DB32-T 3283-2017番茄抗南方根結線蟲鑒定技術規(guī)程

ICS65.020.20

B31

備案號：54552-2017DB32

江蘇省地方標準

DB32/T3283—2017

番茄抗南方根結線蟲鑒定技術規(guī)程

Technicalregulationforidentificatingtomatoresistancetosouthernroot-knot

nematode

2017-07-01發(fā)布2017-08-01實施

江蘇省質量技術監(jiān)督局發(fā)布

DB32/T3283—2017

番茄抗南方根結線蟲鑒定技術規(guī)程

1范圍

本標準規(guī)定了番茄對番茄根結線蟲病抗性鑒定及評價的育苗管理、線蟲準備、病情鑒定、病情調查、

抗性評價等技術要求。

本標準適用于江蘇省范圍內(nèi)的番茄對南方根結線蟲病的抗性鑒定及其抗性評價工作。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件，

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改單）適用于本文件。

GB/T8321農(nóng)藥合理使用準則

NY/T1858.7番茄抗黃瓜花葉病毒病鑒定技術規(guī)程

3術語和定義

3.1

病情級別Diseaseratingscale

人為定量植物個體或群體發(fā)病程度的數(shù)值化描述(注:引自NY/T1858.7)。

3.2

病情指數(shù)Diseaseindex

是全面考慮發(fā)病率與嚴重度兩者的綜合指標(注:引自NY/T1858.7)。

病情指數(shù)按公式（1）計算：

∑(Xi×ni)

DI=──────────×100%.....................................................................................(1)

Ni×ａmax

式中：

DI：病情指數(shù)

Xi：病害分級標準各級級值

ni：各級嚴重度的調查單株數(shù)

Ni：調查單株總數(shù)

ａmax：最高級值

4試劑與耗材

1

DB32/T3283—2017

4.1試劑

10％磷酸三鈉溶液

50g磷酸三鈉(Na3PO4?12H2O)溶于500mL水中即成。

4.2耗材

本鑒定技術規(guī)程中使用耗材包括：磷酸三鈉、培養(yǎng)皿、燒杯、剪刀、鑷子、草炭、蛭石、育苗盤、

營養(yǎng)缽等。

5儀器與設備

本鑒定技術規(guī)程中使用儀器設備包括：冰箱、恒溫培養(yǎng)箱、計數(shù)器、烘箱、改進貝曼漏斗、人工氣

侯室、移液器、顯微鏡、血球計數(shù)板等。

6育苗及育苗管理

6.1育苗方式

將鑒定品種用10％磷酸三鈉溶液浸種、催芽，種子露白后進行播種。以日光溫室或塑料大棚作為

育苗場地，播種選用基質配比為草炭：蛭石=2:1。播種選用128孔（16*8）的穴盤，每孔播種1粒。幼

苗達到2葉1心時及時進行移栽，移栽時選用基質為沙壤土：河沙=2:1，基質配好混勻后置于烘箱180℃

烘烤2小時。將幼苗單株定植于直徑15cm*高15cm的營養(yǎng)缽中。接種苗所處環(huán)境溫度白天23℃~26℃，

夜間17℃~19℃。

6.2播種及接種期間田間肥水管理

參鑒品種播種至接種期間，水肥管理與常規(guī)生產(chǎn)一致。

6.3病蟲害的防治

參鑒番茄品種在接種前10d和接種后45d內(nèi)應避免施用任何農(nóng)藥，其它期間病蟲害防治使用藥劑按

照GB4285和GB8321規(guī)定執(zhí)行。

6.4對照品種

試驗中設置抗病和感病對照品種，可選用Moneymaker或蘇粉9號（Solanumlycopersicum）作為感

病對照品種，選用含有純合Mi-1基因的Motelle（Solanumlycopersicum）作為抗病對照材料。

7接種方法

7.1根結線蟲的準備

利用分子鑒定的方法，對根結線蟲進行鑒定，確定所用線蟲為南方根結線蟲。用感病材料作為根結

線蟲的繁殖寄主，待根結線蟲在植株根部繁殖出大量卵塊后，將植株連根拔起，挑取線蟲卵塊于改進的

貝曼漏斗上。將貝曼漏斗置于培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)皿加水至液面與卵塊層面平齊。將培養(yǎng)皿置于28℃的培

養(yǎng)箱中，進行二齡幼蟲的孵化。每24小時收集孵化液并再次加入蒸餾水進行孵化，將收集好的線蟲接

種液放置于室溫，每天對接種液進行3~4次的人工補氧。收集兩次孵化液后，在顯微鏡下，用血球計數(shù)

