分子體外診斷檢驗 唾液檢驗前過程的規(guī)范 提取人類DNA

ICS11.100.10

CCSC30

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/TXXXXX—XXXX/ISO4307:2021

`

分子體外診斷試驗唾液檢驗前過程的規(guī)范

提取人類DNA

Molecularinvitrodiagnosticexaminations—Specificationsfor

pre-examinationprocessesforsaliva—IsolatedhumanDNA

(ISO4307:2021,IDT)

（征求意見稿）

在提交反饋意見時，請將您知道的相關(guān)專利連同支持性文件一并附上。

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實施

GB/TXXXXX—XXXX/ISO4307:2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件等同采用ISO4307:2021《分子體外診斷試驗——從唾液中提取人類DNA檢驗前過程的規(guī)范》。

本文件做了下列最小限度的編輯性改動：

刪除ISO4307：2021的前言和引言；

用適用的我國標(biāo)準(zhǔn)化文件替換“規(guī)范性引用文件”中ISO/IEC國際文件；

用適用的我國標(biāo)準(zhǔn)化文件替換“術(shù)語和定義”中的ISO/IEC國際文件；

用適用的我國標(biāo)準(zhǔn)化文件替換“參考文獻(xiàn)”中ISO/IEC國際文件。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。

本文件由國家藥品監(jiān)督管理局提出。

本文件由全國醫(yī)用臨床檢驗實驗室和體外診斷系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會（SAC/TC136）歸口。

本文件起草單位：

本文件主要起草人：

II

GB/TXXXXX—XXXX/ISO4307:2021

引言

因分子體外診斷技術(shù)的發(fā)展，醫(yī)學(xué)取得了重大進(jìn)展。分析人體組織和體液中的核酸、蛋白質(zhì)和代謝

物的新技術(shù)有望使醫(yī)學(xué)取得進(jìn)一步進(jìn)展。然而，在標(biāo)本采集、運(yùn)輸、儲存和處理過程中，這些分子的情

況可能發(fā)生顯著變化，從而使診斷或研究的結(jié)果不可靠，甚至不能分析。即由于檢驗前的因素，使隨后

的分析化驗不能反映患者的真實情況。

DNA檢測是臨床診斷常用的輔助診斷技術(shù)。例如：患病傾向測試、藥物基因組學(xué)、從精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的角

度分析遺傳疾病等。這是一個醫(yī)學(xué)分子診斷快速發(fā)展的領(lǐng)域。

唾液越來越多地作為一種替代血液的非侵入性標(biāo)本來檢測人類DNA。唾液含有微生物和外來物質(zhì)

（例如食物殘渣），所以患者或供者的唾液成分會更加復(fù)雜和獨(dú)特。因此，采集前需要向患者或供者說

明采集前的準(zhǔn)備工作，并檢查他們是否遵守，以減少標(biāo)本的可變性。與采集侵入性標(biāo)本相比，采集唾液

標(biāo)本不需要經(jīng)過訓(xùn)練和教育的專業(yè)人員或?qū)Ｓ迷O(shè)備，只要通過良好的指導(dǎo)和保證采集設(shè)備的安全性，采

集者就可能在家自行采集。但要注意的是，在家采集也會導(dǎo)致標(biāo)本的高變異性。因此，醫(yī)學(xué)實驗室/體

外診斷制造商在進(jìn)行驗證和確認(rèn)設(shè)計時，也需要注意標(biāo)本的可變性。

唾液中的DNA可能會片段化或降解。此外，唾液標(biāo)本中的細(xì)菌也能繼續(xù)生長繼而稀釋人類的DNA。

這些細(xì)菌分泌的脫氧核糖核酸酶也能加速DNA降解。這些都會可能影響DNA檢測的靈敏度和可靠性。

從標(biāo)本采集到DNA檢測的整個過程都需要標(biāo)準(zhǔn)化，以盡量減少如DNA降解和唾液采集后的片段化等

檢測前因素的影響。本文件包含為獲得高質(zhì)量的唾液標(biāo)本/樣品和從中分離出用于人類DNA檢測而需要

采取的特殊措施。

III

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分子體外診斷試驗唾液檢驗前過程的規(guī)范提取人類DNA

1范圍

本文件規(guī)定了在分子檢驗的檢驗前階段，如何處理、貯存、處置和記錄擬作人類DNA檢驗的唾液標(biāo)

本的要求和建議。

本文件適用于分子體外診斷檢驗，包括醫(yī)學(xué)實驗室和分子病理學(xué)實驗室進(jìn)行的實驗室自建項目；也

能適用于實驗室客戶、體外診斷開發(fā)人員和制造商、生物樣本庫、從事生物醫(yī)學(xué)研究的機(jī)構(gòu)和商業(yè)組織

及監(jiān)管機(jī)構(gòu)。

本文件不包括對唾液收集到吸收材料或通過漱口采集唾液需要采取的專用措施。不包括保存和處理

唾液中游離DNA、病原體和其他細(xì)菌或整個微生物組DNA的措施。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB19781-2005醫(yī)學(xué)實驗室-安全要求（ISO15190:2003,IDT）

