家禽病毒病防治-新城疫的防治（禽病防治課件）

1%雞紅細(xì)胞懸液制備一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、進(jìn)一步熟練雞靜脈采血方法。2、掌握細(xì)胞洗滌的方法步驟。3、掌握1%紅細(xì)胞懸液配制方法。二、實(shí)驗(yàn)器材5ml一次性注射器、酒精棉適量、干棉球適量、10ml離心管、微量移液槍（50ul,1ml,10ml各1支）、移液槍架，微量移液槍滴頭（50ul,1ml,10ml各1盒）、托盤天平、低速離心機(jī)、500ml燒杯2個(gè)、100ml燒杯2個(gè)、50ml燒杯4個(gè)、生理鹽水、3.8%檸檬酸鈉三、實(shí)驗(yàn)步驟1、采集抗凝血注射器內(nèi)抽取適量抗凝劑（按1：5比例）雞保定，暴露抽血部位，消毒（翼下靜脈）進(jìn)針回抽活塞抽取血液拔針，同時(shí)用干棉球止血。2、洗滌紅細(xì)胞將抗凝血放入12ml離心管中。加入3–4倍體積的生理鹽水，混勻。2000r/min離心8min。去掉上層血漿和白細(xì)胞。重復(fù)以上過程，反復(fù)洗滌3次（洗凈血漿和白細(xì)胞）。3、配制1%紅細(xì)胞懸液吸取壓積紅細(xì)胞用生理鹽水配成體積分?jǐn)?shù)為1%的懸液。4℃保存?zhèn)溆谩Ｎ⒘垦囼?yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆瘴⒘垦囼?yàn)的原理和方法步驟。紅細(xì)胞凝集（HA現(xiàn)象）RBCvvvvvRBCRBCRBCRBCRBCRBC血凝性病毒

有其受體的紅細(xì)胞RBC血凝素纖突受體v血凝素纖突二、實(shí)驗(yàn)原理一些動(dòng)物紅細(xì)胞(如雞、豚鼠等)上有某些病毒受體（如禽流感病毒、新城疫病毒、減蛋綜合征等），當(dāng)紅細(xì)胞遇到這些病毒就可產(chǎn)生紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象，簡(jiǎn)稱血凝。96孔V型血凝板5-50ul微量移液器微量移液器架5-50ul微量移液器吸頭三、實(shí)驗(yàn)器材三、實(shí)驗(yàn)器材微型振蕩器廢物缸、廢液缸PBS1%雞紅細(xì)胞懸液雞新城疫病毒標(biāo)準(zhǔn)陽性抗原四、方法步驟1.在96孔V型微量反應(yīng)板的1孔—12孔均加入25ulPBS。四、方法步驟2.吸取25ul抗原(或病毒懸液）加入第1孔，吹打3次-5次，充分混勻。3.從第1孔中吸取25ul懸液至第2孔，混均勻后再吸取25ul懸液至第3孔，依次進(jìn)行倍比稀釋至第11孔，最后從第11孔吸取25ul棄去。第12孔不加抗原或病毒懸液，作為PBS對(duì)照。四、方法步驟4.每孔加入25ulPBS。四、方法步驟5.每孔加入25ul體積分?jǐn)?shù)為1％的雞紅細(xì)胞懸液(將雞紅細(xì)胞懸液充分搖勻后加入）。四、方法步驟6.將微量反應(yīng)板在微型振蕩器振蕩混勻或輕扣反應(yīng)板混勻反應(yīng)物，室溫靜置20min-30min或2℃-8℃靜置60min，當(dāng)對(duì)照孔（第12孔）紅細(xì)胞呈顯著紐扣狀時(shí)判定結(jié)果。微量血凝試驗(yàn)的操作方法步驟（單位：ul）孔號(hào)123456789101112病毒稀釋度1:21:41:81:161:321:641:1281:2561:5121:10241:2048對(duì)照生理鹽水252525252525252525252525病毒液2525252525252525252525棄25生理鹽水2525252525252525252525251%紅細(xì)胞懸液252525252525252525252525振蕩混勻結(jié)果觀察????????