板對接種液的濃度測定，待線蟲接種液的總蟲量達到接種所需量時用于接種。

7.2人工接種鑒定方法

2

DB32/T3283—2017

待鑒定品種苗齡為4葉1心時，方可進行人工接種。接種實驗以人工氣候室為宜，便于對溫度進行

控制。接種前一天澆水一次。待鑒定品種和抗感病對照品種各30株。接種時，用1.5ml的移液器吸頭

在距植株根莖部2cm的位置左右對稱扎兩個深約1cm~2cm的小洞。用移液器將接種液平均的接終于兩

個洞內(nèi)，每個苗盆接種3000條南方根結線蟲二齡幼蟲，接種后一天方可澆水，但不可澆大水，7天后

澆水恢復正常管理。控制人工氣候室環(huán)境，使環(huán)境溫度白天23℃~26℃，夜間17℃~19℃。鑒定室內(nèi)不

施用任何殺蟲劑。

8病情調查

8.1調查時間

接種45d后，將待鑒定材料和抗感病對照材料小心的從苗缽中取出，抖掉土壤，用水沖洗干凈。

8.2調查方法

對每份鑒定材料的根結數(shù)進行人工統(tǒng)計，根據(jù)根結數(shù)對每一植株進行鑒定分級，記載病情級別。

8.3發(fā)病記載分級標準：

根據(jù)分級標準記載病情，分級標準見表1。

表1番茄根結線蟲病病情級別及其癥狀描述

病情級別癥狀描述

0級無根結或卵塊

1級1~5個根結

2級6~30個根結

3級31~100個根結

4級超過100個根結，或多個根結連接在一起

8.4病情指數(shù)的計算和記載

根據(jù)表1記載接種植株的病情級別及其相對應的癥狀描述，調查所有接種植株的發(fā)病情況，記載各

品種（系）每一單株的病情級別，按公式（1）計算病情指數(shù)。

9抗性評價

9.1鑒定有效性判別

當鑒定圃中的感病對照品種的病情指數(shù)達到75％以上，該批次抗番茄根結線蟲病鑒定視為有效。

9.2抗性級別

依據(jù)鑒定番茄品種（系）發(fā)病程度（病情指數(shù)）確定其對番茄根結線蟲病的抗性水平，劃分標準見

表2。

表2番茄品種(系)對番茄根結線蟲病抗性評價標準

3

DB32/T3283—2017

病情指數(shù)（％）抗性評價英文縮寫

0免疫IM

0<DI≤20高抗HR

20<DI≤40抗病R

40<DI≤60中抗MR

60<DI≤80感病S

80<DI≤100高感HS

9.3重復鑒定

初次鑒定中表現(xiàn)為高抗、抗病、中抗、感病的材料，進行重復鑒定。

9.4抗性評價

一次鑒定結果僅能作為初步鑒定結果，不能作為抗性評價的依據(jù)。根據(jù)兩次及兩次以上抗性鑒定結

果對鑒定材料進行抗病性評價，抗性級別以統(tǒng)計的最高病情指數(shù)為準。

10接種后與鑒定材料的處理

將鑒定后的田間病株及病土進行高溫烘箱烘烤后方可丟棄。

11鑒定記載表格

番茄抗根結線蟲病鑒定結果記載表格見表3

表3年番茄根結線蟲病鑒定結果記載表

病情級別及發(fā)病株數(shù)

編號品種名稱來源病情指數(shù)抗性評價

0級1級2級3級4級

注1：鑒定地點注2：播種日期

注3：接種日期注4：調查日期

鑒定技術負責人（簽字）：

_________________________________

4

DB32/T3283—2017

前??言

本標準的按GB/T1.1-2009《標準化工作導則第1部分：標準的結構和編寫規(guī)則》的規(guī)定編寫。

本標準由江蘇省農(nóng)業(yè)科學院提出并歸口。

本標準起草單位：江蘇省農(nóng)業(yè)科學院。

本標準主要起草人：王銀磊、趙統(tǒng)敏、余文貴、楊瑪麗、趙麗萍。

I

DB32/T3283—2017

番茄抗南方根結線蟲鑒定技術規(guī)程

1范圍

本標準規(guī)定了番茄對番茄根結線蟲病抗性鑒定及評價的育苗管理、線蟲準備、病情鑒定、病情調查、

抗性評價等技術要求。

本標準適用于江蘇省范圍內(nèi)的番茄對南方根結線蟲病的抗性鑒定及其抗性評價工作。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件，

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改單）適用于本文件。

GB/T8321農(nóng)藥合理使用準則

NY/T1858.7番茄抗黃瓜花葉病毒病鑒定技術規(guī)程

3術語和定義

3.1

病情級別Diseaseratingscale

人為定量植物個體或群體發(fā)病程度的數(shù)值化描述(注:引自NY/T1858.7)。

3.2

病情指數(shù)Diseaseindex

是全面考慮發(fā)病率與嚴重度兩者的綜合指標(注:引自NY/T1858.7)。

病情指數(shù)按公式（1）計算：

∑(Xi×ni)

DI=──────────×100%.....................................................................................(1)

Ni×ａmax

式中：

DI：病情指數(shù)

Xi：病害分級標準各級級值

ni：各級嚴重度的調查單株數(shù)

Ni：調查單株總數(shù)

