HYT 078-2005 海洋生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)程

中華人民共和國(guó)海洋行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)海洋生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)程Technicalspecificationofmarinebiologicalqualitymonitoring2005-05-18發(fā)布 I Ⅱ 2規(guī)范性引用文件 3監(jiān)測(cè)方案設(shè)計(jì) 3.1監(jiān)測(cè)生物 3.2測(cè)站布設(shè) 3.2.1布設(shè)原則 3.2.2布站方法 3.3監(jiān)測(cè)頻率和時(shí)間 3.4監(jiān)測(cè)項(xiàng)目 24.1樣品采集 4.1.1樣品類(lèi)型 4.1.2現(xiàn)場(chǎng)樣品采集 4.1.3采樣工具與試劑 34.1.4采樣現(xiàn)場(chǎng)描述與樣品登記編號(hào) 34.2樣品的保存與運(yùn)輸 34.2.1樣品的保存 4.2.2樣品的運(yùn)輸 34.3樣品制備 4.3.1貝類(lèi)樣品的制備 44.3.2蝦樣制備 4.3.3魚(yú)樣制備 4.3.4大型藻類(lèi)樣制備 44.3.5無(wú)菌樣品制備 5質(zhì)量保證 45.2樣品測(cè)定的質(zhì)量保證 56樣品測(cè)定及其監(jiān)測(cè)結(jié)果 7監(jiān)測(cè)報(bào)告編寫(xiě) 5附錄A(規(guī)范性附錄)海洋生物樣品采集登記 6附錄B(規(guī)范性附錄)海洋生物標(biāo)本標(biāo)簽 7附錄C(規(guī)范性附錄)海洋生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)樣品測(cè)定方法 8附錄D(規(guī)范性附錄)海洋生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)結(jié)果報(bào)表 9附錄E(規(guī)范性附錄)海洋生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)報(bào)告格式與內(nèi)容 I本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、附錄B、附錄C、附錄D、附錄E均為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由國(guó)家海洋局海洋環(huán)境保護(hù)司提出。本標(biāo)準(zhǔn)由國(guó)家海洋標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量中心歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：國(guó)家海洋環(huán)境監(jiān)測(cè)中心。Ⅱ?yàn)樨瀼亍吨腥A人民共和國(guó)環(huán)境保護(hù)法》和《中華人民共和國(guó)海洋環(huán)境保護(hù)法》,防止和控制海洋生物的污染，在保障經(jīng)濟(jì)發(fā)展的前提下，更有效地保護(hù)海洋生物資源和其他海洋資源，有利于海洋資源的可持續(xù)利用，維護(hù)海洋生態(tài)平衡，提高海洋生物質(zhì)量，保障人體健康，特制定本標(biāo)準(zhǔn)。1海洋生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了海洋生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)的主要內(nèi)容、技術(shù)要求和方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于中華人民共和國(guó)領(lǐng)海、毗連區(qū)、專(zhuān)屬經(jīng)濟(jì)區(qū)、大陸架以及中華人民共和國(guó)管轄的其他海域所進(jìn)行的海洋生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)工作。