GB/T22576.1-2018醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力的要求第1部分：通用要求（ISO15189:2012,IDT）

WS/T806-2022臨床血液與體液檢驗基本技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)

WS/T442-2014臨床實驗室生物安全指南

WS/T514-2017臨床檢驗方法檢出能力的確認(rèn)和驗證

3術(shù)語和定義

GB/T22576.1界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。

環(huán)境溫度ambienttemperature

未經(jīng)調(diào)節(jié)的周圍空氣的溫度。

分析物analyte

被測量名稱所代表的組分。

[來源：GB/T21415-2008,3.2，有修改]

檢驗性能examinationperformance

測試待測分析物檢驗的準(zhǔn)確度、精密度和靈敏度。

注：也包含其他測試性能特性，比如穩(wěn)健性、重復(fù)性等。

1

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DNA穩(wěn)定劑DNAstabilizers

指能盡量減少DNA降解和碎裂的化合物、溶液或混合物。

封閉系統(tǒng)closedsystem

供應(yīng)商提供的不可改變的系統(tǒng)，包括分析所需的所有組成部分（即硬件、軟件、程序和試劑）。

DNA

以雙鏈或單鏈形式存在的脫氧核糖核苷酸聚合體。

檢驗examination

以確定一個特性的值或特征為目標(biāo)的一組操作。

注：從分離的分析物開始并包括各種用于定性或定量檢驗的參數(shù)測試或化學(xué)操作的過程。

檢驗提供者examinationprovider

提供特定分析測試的實體。

干擾物質(zhì)interferingsubstance

能存在于標(biāo)本中的可能改變檢驗結(jié)果的內(nèi)源性或外源性物質(zhì)（例如穩(wěn)定劑）。

微生物microorganism

包括細(xì)菌、真菌和原生動物。

檢驗前過程pre-examinationprocess

分析前階段/檢驗前工作流程：按時間順序從臨床醫(yī)生的申請開始，包括檢驗申請、患者的準(zhǔn)備和

身份識別、原始樣品的采集、運(yùn)送到醫(yī)學(xué)或病理實驗室和在實驗室內(nèi)進(jìn)行運(yùn)送、分析物的分離并以分析

檢驗開始為結(jié)束的過程。

注：檢驗前階段包括影響預(yù)期檢驗結(jié)果的準(zhǔn)備流程。

原始樣品primarysample

為檢驗、研究或分析一種或多種量或特性而取出的認(rèn)為可代表全部的一獨(dú)立部分的體液、呼出氣、

頭發(fā)或組織。

能力驗證proficiencytesting

利用實驗室間比對，按照預(yù)先制定的準(zhǔn)則評價參加者的能力。

室內(nèi)溫度roomtemperature

本文件中是指18℃-25℃

注：地方或國家法規(guī)可能存在不同定義。

唾液saliva

唾液是一種生物液體，主要由三大唾液腺（腮腺、頜下腺和舌下腺）和口腔內(nèi)的唾液腺分泌物組成。

2

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唾液采集器salivacollectiondevice

用于采集唾液標(biāo)本的試管或其他容器。

樣品sample

取自原始樣品的一部分或多部分。

穩(wěn)定性stability

標(biāo)本/樣品在特定儲存條件下，在特定時間內(nèi)保持特定屬性值的能力。

注：本文件涉及的分析物是所分離的DNA。

貯存storage

在適宜的條件下長時間中斷樣品、分析物或其衍生物（如染色切片或組織塊）的分析前工作流程，

以保持其特性。

注：通常在實驗室檔案庫或生物樣本庫中進(jìn)行長時間貯存。

確認(rèn)validation

通過提供客觀證據(jù)對特定的預(yù)期用途或應(yīng)用要求已得到滿足的認(rèn)定。

驗證verification

通過提供客觀證據(jù)確認(rèn)特定要求已得到滿足。

注1：“已驗證”一詞用于表明相應(yīng)的狀態(tài)。

注2：認(rèn)定可能包括以下活動：進(jìn)行替代計算；比較新的設(shè)計規(guī)格與相似的已核實設(shè)計規(guī)格；進(jìn)行測試和示范；以

及在簽發(fā)前審查文件。

工作流程workflow

完成一項工作所需活動的結(jié)構(gòu)化順序。

4總則

醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量管理體系的通用要求，特別是樣品采集、接收和處理（包括避免交叉污染），參照