微量血凝試驗(yàn)結(jié)果判定1、判定時(shí)機(jī)室溫靜置20min-30min或2℃-8℃靜置60min，當(dāng)對(duì)照孔（第12孔）紅細(xì)胞呈顯著紐扣狀時(shí)判定結(jié)果。2、判定方法將反應(yīng)板傾斜，觀察紅細(xì)胞有無淚珠狀流淌。完全不凝集不完全凝集完全凝集ABC2、判定方法以完全凝集（不流淌）的最高稀釋倍數(shù)為抗原或病毒的血凝效價(jià)。下圖抗原或病毒的血凝效價(jià)為8log2(1:256)。完全凝集的病毒的最高稀釋倍數(shù)為1個(gè)血凝單位（HAU）。2、判定方法微量血凝抑制試驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆瘴⒘垦种圃囼?yàn)的原理和方法步驟。Ag、Ab不對(duì)應(yīng)RBC抗體紅細(xì)胞凝集（HA現(xiàn)象）RBCvvvvvRBCRBCRBCRBCRBCRBCRBCRBCv血凝性病毒血凝素纖突vvvv

Ag、Ab對(duì)應(yīng)RBC紅細(xì)胞不凝集（HI現(xiàn)象）RBCvvRBCRBC二、實(shí)驗(yàn)原理如有能凝集血球的病毒，其凝集性可被相應(yīng)的抗體所抑制，這種抑制還有特異性。二、實(shí)驗(yàn)原理故病毒的血凝抑制試驗(yàn)也可用已知血清來鑒定未知病毒?？捎靡阎《緛頇z查被檢血清中的相應(yīng)抗體。96孔V型血凝板5-50ul微量移液器微量移液器架5-50ul微量移液器吸頭三、實(shí)驗(yàn)器材三、實(shí)驗(yàn)器材微型振蕩器廢物缸、廢液缸PBS1%雞紅細(xì)胞懸液雞新城疫病毒標(biāo)準(zhǔn)陽性抗原新城疫病毒標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、陰性血清四、方法步驟1.在96孔V形血凝板第1孔～第11孔各加入25uL

PBS,第12孔加入50ulPBS。四、方法步驟2.吸取25uL血清加入第1孔，充分混勻后移出25uL至第2孔，依次類推，倍比稀釋至第10孔，并從第10孔棄除25uL。四、方法步驟4.第1～第11孔各加入25uL4HAU抗原，振蕩15S，使液體混合均勻，室溫至少靜置20min，或2℃-8℃至少60min。四、方法步驟5.在第1孔-第12孔各加入25uL1％的雞紅細(xì)胞懸液(將雞紅細(xì)胞懸液充分搖勻后加入）。四、方法步驟6.振蕩混勻，室溫靜置20min-40min或2℃-8℃靜置40min-60min，當(dāng)對(duì)照孔（第12孔）紅細(xì)胞呈顯著紐扣狀時(shí)判定結(jié)果。四、方法步驟7.第11孔為抗原對(duì)照，第12孔為PBS對(duì)照，每次測(cè)定還應(yīng)設(shè)已知效價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)陽性血清和陰性血清作對(duì)照?？乖瓕?duì)照PBS對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)陽性血清對(duì)照陰性血清作對(duì)照微量毒血凝抑制試驗(yàn)的操作方法（單位：mL）孔

號(hào)123456789101112血清稀釋度1:21:41:81:161:321:641:1281:2561:5121:1024病毒對(duì)照陰性對(duì)照生理鹽水2525252525252525252525