2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB17378.2海洋監(jiān)測(cè)規(guī)范第2部分：數(shù)據(jù)處理與分析質(zhì)量控制GB17378.6海洋監(jiān)測(cè)規(guī)范第6部分：生物體分析GB17378.7海洋監(jiān)測(cè)規(guī)范第7部分：近海污染生態(tài)調(diào)查和生物監(jiān)測(cè)HY/T069—2005赤潮監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)程海洋生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)程國(guó)家海洋局2002原子熒光法測(cè)定海洋生物體中汞的技術(shù)規(guī)程國(guó)家海洋局2003原子熒光法測(cè)定海洋生物體中砷的技術(shù)規(guī)程國(guó)家海洋局20033監(jiān)測(cè)方案設(shè)計(jì)3.1監(jiān)測(cè)生物海洋生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)以貝類(lèi)為主，根據(jù)海區(qū)(灘涂)特征可增選魚(yú)、蝦和大型藻類(lèi)作為監(jiān)測(cè)生物。3.2測(cè)站布設(shè)3.2.1布設(shè)原則監(jiān)測(cè)站位布設(shè)的主要原則為：——監(jiān)測(cè)站的布設(shè)應(yīng)覆蓋或代表監(jiān)測(cè)海域(灘涂)生物質(zhì)量，樣品采自潮間帶、潮下帶和外海海域；——依據(jù)監(jiān)測(cè)海域(灘涂)范圍，以最少數(shù)量測(cè)站，所獲取的數(shù)據(jù)能夠滿(mǎn)足監(jiān)測(cè)目的需要；——盡可能沿用歷史測(cè)站，盡量使監(jiān)測(cè)站位與沉積物污染調(diào)查站位相一致；——不同類(lèi)型灘涂、增養(yǎng)殖海區(qū)，測(cè)站布設(shè)應(yīng)有所不同，采樣站位盡可能避開(kāi)污染源；——應(yīng)考慮監(jiān)測(cè)海域(灘涂)的水動(dòng)力狀況和功能，開(kāi)闊海區(qū)，測(cè)站可適當(dāng)減少，半封閉或封閉海區(qū)，測(cè)站可適當(dāng)加密。3.2.2布站方法具體站位布設(shè)應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況，以覆蓋和代表監(jiān)測(cè)海域(灘涂)生物質(zhì)量為原則，可采用扇型(河口近岸海域)或井字型、梅花型、網(wǎng)格型方法布設(shè)控制斷面和監(jiān)測(cè)站位。3.3監(jiān)測(cè)頻率和時(shí)間根據(jù)各地的具體情況，在生物成熟期(如貝類(lèi)的成熟期一般為8月-10月)進(jìn)行一次生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)，不同年份的采樣時(shí)間應(yīng)保持不變。3.4監(jiān)測(cè)項(xiàng)目海洋生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)推薦項(xiàng)目為：石油烴、總汞、鎘、鉛、銅、砷、六六六(666)、滴滴涕(DDTs)、多氯聯(lián)苯(PCBs)、糞大腸菌群、異養(yǎng)菌總數(shù)量、腹瀉性貝毒(DSP)、麻痹性貝毒(PSP)。24.1樣品采集4.1.1樣品類(lèi)型4.1.1.1生物殘毒樣品生物殘毒樣品主要包括：——潮間帶測(cè)站定點(diǎn)采集的貝類(lèi)樣品；——沿岸潮下帶和外海海域的貝類(lèi)、魚(yú)、蝦、大型藻類(lèi)樣品。4.1.1.2赤潮生物、細(xì)菌學(xué)指標(biāo)樣品赤潮生物、細(xì)菌學(xué)指標(biāo)樣品主要包括：——赤潮生物樣品(應(yīng)符合HY/T069—2005的相關(guān)規(guī)定);——異養(yǎng)菌樣品；——糞大腸菌群樣品。4.1.1.3貝毒樣品貝毒樣品可選用生物殘毒樣品中所采集的貝類(lèi)樣品。4.1.2現(xiàn)場(chǎng)樣品采集4.1.2.1采樣的一般要求與原則現(xiàn)場(chǎng)采集樣品，一定要保持生物個(gè)體不受損傷。棲息在巖石或其他附著物上的生物個(gè)體，要用鑿子鏟取。棲息在沙底或泥底中的生物個(gè)體可用鏟子采取，或鐵鉤子扒取。