到的自發(fā)性腫瘤1c.細(xì)胞系特征

–致瘤性.追蹤研究MDCK細(xì)胞DNA在裸鼠較大量的研究大白鼠胚胎和新生的安全性研究1c.細(xì)胞系特征

–致瘤性.劑量在≥105時(shí)在免疫缺損動(dòng)物有中等程度的致瘤性大部分的瘤狀體部分消退,劑量在105時(shí)有5/25,107

時(shí)有4/28完全消退傳代數(shù)增加和/或適應(yīng)于無(wú)血清培養(yǎng)生長(zhǎng)時(shí)致瘤性增加在98代時(shí)符合MDCK細(xì)胞的文獻(xiàn)記載1c.細(xì)胞系特征

–致瘤性–總結(jié)

.在免疫功能正常的動(dòng)物未觀察到有致瘤性107MDCK細(xì)胞溶離液無(wú)致瘤性0.1mgMDCK-DNA不認(rèn)為是有致癌性;證實(shí)試驗(yàn)已經(jīng)啟動(dòng)進(jìn)行1c.細(xì)胞系特征

–致瘤性–總結(jié).MDCK細(xì)胞安全性評(píng)價(jià)1. 細(xì)胞系特征下游工程(DSP)消除完整細(xì)胞消除細(xì)胞DNA.MDCK疫苗生產(chǎn)流程.2a.DSP–消除完整細(xì)胞.

2a.DSP–消除完整細(xì)胞完整細(xì)胞10log清除系數(shù)中試規(guī)模

生產(chǎn)規(guī)模均質(zhì)化-正在確認(rèn)離心3.6去污劑處理≥3.6超離≥3.60.22μ

過(guò)濾x3≥3.6總計(jì)≥21.4.

2b.DSP–消除DNABenzonaseBenzonase.

2b.DSP–消除DNA

規(guī)格:<10納克/劑量DNA含量content清除系數(shù)中試規(guī)模生產(chǎn)規(guī)模DNA消化151證實(shí)試驗(yàn)正在進(jìn)行(包括含量和大小)DNA消化288去污劑處理/

超離168全部清除760,000.2.DSP–總結(jié)足夠的純化和試驗(yàn),保證疫苗的安全性根據(jù)最近的科學(xué)知識(shí)和管理手冊(cè),Solvay公司正在進(jìn)行申報(bào).MDCK細(xì)胞安全性評(píng)價(jià)細(xì)胞系特征生產(chǎn)下游過(guò)程終產(chǎn)品的安全性臨床前經(jīng)驗(yàn)臨床經(jīng)驗(yàn).MDCK細(xì)胞疫苗–臨床前研究

動(dòng)物途徑劑量(

gHA)局部耐受性大白鼠,家兔s.c./i.m./i.v.45系統(tǒng)毒性大白鼠,家兔s.c.45,75,450熱原家兔i.v.45潛在的致突變小鼠s.c.45主動(dòng)和被動(dòng)休克豚鼠s.c.誘導(dǎo)i.v.攻擊45.MDCK細(xì)胞疫苗–臨床前研究局部耐受無(wú)局部刺激

系統(tǒng)毒性無(wú)副反應(yīng)熱原體溫?zé)o明顯增加致突變小核數(shù)量不增加過(guò)敏無(wú)活性過(guò)敏被動(dòng)過(guò)敏優(yōu)于雞胚疫苗.MDCK細(xì)胞疫苗–臨床研究14隨機(jī)雙盲研究

1,023例接種MDCK亞單位疫苗人群:18-60,>60,對(duì)流感合并癥的高危人群,遺傳過(guò)敏者和對(duì)雞胚過(guò)敏者主要目標(biāo):比現(xiàn)有的雞胚同類(lèi)疫苗的免疫原性和安全性相當(dāng)..MDCK細(xì)胞疫苗–臨床研究局部和系統(tǒng)的抗原反應(yīng)性與雞胚疫苗相當(dāng)副反應(yīng)較小和小于注射的活疫苗未發(fā)現(xiàn)意外的安全性問(wèn)題免疫原性不降低

MDCK細(xì)胞疫苗的免疫原性和安全性與雞胚疫苗相當(dāng).結(jié)論Solvay公司的MDCK細(xì)胞是生產(chǎn)流感滅活疫苗的安全細(xì)胞采用MDCK細(xì)胞疫苗可以改進(jìn)流感疫苗的供應(yīng),增加流感大流行的儲(chǔ)備

Solvay公司將獲得全球?qū)＠?包括美國(guó).參加者IrisdeBruijn,Ph.D.GlobalClinicalDirector,InfluenzaVaccinesEdGeuns,Pharm.D.Director,RegulatoryAffairsMichaelHare,B.S.Manager,RegulatoryAffairsAlexKersten,D.V.M.SeniorScientist,

Pre-ClinicalDevelopmentJeroenMedema,MSc.SeniorScientist,VaccinesPeterFinn,MRCVS.,FRCPath.ConsultantMichaelWilliams,B.S.VicePresident,ViralProduc