分光光度計的測定條件如何選擇 光度計常見問題解決方法

第第頁分光光度計的測定條件如何選擇光度計常見問題解決方法分光光度計可充分各種應(yīng)用的要求，可用在生物討論、生物工業(yè)、藥物分析、制藥、教學(xué)討論、環(huán)保、食品衛(wèi)生、臨床檢驗、衛(wèi)生防疫等領(lǐng)域。

分光光度計的光源燈接受6V/10W插入式鎢鹵素?zé)?，更換時應(yīng)先切斷電源，取出損壞的鎢鹵素?zé)簦瑩Q上新燈，將儀器的波長置于500nm處，開啟儀器電源，移動燈上、下、左、右位置，直到成象在進狹縫上。在T狀態(tài)，不調(diào)整100%鍵，（蓋上樣品室蓋）察看顯示讀數(shù)，調(diào)整燈使顯示讀數(shù)為高即可。

分光光度計的測定條件的選擇：

一、入射光波長的選擇

在大吸取波優(yōu)點測定吸光度不僅能獲得高的靈敏度，而且還能削減由非單色光引起的對朗伯—比爾定律的偏離。因此在分光光度計的分光光度法測定中一般選擇大吸取波長為入射波長。

二、參比溶液的選擇

在試驗中，要選擇合適的空白溶液作為參比溶液來調(diào)整分光光度計的零點，以便除去顯色溶液中其他有色物質(zhì)的干擾，抵消吸取池和試劑對入射光的影響。依據(jù)試樣溶液的性質(zhì)，選擇合適組分的參比溶液很緊要。

三、吸光度范圍選擇與掌控

任何分光光度計都有確定的測量誤差，測量誤差的來源緊要是光源的發(fā)光強度不穩(wěn)定法，光電效應(yīng)的非線性，電位計的非線性，雜散光的影響，單色器的光不純等因素，對于一臺固定的分光光度計來說，以上因素都是固定的，也就是說它的誤差具有確定穩(wěn)定性。

四、比色皿的使用

選擇適合規(guī)格的比色皿，盡量把吸光度值調(diào)整在0.2～0.8之間。同一試驗使用同一規(guī)格的同一套比色皿，以削減測量誤差，所以用一般分光光度法不適用于高含量或較低含量物質(zhì)的測定。

分光光度計是一種常用的試驗室分析儀器，面對浩繁品牌和型號的分光光度計，用戶該應(yīng)適合選擇合適的分光光度計。盡管分光光度計種類繁多，但不外乎簡易型、中檔型和型三大類。

紫外分光光度計一般都隨機附有一只塑料布罩，不使用時用其罩住整個儀器，這是很好的防塵手段。但發(fā)覺很多試驗室里不用附來塑料布罩，而是本身用一塊一般布或做成布罩來覆蓋儀器，防塵效果不如塑料布罩理想。另外，在塑料布罩只放入數(shù)袋防潮硅膠，也能更好起到延長防潮的功效。在防潮時，假如紫外分光光度計設(shè)有防潮干燥筒的，應(yīng)常常檢查，發(fā)覺變色立刻更換新的或加以烘干再用。長期停用的紫外分光光度計，要定期開機除潮，如每隔一個月通電預(yù)熱半小時，以保持整機呈干燥狀態(tài)，并且維持電子元件的性能。紫外分光光度計對溶液進行測定時，首先需要選擇合適的測量波長。選擇的依據(jù)是該被測溶液的吸取曲線。在一般情況下，我們總是選擇最大吸取波長作為測量波長，這樣可以提高靈敏度。而在有些情況下最大吸取峰很尖銳、吸取過大或相近有干擾存在，就不能選最大吸取波長，而必需在保證有確定靈敏度的情況下，選擇吸取曲線中的其它波上進行測定（曲線較平坦處對應(yīng)的波長），以除去干擾。繪制吸取曲線是正確選擇波長的有效手段和方法。吸光度范圍：試樣在不同吸光度時，濃度的相對誤差不同，一般選擇0.2一0.8之間，濃度相對誤差較小，可以通過更改吸取池厚度、檢測波長或待測溶液濃度，使吸光度讀數(shù)在適合范圍內(nèi)。狹縫寬度：狹縫寬度不僅影響光譜的純度，也影響吸光度值，在定量分析時，為了得到充分的測量信號，應(yīng)接受較大狹縫。在定性分析時，為了提高辨別率，應(yīng)接受較小狹縫，以獲得精細的光譜結(jié)構(gòu)。