在選取生物樣品時(shí)要去掉殼碎的或損傷的個(gè)體(指機(jī)械損傷),但在特殊情況下(如溢油或其他事故),對(duì)采集的生物樣品不能丟掉，保存起來(lái)，帶回實(shí)驗(yàn)室分析其原因。要挑選完好的生物個(gè)體，每種樣品必須選擇大小、性別、年齡都相同(或相近)的個(gè)體，記錄其體長(zhǎng)(貝類(lèi)應(yīng)記錄殼長(zhǎng)、殼高和殼寬)、性別、年齡等?，F(xiàn)場(chǎng)無(wú)法確定生物種名時(shí)，需將該樣品(取2個(gè)～3個(gè)個(gè)體)放在廣口玻璃瓶中，用5%福爾馬林溶液或70%酒精溶液保存，待實(shí)驗(yàn)室進(jìn)一步鑒定。在養(yǎng)殖場(chǎng)、漁船、漁港采集或選取樣品時(shí)，其原則同上。在大尺度全海域同一監(jiān)測(cè)項(xiàng)目中，應(yīng)在相同(或相近)的采樣時(shí)間內(nèi)，盡可能地采集相同年齡、相似個(gè)體大小的同一種貝類(lèi)，以提高監(jiān)測(cè)結(jié)果的可比性。采集貝類(lèi)一般推薦如下8種：菲律賓蛤仔、文蛤、四角蛤蜊、紫貽貝、翡翠貽貝、毛蚶、縊蟶、僧帽牡蠣。其中，長(zhǎng)江以北沿岸優(yōu)先采集順序?yàn)樽腺O貝、菲律賓蛤仔、文蛤、四角蛤蜊、毛蚶；長(zhǎng)江以南沿岸優(yōu)先采集順序?yàn)轸浯滟O貝、僧帽牡蠣、縊蟶、毛蚶、菲律賓蛤仔、文蛤。優(yōu)先選擇采集貽貝類(lèi)和蛤類(lèi)，河口區(qū)優(yōu)先選擇采集文蛤。4.1.2.2貝類(lèi)樣品的采集挑選采集體長(zhǎng)大致相似的貝類(lèi)個(gè)體約1.5kg左右(如牡蠣為40個(gè)左右、貽貝為60個(gè)左右)。如果殼上有附著物，應(yīng)用不銹鋼刀或比較硬的毛刷剝掉，彼此相連個(gè)體應(yīng)用不銹鋼小刀分開(kāi)。用現(xiàn)場(chǎng)海水沖洗干凈后，放入雙層聚乙烯袋中冰凍保存(一10℃～—20℃),分別用于生物殘毒分析或貝毒檢測(cè)。4.1.2.3大型藻類(lèi)樣品的采集采集大型藻類(lèi)(次年以上的)樣品1.5kg左右，用現(xiàn)場(chǎng)海水沖洗干凈，放入雙層聚乙烯袋中冰凍保存(-10℃～-20℃)。4.1.2.4細(xì)菌學(xué)指標(biāo)樣品的采集檢測(cè)細(xì)菌學(xué)指標(biāo)(糞大腸菌群、異養(yǎng)細(xì)菌)的生物樣品，現(xiàn)場(chǎng)用鑿子鏟取棲息在巖石或其他附著物上的生物個(gè)體。棲息在沙底或泥底中的生物個(gè)體可用鏟子采取，或鐵鉤子扒取。在選取生物樣品時(shí)要去掉殼碎的或損傷的個(gè)體(指機(jī)械損傷),將無(wú)損傷、生物活力強(qiáng)的個(gè)體裝入預(yù)先做好標(biāo)記的一次性塑料袋中。然后將樣品放入冰瓶冷藏(0℃～4℃)保存不得超過(guò)24h,全程應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌操作。34.1.2.5蝦、魚(yú)類(lèi)樣品的采集蝦、魚(yú)類(lèi)等生物取樣量為1.5kg左右，為了保證樣品的代表性和分析用量，應(yīng)視生物個(gè)體大小確定生物的個(gè)體數(shù)，保證選取足夠數(shù)量(至少需要100g肌肉組織)的完好樣品用于分析測(cè)定。用現(xiàn)場(chǎng)海水沖洗干凈，冰凍保存(-10℃~-20℃)。4.1.3采樣工具與試劑4.1.3.1采樣工具采樣工具主要包括：——鐵锨(控取棲息在泥沙中的動(dòng)物);——鐵把手(采集棲息在淺層泥沙中的貝類(lèi));——鑿子(采集棲息在巖石或巖石縫隙內(nèi)的生物，如牡蠣等);——解剖不銹鋼刀(各種類(lèi)型鑷子及剪不銹鋼刀);——冰瓶(保存樣品);——組織搗碎機(jī)(樣品勻漿);——醫(yī)用酒精棉球；——一次性塑料袋；——一次性乳膠手套；主要試劑為：——酒精(70%):95%的酒精70mL,加25mL蒸餾水；——福爾馬林(5%):40%的甲醛水溶液5mL,加入95mL蒸餾水或海水；——碘液：2g碘化鉀加1g碘溶于200mL蒸餾水。4.1.4采樣現(xiàn)場(chǎng)描述與樣品登記編號(hào)4.1.4.1采樣現(xiàn)場(chǎng)(環(huán)境)描述野外采樣時(shí)，要做好觀察和記錄。采樣時(shí)，應(yīng)注意觀察生物個(gè)體的顏色、個(gè)體大小、性別、年齡、死亡數(shù)量、機(jī)械損傷或其他異常個(gè)體，記錄生物個(gè)體生活的環(huán)境等。