使用高效液相色譜法鑒別藥品P

主講老師：陳郁生物制藥技術(shù)專業(yè)教學資源庫高效液相色譜法檢測

高效液相色譜法系采用高壓輸液泵將規(guī)定的流動相泵入裝有填充劑的色譜柱，對供試品進行分離測定的色譜方法。----《中國藥典》2020版HPLC----HighPerformanceLiquidChromatography

高效液相色譜法（HPLC）具有高壓、高效、高速、高靈敏度、高選擇性等特點，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、環(huán)保、石化、食品、化工等行業(yè)，是現(xiàn)在分離分析的重要方法高效液相色譜法及其應(yīng)用高效液相色譜法鑒別

一般規(guī)定按供試品含量測定項下的高效液相色譜法操作條件進行試驗。要求供試品和對照品色譜峰的保留時間應(yīng)一致。含量測定方法為內(nèi)標法時，可要求供試品溶液和對照品溶液色譜圖中藥物峰的保留時間與內(nèi)標物色譜峰的保留時間比值應(yīng)相同。高效液相色譜法檢測的原理樣品及對照品溶液配制

采用合適的樣品前處理方法1.取樣應(yīng)具代表性，每片重量不完全一致，分析時一般取片劑20片或按規(guī)定取樣（糖衣取10片或按規(guī)定取樣，除去糖衣），計算平均片重。2.視具體產(chǎn)品規(guī)定，將片劑直接投片溶解，或研細（研缽材質(zhì)選擇），精密稱取細粉適量，加入稀釋劑適量溶解。樣品及對照品溶液配制3.選適當方法如振搖、超聲等物理手段使待測成分溶解完全。4.繼續(xù)加稀釋劑至刻度，搖勻。選擇適宜的濾膜，過濾棄去一定體積的初濾液，取續(xù)濾液；或者離心取上清液。轉(zhuǎn)入經(jīng)潤洗過的進樣小瓶，作為樣品溶液。5.精密稱取適量對照品，用稀釋劑溶解，定容，搖勻，轉(zhuǎn)入經(jīng)潤洗過的進樣小瓶，作為對照品溶液。流動相配制1.根據(jù)待測樣品檢測方法配制所需流動相溶液。2.將配好的流動相溶液進行過濾（濾膜選擇）。3.流動相使用前應(yīng)進行脫氣。上機檢測1.按產(chǎn)品要求編輯序列（檢測方法、進樣針數(shù)、樣品位置、樣品批號……），將待測溶液放于樣品盤中相應(yīng)位置2.儀器充分平衡后，運行序列。3.實驗結(jié)束后，色譜柱沖洗保護系統(tǒng)穩(wěn)定性a.系統(tǒng)適用性：進樣品溶液前需確定系統(tǒng)適用性符合要求（如對照品溶液峰面積的RSD、系統(tǒng)適用性溶液的理論塔板數(shù)、分離度、拖尾因子……）b.進樣過程中系統(tǒng)穩(wěn)定性01流動相一定配足量并有盈余，溶劑過濾器一定要放到流動相瓶的底部；流動相配制過程中，所用的各種試劑要色譜純及以上的純度；流動相要過濾，脫氣。02樣品前處理中若要研磨和過濾的，則研磨的研缽以及過濾的濾膜一定要選擇合適的材質(zhì)，不能對樣品檢測有干擾。03編輯序列時，一定注意序列中的樣品位置和進樣盤中樣品實