一.光源部分：

（1）故障：鎢燈不亮；原因：鎢燈燈絲燒斷（此種原因幾率高）；檢查：鎢燈兩端有工作電壓，但燈不亮；取下鎢燈用萬用表電阻檔檢測。處置：更換新鎢燈；（2）故障：氘燈不亮；原因：氘燈起輝電路故障；檢查：氘燈在起輝的過程中，一般是燈絲先要預(yù)熱數(shù)秒鐘，然后燈的陽極與陰極間才可起輝放電，假如燈在起輝的開始瞬間燈內(nèi)閃動一下或連續(xù)閃動，并且更換新的氘燈后仍舊如此，有可能是起輝電路有故障，燈電流調(diào)整用的大功率晶體管損壞的幾率大。處置：需要專業(yè)人士修理；二.信號部分：（1）故障：沒有任何檢測信號輸出；原因：沒有任何光束照射到樣品室內(nèi)；檢查：將波長設(shè)定為530nm，狹縫盡量開到寬檔位，在黑暗的環(huán)境下用一張白紙放在樣品室光窗出口處，察看白紙上有無綠光斑影像；處置：檢查光源鏡是否轉(zhuǎn)到位？雙光束儀器的切光電機是否轉(zhuǎn)動了（耳朵可以聽見電機轉(zhuǎn)動的聲音）？（2）故障：樣品室內(nèi)無任何物品的情況下，全波長范圍內(nèi)基線噪聲大；原因：光源鏡位置不正確、石英窗表面被濺射上樣品；檢查：察看光源是否照射到入射狹縫的中央？石英窗上有無污染物？處置：重新調(diào)整光源鏡的位置，用乙醇清洗石英窗；（3）故障：樣品室內(nèi)無任何物品的情況下，僅僅是紫外區(qū)的基線噪聲大；原因：氘燈老化、光學(xué)系統(tǒng)的反光鏡表面劣化、濾光片顯現(xiàn)結(jié)晶物；檢查：可見區(qū)的基線較為平坦，斷電后打開儀器的單色器及上蓋，肉眼可以察看到光柵、反光鏡表面有一層白色霧狀物覆蓋在上面；假如光學(xué)系統(tǒng)正常，大的可能是氘燈老化，可以通過能量檢查或更換新燈方法加以判定；處置：更換氘燈、用火棉膠粘取鏡面上的污物或用研磨膏研磨濾光片（注意：此種技巧需要有確定維護和修理閱歷者來實施）；（4）故障：樣品室放入空白后做基線記憶，噪聲較大，紫外區(qū)尤甚；原因：比色皿表面或內(nèi)壁被污染、使用了玻璃比色皿或空白樣品對紫外光譜的吸取太猛烈，使放大器超出了校正范圍；檢查：將波長設(shè)定為250nm，先在不放任何物品的狀態(tài)下調(diào)零，然后將空比色皿插入樣品道一側(cè)，此時吸光值應(yīng)小于0.07Abs；假如大于此值，有可能是比色皿不干凈或使用了玻璃比色皿；同樣方法也可判定空白溶液的吸光值大??；處置：清洗比色皿，更換空白溶液；（5）故障：吸光值結(jié)果顯現(xiàn)負值（常見）；原因：沒做空白記憶、樣品的吸光值小于空白參比液；檢查：將參比液與樣品液調(diào)換位置便知；處置：做空白記憶、調(diào)換參比液或用參比液配置樣品溶液；（6）故障：樣品信號重現(xiàn)性不良；原因：排出儀器本身的原因外，大的可能是樣品溶液不均勻所致；在簡易的單光束儀器中，樣品池架一般為推拉式的，有時重復(fù)推拉不在同一個位置上；檢查：更換一種穩(wěn)定的試樣判定；處置：實行正確的試樣配置手段；修理推拉式樣品架的定位碰珠；（7）故障：做基線掃描或樣品掃描時，基線或信號有一個大的負脈沖；原因：掃描速度設(shè)置得過快，信號在讀取時，誤將濾光片或光源鏡的切換當(dāng)做信號讀取了；檢查：更改掃描速度；（8）故障：做基線掃描或樣品掃描時，基線或信號有一個長時間段的負值或滿屏大噪聲；原因：濾光片飼服電機“失步”，造成檔位錯位，國產(chǎn)電機尤甚；檢查：重新開機有可能回復(fù)，或打開單色器對比波長與濾光片的相對位置來檢查（注意：打開單色器時要保護檢測器不被強光刺激）；處置：更換飼服電機；（9）故障：樣品出峰位置不對；原因：波長傳動機構(gòu)產(chǎn)生位移；檢查：通過氘燈的656.1nm的特征譜線來判定波長是否精準(zhǔn)；處置：對于儀器而言處理手段相對簡單，使用儀器固有的自動校正功能即可；而對于相對簡單的儀器，這種調(diào)整則需要專業(yè)人員來進行了；（10）故障：信號的辨別率不夠，實在表現(xiàn)是：本應(yīng)疊加在某一大峰上的小峰無法察看到；原因：狹縫設(shè)置過窄而掃描速度過快，造成檢測器響應(yīng)速度跟不上，從而失去應(yīng)測到的信號；按常理，確定的狹縫寬度要對應(yīng)確定范圍的掃描速度；或者狹縫設(shè)置得過寬，使儀器的辨別率下降，將小峰融合在大峰里了。檢查：放慢掃描速度看一看或?qū)ⅹM縫設(shè)窄；處置：將掃描速度、狹縫寬窄、時間常數(shù)三者擬合成一個優(yōu)化的條件；（11）故障：當(dāng)儀器波長固定在某個波長下時，吸光值信號上下?lián)u擺，特別是測量模式轉(zhuǎn)換為按鍵開關(guān)式的簡易儀器；原因：開關(guān)觸點因長期氧化所致造成接觸不良；檢查：用手加重氣力按琴鍵時，吸光值隨之變化；處置：用金屬活化劑清洗按鍵觸點即可；（12）故障：儀器