必要時(shí)應(yīng)進(jìn)行拍照或錄像。生物樣品的名稱(chēng)一律用學(xué)名和拉丁名同時(shí)記錄。4.1.4.2樣品登記編號(hào)樣品采集后，按照附錄A表A.1的內(nèi)容填寫(xiě)樣品采集登記表。同時(shí)還要根據(jù)附錄A表A.1中相應(yīng)的樣品編號(hào)，寫(xiě)一紙簽或竹簽(見(jiàn)附錄B表B.1),放入瓶?jī)?nèi)或袋內(nèi)，并在瓶外或袋外寫(xiě)上相應(yīng)的樣品編號(hào)，以防差錯(cuò)。記錄時(shí)用鉛筆，不能用墨水筆和圓珠筆。4.2樣品的保存與運(yùn)輸4.2.1樣品的保存樣品運(yùn)輸前，應(yīng)根據(jù)采樣記錄和樣品登記表清點(diǎn)樣品，填好裝箱單和送樣單，由專(zhuān)人負(fù)責(zé)，將樣品送回實(shí)驗(yàn)室冷凍保存。生物殘毒和貝毒檢測(cè)樣品應(yīng)保存在一20℃以下的冰柜中。細(xì)菌學(xué)指標(biāo)樣品冷藏(4℃左右)運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室后，應(yīng)立即進(jìn)行無(wú)菌樣品制備和檢測(cè)。4.2.2樣品的運(yùn)輸樣品采集后，若長(zhǎng)途運(yùn)輸，需把樣品放入樣品箱(或塑料桶)中，對(duì)無(wú)須封裝的樣品應(yīng)將現(xiàn)場(chǎng)清潔海水淋灑在樣品上，保持樣品潤(rùn)濕狀(不得浸入水中);若樣品處理，須在采樣24h后進(jìn)行，可將樣品放在聚乙烯袋中，壓出袋內(nèi)空氣，將袋口打結(jié)。將此袋和樣品標(biāo)簽一起放入另一聚乙烯袋(或潔凈的廣口玻璃44.3樣品制備4.3.1貝類(lèi)樣品的制備將貝類(lèi)樣品解凍后，用蒸餾水或清潔海水漂洗每一個(gè)個(gè)體，并使其自然風(fēng)干。用卡尺測(cè)定每一個(gè)貝類(lèi)的體長(zhǎng)(從殼前緣至后緣的距離),稱(chēng)重量，并記錄。有足絲的貝類(lèi)需將足絲拉出，用于分析石油烴、666、DDTs、PCBs、DSP、PSP的樣品，可用不銹鋼刀切開(kāi)閉殼肌組織(不得丟失體液)將多個(gè)個(gè)體合并勻漿，放入廣口玻璃瓶中密封，冰凍保存。4.3.2蝦樣制備將樣品解凍后，用蒸餾水或清潔海水漂洗每一個(gè)個(gè)體并風(fēng)干。測(cè)定并記錄每一個(gè)體體長(zhǎng)和重量，然的樣品，用不銹鋼刀沿腹部外甲邊緣切開(kāi)，用鑷子或竹簽取下內(nèi)側(cè)的外甲并棄去，用另一把不銹鋼刀攪4.3.3魚(yú)樣制備取解凍并清洗好的個(gè)體樣品，測(cè)定魚(yú)的叉長(zhǎng)(從頭至尾鰭的長(zhǎng)度)并稱(chēng)量。中、小型魚(yú)樣，需逐個(gè)測(cè)量并稱(chēng)重。然后用不銹鋼刀切除胸鰭并切開(kāi)背鰭附近自頭至尾部的魚(yú)皮，在魚(yú)鰓附近和尾部，橫過(guò)魚(yú)體各切一不銹鋼刀，在魚(yú)腹部，鰓和尾部?jī)蓚?cè)各切一不銹鋼刀(均切在魚(yú)體一側(cè)，但不得切得太深，以免切開(kāi)內(nèi)臟，沾污肉片)。然后將魚(yú)皮和肉分開(kāi)，謹(jǐn)防外表皮沾污肉片，用另一把不銹鋼刀將肌肉與脊椎分離，用鑷子或竹簽將肌肉取出。若一側(cè)肌肉不足，用同樣方法取出另一側(cè)肌肉。將足夠分析測(cè)定用的魚(yú)同樣方法取出另一側(cè)肌肉。將足夠分析測(cè)定用的魚(yú)樣合并勻漿后放入聚乙烯袋中封閉，冰凍保存。4.3.4大型藻類(lèi)樣制備取大型藻類(lèi)樣品清洗干凈后，除去根和末稍，切成段(或細(xì)條),然后在組織搗碎機(jī)中勻漿后，放入廣4.3.5無(wú)菌樣品制備用于生物體內(nèi)細(xì)菌學(xué)指標(biāo)檢測(cè)的無(wú)菌樣品制備，應(yīng)符合海洋生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)程的相關(guān)規(guī)定。5質(zhì)量保證——制定一個(gè)科學(xué)的采樣計(jì)劃，選擇合理的采樣地點(diǎn)、采樣時(shí)間和采樣方法，確保采樣的代表性；——嚴(yán)格各類(lèi)樣品采集、取樣、包裝、運(yùn)輸和儲(chǔ)存的一切器具的選擇及按規(guī)定清洗，防止樣品被——過(guò)濾膜和相關(guān)設(shè)備必須保持清潔，用酸和其他洗滌劑清洗；——消過(guò)毒的瓶子必須保持在滅菌狀態(tài)直到樣品采集。