ａmax：最高級值

4試劑與耗材

1

DB32/T3283—2017

4.1試劑

10％磷酸三鈉溶液

50g磷酸三鈉(Na3PO4?12H2O)溶于500mL水中即成。

4.2耗材

本鑒定技術規(guī)程中使用耗材包括：磷酸三鈉、培養(yǎng)皿、燒杯、剪刀、鑷子、草炭、蛭石、育苗盤、

營養(yǎng)缽等。

5儀器與設備

本鑒定技術規(guī)程中使用儀器設備包括：冰箱、恒溫培養(yǎng)箱、計數(shù)器、烘箱、改進貝曼漏斗、人工氣

侯室、移液器、顯微鏡、血球計數(shù)板等。

6育苗及育苗管理

6.1育苗方式

將鑒定品種用10％磷酸三鈉溶液浸種、催芽，種子露白后進行播種。以日光溫室或塑料大棚作為

育苗場地，播種選用基質配比為草炭：蛭石=2:1。播種選用128孔（16*8）的穴盤，每孔播種1粒。幼

苗達到2葉1心時及時進行移栽，移栽時選用基質為沙壤土：河沙=2:1，基質配好混勻后置于烘箱180℃

烘烤2小時。將幼苗單株定植于直徑15cm*高15cm的營養(yǎng)缽中。接種苗所處環(huán)境溫度白天23℃~26℃，

夜間17℃~19℃。

6.2播種及接種期間田間肥水管理

參鑒品種播種至接種期間，水肥管理與常規(guī)生產(chǎn)一致。

6.3病蟲害的防治

參鑒番茄品種在接種前10d和接種后45d內(nèi)應避免施用任何農(nóng)藥，其它期間病蟲害防治使用藥劑按

照GB4285和GB8321規(guī)定執(zhí)行。

6.4對照品種

試驗中設置抗病和感病對照品種，可選用Moneymaker或蘇粉9號（Solanumlycopersicum）作為感

病對照品種，選用含有純合Mi-1基因的Motelle（Solanumlycopersicum）作為抗病對照材料。

7接種方法

7.1根結線蟲的準備

利用分子鑒定的方法，對根結線蟲進行鑒定，確定所用線蟲為南方根結線蟲。用感病材料作為根結

線蟲的繁殖寄主，待根結線蟲在植株根部繁殖出大量卵塊后，將植株連根拔起，挑取線蟲卵塊于改進的

貝曼漏斗上。將貝曼漏斗置于培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)皿加水至液面與卵塊層面平齊。將培養(yǎng)皿置于28℃的培

養(yǎng)箱中，進行二齡幼蟲的孵化。每24小時收集孵化液并再次加入蒸餾水進行孵化，將收集好的線蟲接

種液放置于室溫，每天對接種液進行3~4次的人工補氧。收集兩次孵化液后，在顯微鏡下，用血球計數(shù)

板對接種液的濃度測定，待線蟲接種液的總蟲量達到接種所需量時用于接種。

7.2人工接種鑒定方法

2

DB32/T3283—2017

待鑒定品種苗齡為4葉1心時，方可進行人工接種。接種實驗以人工氣候室為宜，便于對溫度進行

控制。接種前一天澆水一次。待鑒定品種和抗感病對照品種各30株。接種時，用1.5ml的移液器吸頭

在距植株根莖部2cm的位置左右對稱扎兩個深約1cm~2cm的小洞。用移液器將接種液平均的接終于兩

個洞內(nèi)，每個苗盆接種3000條南方根結線蟲二齡幼蟲，接種后一天方可澆水，但不可澆大水，7天后

澆水恢復正常管理?？刂迫斯夂蚴噎h(huán)境，使環(huán)境溫度白天23℃~26℃，夜間17℃~19℃。鑒定室內(nèi)不

施用任何殺蟲劑。

8病情調查

8.1調查時間

接種45d后，將待鑒定材料和抗感病對照材料小心的從苗缽中取出，抖掉土壤，用水沖洗干凈。

8.2調查方法

對每份鑒定材料的根結數(shù)進行人工統(tǒng)計，根據(jù)根結數(shù)對每一植株進行鑒定分級，記載病情級別。

8.3發(fā)病記載分級標準：

根據(jù)分級標準記載病情，分級標準見表1。

表1番茄根結線蟲病病情級別及其癥狀描述

病情級別癥狀描述

0級無根結或卵塊

1級1~5個根結

2級6~30個根結

3級31~100個根結

4級超過100個根結，或多個根結連接在一起

8.4病情指數(shù)的計算和記載

根據(jù)表1記載接種植株的病情級別及其相對應的癥狀描述，調查所有接種植株的發(fā)病情況，記載各

品種（系）每一單株的病情級別，按公式（1）計算病情指數(shù)。

9抗性評價

9.1鑒定有效性判別

當鑒定圃中的感病對照品種的病情指數(shù)達到75％以上，該批次抗番茄根結線蟲病鑒定視為有效。

9.2抗性級別

依據(jù)鑒定番茄品種（系）發(fā)病程度（病情指數(shù)）確定其對番茄根結線蟲病的抗性水平，劃分標準見

表2。

表2番茄品種(系)對番茄根結線蟲病抗性評價標準

3

DB32/T3283—2017

病情指數(shù)（％）抗性評價英文縮寫

0免疫IM

0<DI≤20