50被檢雞血清25252525252525252525棄25

4單位病毒2525252525252525252525室溫中靜置30min0.5%紅細(xì)胞252525252525252525252525

振蕩混勻結(jié)果觀察??微量血凝抑制試驗(yàn)結(jié)果判定1、判定時(shí)機(jī)室溫靜置20min-40min或2℃-8℃靜置40min-60min，當(dāng)對(duì)照孔（第12孔）紅細(xì)胞呈顯著紐扣狀時(shí)判定結(jié)果。2、判定方法將反應(yīng)板傾斜，從背側(cè)觀察加樣孔底部的紅細(xì)胞是否呈淚痕狀流淌。完全不凝集不完全凝集完全凝集ABC2、判定方法以完全抑制4HAU抗原的最高血清稀釋倍數(shù)為該血清的HI抗體效價(jià)。下圖血清的HI抗體效價(jià)為7log2。只有當(dāng)陰性血清對(duì)照HI抗體效價(jià)≤2log2，陽性血清對(duì)照HI抗體效價(jià)與與標(biāo)定效價(jià)相差≤1個(gè)滴度，紅細(xì)胞對(duì)照孔無自凝現(xiàn)象，試驗(yàn)結(jié)果有效。HI效價(jià)≤3log2，判為HI試驗(yàn)陰性；HI效價(jià)≥4log2，判為HI試驗(yàn)陽性。2、判定方法新城疫（ND），又稱亞洲雞瘟、偽雞瘟。被國(guó)家列為動(dòng)物一類傳染病。新城疫病原與流行病學(xué)1病原新城疫病毒（NDV），屬于副粘病毒科、腮腺炎病毒屬的禽副黏病毒。新城疫病毒只有一個(gè)血清型。根據(jù)對(duì)雞的致病性，病毒株分為三型：速發(fā)型（強(qiáng)毒力型）、中發(fā)型（中等毒力型）、緩發(fā)型（低毒力型）新城疫病毒囊膜上有血凝素，可與雞等動(dòng)物的紅細(xì)胞表面受體結(jié)合，引起紅細(xì)胞凝集（HA）?？捎肏A試驗(yàn)測(cè)定疫苗或分離物中病毒含量。這種血凝特性能被血清中新城疫抗體特異性抑制（HI），HI試驗(yàn)可用于鑒定病毒、診斷疾病和免疫監(jiān)測(cè)。1病原NDV能在雞胚和多種細(xì)胞上生長(zhǎng)繁殖尿囊腔接種9-11日齡雞胚病毒存在于病禽的所有器官組織腦、脾、肺含毒量最高，骨髓帶毒時(shí)間最長(zhǎng)抵抗力不耐熱，對(duì)PH較穩(wěn)定，對(duì)低溫有很強(qiáng)的的抵抗力對(duì)消毒藥抵抗力弱：常用的消毒藥如2%氫氧化鈉、5%漂白粉、70%酒精1病原2流行病學(xué)易感動(dòng)物雞、火雞、珍珠雞、野雞都易感。雞最易感，其次野雞。鴿、鵪鶉、觀賞鳥也易感。（鴿瘟、鴿1型副黏病毒?。Z可感染發(fā)病。（鵝副黏病毒?。喛筛腥?，很少表現(xiàn)癥狀。野禽、籠養(yǎng)鳥（鸚鵡）多為隱性感染。人也可感染，偶發(fā)結(jié)膜炎、發(fā)熱、頭痛等癥狀。傳染源：病雞、帶毒雞、其它鳥類傳播途徑呼吸道、消化道機(jī)械傳播者：野禽、外寄生蟲、人流行特點(diǎn)不分雞的品種、年齡，一年四季均可發(fā)生在易感雞群中迅速傳播，呈毀滅性流行，在非免疫雞群，發(fā)病率和病死率可達(dá)到90%以上非典型新城疫多發(fā)生于免疫雞群2流行病學(xué)新城疫防控

1.預(yù)防措施：綜合性預(yù)防措施在做好衛(wèi)生管理和嚴(yán)格消毒是基礎(chǔ)在，科學(xué)有效免疫接種是預(yù)防本病的關(guān)鍵。合理做好免疫接種建立免疫監(jiān)測(cè)制度（1）合理做好免疫接種