消毒紙或鋁箔失效，或頂部封口破裂，則——樣品保存或運(yùn)輸過(guò)程中要冰凍保存，不得放在水中；——樣品采集、運(yùn)輸和交接等過(guò)程應(yīng)有相應(yīng)的記錄。55.2樣品測(cè)定的質(zhì)量保證海洋生物樣品測(cè)定中的質(zhì)量應(yīng)符合GB17378.2、GB17378.6、GB17378.7、HY/T069—2005、海洋生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)程、原子熒光法測(cè)定海洋生物體中汞的技術(shù)規(guī)程和原子熒光法測(cè)定海洋生物體中砷的技術(shù)規(guī)程的相關(guān)規(guī)定。6樣品測(cè)定及其監(jiān)測(cè)結(jié)果海洋生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)樣品測(cè)定方法應(yīng)符合附錄C表C.1的相關(guān)規(guī)定。海洋生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)結(jié)果應(yīng)按附錄D表D.1填寫(xiě)。7監(jiān)測(cè)報(bào)告編寫(xiě)海洋生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)報(bào)告編寫(xiě)應(yīng)符合附錄E的規(guī)定。6(規(guī)范性附錄)海洋生物樣品采集登記海洋生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)的生物樣品采集應(yīng)按表A.1填寫(xiě)。表A.1海洋生物樣品采集登記表產(chǎn)地(站號(hào))日期種名地名性別7(規(guī)范性附錄)海洋生物標(biāo)本標(biāo)簽用于海洋生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)的生物樣品應(yīng)按表B.1填寫(xiě)標(biāo)本標(biāo)簽。表B.1海洋生物標(biāo)本標(biāo)簽產(chǎn)地(站號(hào)):8海洋生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)樣品的測(cè)定方法應(yīng)按表C.1的相關(guān)分析項(xiàng)目2總汞原子熒光法測(cè)定海洋生物體中汞的技術(shù)規(guī)程3鎘4鉛5銅6砷熒光法測(cè)定78滴滴涕9多氯聯(lián)苯9(規(guī)范性附錄)海洋生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)結(jié)果報(bào)表海洋生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)結(jié)果應(yīng)按照表D.1填寫(xiě)。表D.1海洋生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)結(jié)果報(bào)表(鮮重)站號(hào)樣品總汞鎘鉛銅砷異養(yǎng)細(xì)菌注：666含量為四種異構(gòu)體含量的總和，DDTs含量為四種異構(gòu)體含量的總和，PCBs含量為各單體含量的總和。(規(guī)范性附錄)海洋生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)報(bào)告格式與內(nèi)容E.1文本格式E.1.1文本規(guī)格海洋生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)報(bào)告文本外形尺寸為A4(210mm×297mm)。E.1.2封面格式海洋生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)報(bào)告封面格式如下。第一行書(shū)寫(xiě)：×××海區(qū)或省市×××海域(一號(hào)宋體，加黑，居中);第二行書(shū)寫(xiě)：海洋生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)報(bào)告(一號(hào)宋體，加