食用菌制種技術(shù)（食用菌生產(chǎn)）

母種培養(yǎng)基制作制種技術(shù)

純度高、生命力強(qiáng)的無公害菌種是食用菌栽培取得豐產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的先決條件。生產(chǎn)無公害優(yōu)質(zhì)的菌種首先依靠優(yōu)質(zhì)的當(dāng)家菌株和優(yōu)良的培養(yǎng)設(shè)備條件，此外更需要依靠具有一定水平的食用菌知識的制種人員，而且這些人員在工作中要具有嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鲬B(tài)度和認(rèn)真細(xì)致的工作作風(fēng)。食用菌菌種的種型分為固體型菌種和液體型菌種兩類。固體菌種生產(chǎn)常采用斜面瓊脂培養(yǎng)基和以木屑、糞草、麥粒、種木等為主要原料配制而成的不同固體基質(zhì)。我國目前在大面積食用菌栽培中所用的菌種是以木屑、糞草、麥粒、種木等為基質(zhì)的固體型菌種。液體菌種發(fā)酵罐液體菌種（一）菌種生產(chǎn)的無公害化控制

根據(jù)菌種制作過程，無公害的控制環(huán)節(jié)應(yīng)當(dāng)按照上海市地方推薦性標(biāo)準(zhǔn)《安全衛(wèi)生優(yōu)質(zhì)食用菌生產(chǎn)技術(shù)操作規(guī)范》的要求，著重抓好以下幾個(gè)方面。1．原料無害化

選用無害化的原料作為培養(yǎng)基。雜木屑為培養(yǎng)基主原料時(shí)，只要在加工過程中不混入有害的物質(zhì)，如油污、石灰及會影響pH的污水等，通常就是安全的原料。若采用棉籽殼、稻草之類為培養(yǎng)基，應(yīng)當(dāng)避免過高的農(nóng)藥殘留，必要時(shí)先把原料用水沖冼或浸泡后使用，可減少原料中農(nóng)藥殘留量。輔料麩皮、米糠只要不霉變即可；石膏、碳酸鈣之類嚴(yán)防假冒偽劣產(chǎn)品。

2．水質(zhì)符合飲用水標(biāo)準(zhǔn)

食用菌的菌絲是有生命的，許多對人類有害的物質(zhì)對食用菌菌絲生長同樣有害；同時(shí)，許多食用菌菌絲富集有害物質(zhì)如重金屬等能力強(qiáng)，更需要基質(zhì)的無害化。作為食用菌菌絲生長的水質(zhì)應(yīng)當(dāng)符合飲用水標(biāo)準(zhǔn)，特別是直接噴到子實(shí)體上的水質(zhì)更需符合飲用水標(biāo)準(zhǔn)。

3．環(huán)境無公害作為菌種生產(chǎn)和培養(yǎng)環(huán)境的無害化，不僅可以提高菌種成品率，而且避免菌種的有害物質(zhì)的侵害。主要控制點(diǎn)是菌種制作和培養(yǎng)場所要距離污染源50m以上，環(huán)境要衛(wèi)生，水源要干凈，菌種污染物應(yīng)先滅菌后再銷毀或掩埋。（二）菌種的級別1.母種（一級種）是指用于繁殖培養(yǎng)的食用菌出發(fā)菌株。生產(chǎn)上使用的母種，都要經(jīng)過嚴(yán)格的栽培試驗(yàn)，掌握菌株的基本生物學(xué)特性后方可投入大面積使用。母種常用玻璃試管斜面培養(yǎng)，這種培養(yǎng)方法具有觀察方便、容易鑒別和易于保存的優(yōu)點(diǎn)。木耳人工栽培蛹草菌根據(jù)我國菌政管理的相關(guān)法規(guī)，菌種生產(chǎn)必須使用經(jīng)專門技術(shù)部門鑒定或?qū)ｉT作物品種審定機(jī)構(gòu)審定后確認(rèn)的菌株。而且一級種有限制地生產(chǎn)銷售。