疫苗種類：包括活疫苗和滅活疫苗兩類

品系毒力適用年齡免疫方法Ⅰ系中等經(jīng)弱毒疫苗免疫后雞或2月齡以上的雞肌肉注射或刺種Ⅱ系（B1株)弱毒大、小雞均可滴鼻、點(diǎn)眼、飲水、氣霧Ⅳ系（Lasota株）及克隆30弱毒大、小雞均可滴鼻、點(diǎn)眼、飲水、氣霧特點(diǎn)可刺激機(jī)體產(chǎn)生體液免疫、細(xì)胞免疫和局部免疫，很快產(chǎn)生保護(hù)力，首次免疫受母源抗體影響?；钜呙缙废得庖叻椒↙asota株滅活后加入油佐劑制成肌肉或皮下注射鴿1型副黏病毒油乳劑滅活苗肌肉或皮下注射優(yōu)點(diǎn)安全可靠，容易保存，產(chǎn)生的抗體水平高，維持時(shí)間較長(zhǎng)。滅活苗和活苗配合使用，效果更好。滅活疫苗日齡疫苗品系免疫方法10日齡Ⅳ系（Lasota株）或克隆30油乳劑滅活苗點(diǎn)眼滴鼻皮下注射半羽份50日齡Ⅳ系（Lasota株）或克隆30氣霧免疫17周齡油乳劑滅活苗皮下或肌肉注射以后根據(jù)抗體水平的監(jiān)測(cè)，決定是否進(jìn)行疫苗免疫發(fā)現(xiàn)抗體水平參差不齊，立即用Ⅳ系氣霧免疫，可持續(xù)到雞淘汰規(guī)?；N雞和蛋雞場(chǎng)免疫程序：因地制宜日齡疫苗品系免疫方法7-10日齡Ⅳ系（Lasota株）或克隆30點(diǎn)眼滴鼻25-30日齡Ⅳ系（Lasota株）皮下或肌肉注射60日齡Ⅰ系皮下或肌肉注射17周齡油乳劑滅活苗皮下或肌肉注射小雞場(chǎng)或個(gè)體戶雞場(chǎng)日齡疫苗品系免疫方法7-10日齡Ⅳ系（Lasota株）或克隆30點(diǎn)眼滴鼻20日齡Ⅳ系（Lasota株）2-3倍量飲水免疫商品肉雞（2）建立免疫監(jiān)測(cè)制度定期抽樣采血，測(cè)定雞群HI抗體效價(jià)根據(jù)HI效價(jià)，確定首免和再次免疫時(shí)間

1：16以上，保護(hù)雞群免于發(fā)病死亡低于1：8，馬上接種規(guī)?；u場(chǎng)，盡量確?？贵w滴度大于1：642.發(fā)病后控制措施懷疑為新城疫，疫情報(bào)告確診后，由政府部門劃定疫區(qū)，進(jìn)行撲殺、封鎖、隔離和消毒等嚴(yán)格的防疫措施隔離封鎖飼養(yǎng)：禁止人員工具向健康雞舍流動(dòng)、用火堿水消毒、病雞無害化處理緊急接種：對(duì)疫區(qū)和受威脅區(qū)的雞群中沒有癥狀的易感雞，雛雞2～4倍IV系+油乳劑苗1羽份；中雛或成雞2倍Ⅰ系。在最后1只病雞死亡或撲殺后2周，經(jīng)全場(chǎng)消毒，解除封鎖。新城疫臨床診斷1臨床癥狀對(duì)雞新城疫臨床癥狀的描述，有幾種不同的分型方法，分別介紹如下：典型最急性型急性型慢性型非典型最急性型：見于暴發(fā)初期，雞群無明顯異常，突然出現(xiàn)急性死亡病例。典型新城疫急性型典型新城疫精神沉郁、發(fā)熱、食欲廢絕、飲欲增加。雞冠、肉髯呈暗紅色、紫藍(lán)色或紫黑色嗉囔內(nèi)充滿未消化的飼料和酸臭的液體下痢，糞便呈黃綠色呼吸困難，有啰音，張口伸頸出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，表現(xiàn)為全身抽搐、扭頸、癱瘓、翅麻痹等。產(chǎn)蛋量