2.原種（二級種）

原種是由母種擴(kuò)大培養(yǎng)而成的菌種。這一級菌種是為了加快食用菌繁殖速度，滿足大面積栽培時(shí)生產(chǎn)栽培種的需要而設(shè)置。原種使用基質(zhì)通常與栽培基質(zhì)相同或相似，原種繁殖培養(yǎng)過程也是生理馴化過程。在培養(yǎng)時(shí)應(yīng)當(dāng)認(rèn)真檢查菌絲的純培養(yǎng)程度和菌絲的長勢，保持純種培養(yǎng)。原種制作所用容器要求使用透明度好的玻璃瓶。3.栽培種（三級種）這是指直接用于生產(chǎn)栽培的菌種，多由原種擴(kuò)大培養(yǎng)而成，常以菌瓶或菌袋作為容器。（三）菌種生產(chǎn)的流程食用菌的固體菌種生產(chǎn)與液體菌種生產(chǎn)的設(shè)備選型和場所要求是大不相同的。固體菌種生產(chǎn)也因各級菌種生產(chǎn)所使用基質(zhì)不同而操作過程的條件和步驟也有所差異，但作為一種生產(chǎn)工藝流程來說是大致相同的。母種培養(yǎng)基原料準(zhǔn)備單孢或多孢分離組織分離基質(zhì)分離菌種純化誘變育種雜交選育細(xì)胞融合母種培養(yǎng)基制作高壓滅菌接種培養(yǎng)與檢驗(yàn)小試篩選中試篩選確定生產(chǎn)出發(fā)菌株母種的擴(kuò)大培養(yǎng)接種常壓高壓蒸汽滅菌原種培養(yǎng)基制作原種培養(yǎng)基原料準(zhǔn)備菌株保藏培養(yǎng)與檢驗(yàn)原種接種培養(yǎng)與檢驗(yàn)栽培種常壓高壓蒸汽滅菌栽培中培養(yǎng)基制作栽培種培養(yǎng)基原料準(zhǔn)備滅菌滅菌葡萄糖、豆餅粉、玉米粉、無機(jī)鹽、水配制裝三角瓶滅菌搖瓶培養(yǎng)基滅菌液體菌種3基裝發(fā)酵罐3基發(fā)酵罐培養(yǎng)液體菌種菌種生產(chǎn)工藝流程

（四）培養(yǎng)基的制作技術(shù)

1.母種培養(yǎng)基的制作技術(shù)

母種培養(yǎng)基常用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，配方為馬鈴薯（去皮）200～250g，葡萄糖20～25g，瓊脂18～20g，水1000ml。馬鈴薯要求新鮮、無霉?fàn)€，去皮、去芽點(diǎn)。

1）配制步驟試管培養(yǎng)基配制步驟（1）按配方要求稱取各種營養(yǎng)物質(zhì)。（2）將去皮的馬鈴薯切塊加水，用文火煮沸30分鐘，過濾取濾液。（3）加入葡萄糖，并補(bǔ)足水量。（4）攪拌均勻，自然pH值或調(diào)節(jié)至適宜的酸堿度。（5）加入瓊脂，用文火加熱使之熔化，并趁熱分裝試管或三角瓶中，分裝量為試管長度的1/5～

1/4（保藏用多些，生產(chǎn)用少些）。（6）塞好棉塞，使棉塞表面與試管壁緊貼，2/3在管內(nèi)，1/3在管外。（7）將棉塞外端用牛皮紙包扎好，即可滅菌。2）注意事項(xiàng)（1）培養(yǎng)基分裝時(shí)要使漏斗導(dǎo)管口深插入試管內(nèi)中下部，不讓培養(yǎng)基粘在試管口，否則容易粘在棉花塞上造成污染。（2）冬季氣溫寒冷，注意采用延長培養(yǎng)基凝固的辦法，如及時(shí)分裝或使用保溫漏斗，漏斗下的導(dǎo)管不宜過長等。原種和栽培種培養(yǎng)基的制作2.原種和栽培種培養(yǎng)基的制作技術(shù)

1）原料配制按培養(yǎng)基配方要求稱取各種成分的配料，先干拌后濕拌，注意在水中預(yù)先溶解各種可溶性配料，如糖、尿素等，然后配入干料中，注意掌握含水量。2）培養(yǎng)基分裝圖1-3原種、栽培種制作方法1.裝瓶2.搗木3.裝料4.壓平料面5.清洗瓶口、瓶壁6.打洞7.塞棉塞8.用牛皮紙包扎（1）容器原種和栽培種常用透明度良好的750ml菌瓶，栽培種也可用直徑12～17cm、厚度0.04～0.06mm的聚丙烯或低壓聚乙烯塑料袋。（2）機(jī)械分裝選用送料筒口徑與容器口徑相當(dāng)?shù)难b袋（瓶）機(jī)，啟動(dòng)馬達(dá)，將配料送入料斗，容器即可接裝配料。（3）手工分裝鋸木屑培養(yǎng)基的方法裝瓶時(shí)，手握瓶頸，瓶底在木屑料堆上進(jìn)行裝料，裝料過程中要上下輕輕拍打幾下，使培養(yǎng)基向下沉實(shí)，料裝至瓶肩時(shí)，料面要用T形或L形工具壓平。培養(yǎng)基的松緊度要以下部稍松、上部稍實(shí)為好。培養(yǎng)基裝完后用一根尖頭木棒在培養(yǎng)基中央鉆一個(gè)通達(dá)瓶底的洞，以利通氣，利于菌絲繁殖。木屑培養(yǎng)基裝瓶結(jié)束后，把瓶子內(nèi)外洗凈、擦干，再塞上棉塞，包上牛皮紙。（4）糞草培養(yǎng)基的分裝糞草培養(yǎng)基裝入瓶中的方法和木屑培養(yǎng)基相似?？捎檬只蛴糜袕椥缘闹衿瑢⒓S草料塞入瓶中，壓實(shí)壓平，然后洗凈瓶內(nèi)外，再塞上棉塞，包上牛皮紙。（5）谷粒培養(yǎng)基的分裝把浸透蒸熟的麥粒，用碳酸鈣拌勻至適濕（吸走麥粒表面多余的水分）裝入瓶中，上方稍加壓平，并填上一層發(fā)酵過的糞草料。3.生產(chǎn)性栽培袋的制作技術(shù)香菇、黑木耳、毛木耳、平菇、金針菇等食用菌，都可采用袋式栽培。塑料袋包括聚丙烯或聚乙烯袋，塑料袋的規(guī)格因栽培方式而異。銀耳栽培多采用12cm×50cm的長袋，兩頭扎緊，上表面打四個(gè)接種穴。香菇栽培多采用15～17cm×55cm，厚0.04～0.06mm的長袋，兩頭扎緊，一面打3個(gè)接種穴，另一面打2個(gè)接種穴。黑木耳、毛木耳、平菇、金針菇多采用17cm×35cm的短袋，接種口上套頸圈、塞棉塞。圖1-4栽培袋的制作方法A.短袋套頸圈裝料法

1.裝料

2.頸圈

3.塞棉塞、包紙B.長袋打穴貼膠布裝料法

1.裝料

2.打接種穴

3.貼封膠布栽培袋的制作要求：配料前，木屑必須過篩，以免雜物刺破塑料袋。裝短袋時(shí)，塑料袋底部兩端的邊角要用手向內(nèi)壓進(jìn)，以利擺放。裝袋培養(yǎng)基要求偏緊，以便能固定成形。

4.生產(chǎn)原種、栽培種栽培袋培養(yǎng)基注意事項(xiàng)

1)除了針葉樹（松、杉、柏）和某些特殊的闊葉樹（樟、木荷、楠、檫）之外，絕大多數(shù)闊葉樹的木屑都可以利用。針葉樹木屑經(jīng)堆積發(fā)酵或用1％苛性鈉或碳酸鈉處理后，也可和闊葉樹木屑搭配使用，柳杉、紅松木屑也可以利用。2)木屑不宜過細(xì)，以免培養(yǎng)基太濕或通氣不良，加工時(shí)滲入機(jī)油較多的木屑不宜利用。3）有異味的木屑，如苦楝、槐樹、黃蓮木的木屑不適直接生產(chǎn)食用菌的子實(shí)體。分解力強(qiáng)的食用菌，如香菇、黑木耳宜用硬雜木的木屑；分解力弱的食用菌如銀耳，應(yīng)用易分解的闊葉樹的木屑；平菇、金針菇要求用含單寧少的木屑。

4）米糠、麩皮、玉米粉要求新鮮，用量可以酌情增減。氣溫低時(shí)可多些，氣溫高時(shí)宜少些，一般不低于15％，不高于25％。

培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基的滅菌滅菌是指用物理或化學(xué)方法，完全殺死器物表面或培養(yǎng)基內(nèi)的一切微生物的過程。培養(yǎng)基的滅菌是實(shí)現(xiàn)菌種純培養(yǎng)的先決條件，通常采用濕熱滅菌法，包括常壓蒸汽滅菌(亦稱流動(dòng)蒸汽滅菌)和高壓蒸汽滅菌兩種形式。1、滅菌設(shè)備菌種培養(yǎng)基多在滅菌灶或滅菌鍋中進(jìn)行蒸汽滅菌?，F(xiàn)將蒸汽滅菌所需設(shè)備、適用范圍見表1-4。表1-4蒸汽滅菌所需設(shè)備及其適用范圍滅菌方法適用設(shè)備滅菌條件適用范圍高壓滅菌高壓蒸汽滅菌鍋126℃，1.5-2小時(shí)原種、栽培種培養(yǎng)基滅菌常壓滅菌一次滅菌滅菌灶100℃，6-8小時(shí)栽培種、栽培菌袋培養(yǎng)基滅菌間歇滅菌滅菌灶100℃，1-2小時(shí)25℃，24小時(shí)，重復(fù)進(jìn)行2-3次栽培種培養(yǎng)基滅菌栽培菌袋（瓶）培養(yǎng)基的滅菌手提式高壓蒸汽滅菌鍋2、培養(yǎng)基蒸汽滅菌方法1）一次性常壓蒸汽滅菌灶操作步驟（1）往滅菌灶內(nèi)注入八分水。（2）將培養(yǎng)基按層次分別放人灶內(nèi)，注意棉塞朝中間，且不靠灶壁排列，以利于蒸汽流動(dòng)，否則影響滅菌效果，拖長滅菌時(shí)間。（3）關(guān)閉滅菌灶門，點(diǎn)火加溫（為縮短滅菌灶使用周期，提高滅菌灶的利用率，也可適當(dāng)提前加溫預(yù)熱水）。（4）灶門中部溫度達(dá)到100℃時(shí)計(jì)算時(shí)間，保持6～8小時(shí)，注意灶內(nèi)水位變化，避免干熱燃燒現(xiàn)象發(fā)生。（5）達(dá)到滅菌時(shí)間后停止加熱，微開灶門，利用余熱蒸發(fā)棉塞和容器表面水分，1～2小時(shí)后打開灶門，取出滅菌物放入預(yù)先消毒的冷卻室。2）高壓蒸汽滅菌鍋操作步驟（1）裝入滅菌培養(yǎng)基，注意棉塞朝內(nèi)不朝壁，關(guān)閉鍋門，緊固螺帽。（2）緩慢將蒸汽通入夾層預(yù)熱，達(dá)到壓力4.9×104帕?xí)r，打開排氣閥，將冷空氣排出。（3）當(dāng)壓力升到1．47×105帕，溫度達(dá)到126℃時(shí)，控制進(jìn)氣量和排冷氣閥門，使溫度壓力均恒保持1．5～2小時(shí)。（4）停止送氣，使溫度和壓力自然降低，當(dāng)壓力降至4．9×104帕?xí)r，緩慢打開排氣閥，使壓力降到零，微開鍋蓋，讓余熱把水氣蒸發(fā)。（5）打開鍋蓋，取出滅菌物，搬入預(yù)先消毒好的冷卻室。3）手提高壓滅菌鍋操作步驟（1）向鍋內(nèi)注入水到規(guī)定刻度，注意導(dǎo)氣管要暢通。（2）將滅菌物放入鍋內(nèi)，棉塞一端用牛皮紙?jiān)?，蓋鍋蓋，緊固鍋蓋螺帽。（3）通電加熱，當(dāng)壓力達(dá)4.9×104帕?xí)r排放冷氣。（4）加熱至壓力1．08×105帕（瓊脂培養(yǎng)基）或1.47×105帕（木屑、糞草培養(yǎng)基），調(diào)整電源電壓，保持上述要求到0.5小時(shí)或1.0小時(shí)切斷電源。（5）當(dāng)壓力降到4.9×104帕?xí)r放開排氣閥，壓力到零時(shí)旋開鍋蓋螺帽，微開15分鐘左右。（6）取出滅菌物，擺成斜面或搬人預(yù)先消毒好的接種室（箱）。3、常用滅菌方法的滅菌效果檢驗(yàn)隨機(jī)取滅菌過的培養(yǎng)基數(shù)瓶（袋），標(biāo)明記號和日期，置25℃下培養(yǎng)3～7天，檢查菌落種類、數(shù)量和出現(xiàn)部位。在取樣過程中要注意從滅菌容器各個(gè)部位取出，以便檢查滅菌容器各部位的滅菌效果。食用菌基礎(chǔ)知識

接種方法試管種（母種）的接種在接種箱內(nèi)進(jìn)行。原種（瓶裝）和栽培種（瓶裝或袋裝）可在接種箱或接種室內(nèi)進(jìn)行；用來直接生產(chǎn)子實(shí)體的栽培袋，一般在接種室內(nèi)進(jìn)行。1）試管種（母種）的接種接種箱經(jīng)消毒之后，就可開始接種。在進(jìn)行接種操作之前，先將手洗干凈，然后用2％煤酚皂液將手浸洗2分鐘或用75％酒精棉球擦手。接種操作：左手拿起試管，右手拿接種針，將接種針放在酒精燈火焰上灼燒，冷卻后，在酒精燈火焰附近拔開試管棉塞，試管口向下傾斜，用酒精燈火焰封鎖，接著把冷卻后的接種針伸人斜面菌種的試管內(nèi)，鉤取一小塊帶培養(yǎng)基的菌種塊，在菌種塊出入試管口時(shí)，不要接觸管壁或管口，也不要過火焰，以防燙死或燒傷菌種，迅速把菌種塊移接人斜面培養(yǎng)基的中部，把棉塞頭的四周在火焰上燒一下，然后立即將棉塞塞入試管口，塞入后將棉塞旋轉(zhuǎn)一兩下，使之與管壁緊貼。接種圖1-5

母種移接法2）原種和栽培種（瓶裝或袋裝）的接種此項(xiàng)接種要求和操作基本與母種接種相同。注意培養(yǎng)基滅菌取出，待冷卻后才能接種，移入接種箱前必須把瓶的外壁擦干凈，按無菌操作將母種用接種針移接入瓶內(nèi)，一支母種可接4～6瓶原種（圖1-6）。圖1-6用母種繁殖原種的方法栽培種的接種是把原種轉(zhuǎn)接到相同的木屑培養(yǎng)基上進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。接種時(shí)，原種表面的老菌絲或菌膜要去除后再使用。接種時(shí)，按無菌操作，用接種匙、長柄鑷子或接種鏟取出一塊蠶豆大的原種，放入栽培種培養(yǎng)基中。接種工作，可單人操作，也可雙人配合操作。進(jìn)行單人操作時(shí)，先將原種棉塞拔出，瓶口經(jīng)火焰滅菌之后，平放在筐架上，并使瓶口保持靠近火焰上部，然后進(jìn)行接種。進(jìn)行雙人操作時(shí)，各自要有一盞酒精燈，以便進(jìn)行瓶口、接種工具和棉塞滅菌。其中一人手拿菌種瓶和接種工具，另一個(gè)人手拿栽培種培養(yǎng)基和拔塞棉花塞，兩人對接。操作時(shí)，要嚴(yán)格認(rèn)真，動(dòng)作輕捷，互相配合好。不論是單人接種或雙人接種，瓶口均不能朝上，要平放或略為朝下。圖1-7用原種繁殖栽培種的方法3）菌袋的接種大面積栽培時(shí)，由于菌袋數(shù)量多，多在接種室內(nèi)接種。長袋培養(yǎng)基多數(shù)采用在滅菌之前先打穴，香菇袋按一面等距離打3個(gè)穴，對應(yīng)的一面打2個(gè)穴，打好穴之后，每個(gè)穴都用事先準(zhǔn)備好的邊長3.4cm方形膠布封口。為了避免膠布硬化，培養(yǎng)基滅菌之后，應(yīng)趁熱搬到消毒過的接種室中冷卻，不宜放在鍋內(nèi)冷卻，待袋溫降至30℃以下方可接種。生產(chǎn)接種生長中菇蕾及子實(shí)體食用菌的長勢一般一個(gè)接種工具配備4人，分別進(jìn)行傳袋、開口與貼封、接種、排放等流水作業(yè)。注意室內(nèi)接種，采用甲醛熏蒸，必須排除有毒氣體后方可進(jìn)行接種。為了減輕人體的藥物反應(yīng)，室內(nèi)可按每立方米空間，用25％～30％氨水溶液50毫升或用碳酸氫氨30克熏蒸，清除甲醛臭味后，再進(jìn)行接種。過氧乙酸是一種新型消毒劑，用于無菌室（箱）消毒時(shí)，藥效優(yōu)于甲醛熏蒸法，沒有刺激性氣味，兼有使用方便、安全、有效、經(jīng)濟(jì)的特點(diǎn)。

（七）培養(yǎng)條件的控制菌種培養(yǎng)條件的控制主要依食用菌的生理要求而定，各種食用菌對外界環(huán)境條件的不同要求，決定培養(yǎng)條件有所不同。菌種培養(yǎng)條件的控制主要是溫度、濕度、空氣、光線的控制。

1、溫度控制溫度控制是菌種培養(yǎng)中最重要的措施。各種食用菌的每一品種對溫度要求不同。在菌種培養(yǎng)中最關(guān)鍵的是冬季的升溫保溫和夏季的降溫控制。

1）升溫（1）常用升溫方法目前在菌種培養(yǎng)室常用電爐