GB/T22576.1或ISO/IEC17020。有關(guān)實驗室設(shè)備、試劑和消耗品的要求應(yīng)遵循GB/T22576.1和

ISO/IEC17020。有關(guān)標(biāo)本采集、運(yùn)輸、接收、處理及貯存的內(nèi)容，參照ISO/TS20658。對于生物樣

本庫也能參照ISO20387。

診斷工作流程的所有步驟都可能影響最終的檢驗結(jié)果。因此，包括生物分子穩(wěn)定性、標(biāo)本/樣品貯

存條件以及它們對擬被檢測的生物分子的穩(wěn)定性的影響在內(nèi)的整個工作流程都宜應(yīng)得到驗證和確認(rèn)。這

包括研發(fā)體外診斷醫(yī)療儀器。在整個檢驗前過程中宜應(yīng)檢驗人類DNA的穩(wěn)定性。性能的驗證以及預(yù)期

檢驗的確認(rèn)應(yīng)考慮到唾液標(biāo)本質(zhì)量的可變性。

設(shè)計和開發(fā)唾液DNA實驗時，應(yīng)進(jìn)行風(fēng)險評估（另見ISO14971）。如有需要，應(yīng)制定消除或減

少已確定風(fēng)險的措施，以確保檢驗工作的順利進(jìn)行。這部分內(nèi)容應(yīng)包括審核檢驗前的工作流程步驟。

在設(shè)計檢驗之前或期間，宜確保檢驗所需的最低DNA含量、大小及純度等人類DNA質(zhì)量參數(shù)，確

保其不會影響實驗結(jié)果。

關(guān)于標(biāo)本運(yùn)送和處理的安全說明應(yīng)參見GB/T22576.1和GB19781相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。

3

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在整個檢驗前過程中，應(yīng)采取預(yù)防措施避免不同標(biāo)本/樣品之間的交叉污染，例如：處理不同的標(biāo)

本/樣品時，使用一次性的材料（可行時），或是采用適當(dāng)?shù)那逑闯绦颉?/p>

所有檢驗前步驟，應(yīng)遵循廠家的說明書（如果有）。

如因正當(dāng)理由（例如未能滿足患者的需要）而未按照廠家的說明書進(jìn)行操作，則用戶應(yīng)對其使用和

性能負(fù)責(zé)。

在首次使用任何有潛在危險的物料（例如穩(wěn)定劑中的化學(xué)品）前，宜詳細(xì)閱讀廠家的物料安全資料

表。

5實驗室外部

標(biāo)本采集

5.1.1標(biāo)本供體/患者信息

應(yīng)包括標(biāo)本供體/患者的ID，能用編碼的形式。應(yīng)包括但不局限于：a)標(biāo)本供體/患者的相關(guān)健康狀

況，例如健康狀況、疾病類型、伴隨疾病、人口統(tǒng)計信息（如性別、年齡）；b)采集唾液前的常規(guī)醫(yī)

學(xué)治療和特殊治療信息，例如麻醉劑、藥物治療；c)所要求的檢查類型和目的；d)標(biāo)本供體/患者的相

應(yīng)的知情同意。

5.1.2實驗室對唾液采集裝置的選擇

唾液采集器廠家的說明書宜包括唾液采集器的使用說明，應(yīng)使用制造商規(guī)定的唾液采集器。如用戶

指定使用專用唾液采集器，則應(yīng)按要求使用相應(yīng)品牌。如用戶沒有提供有關(guān)規(guī)格（例如由于以往法律要

求較松），實驗室應(yīng)規(guī)定、驗證、確認(rèn)及記錄唾液采集裝置。不規(guī)范的唾液采集程序、不適當(dāng)?shù)膬Υ?

運(yùn)送條件和DNA分離程序均可能影響人類DNA的質(zhì)量及數(shù)量。為了防止細(xì)菌生長、人類DNA降解和碎片

化，宜應(yīng)在專門研制的含有適當(dāng)穩(wěn)定劑的唾液采集裝置中采集唾液標(biāo)本。如果能使用沒有穩(wěn)定劑的裝置

中采集唾液，則能使用其他符合5.1.4.3標(biāo)準(zhǔn)的保存方法，如低溫瓶或聚丙烯管。不建議在實驗室外使用

這種管子進(jìn)行自我采集。

5.1.3患者唾液樣本的采集和穩(wěn)定

5.1.3.1概述

應(yīng)制定唾液樣本采集方案。

唾液標(biāo)本采集前，應(yīng)向標(biāo)本供體/患者提供來自制造商、實驗室或醫(yī)生的書面說明資料。

用戶說明宜應(yīng)包含唾液標(biāo)本采集的要求和說明。如果沒有的話（例如由于以往法律要求較寬松），

應(yīng)對唾液采集過程進(jìn)行核實和記錄。

采集標(biāo)本的程序應(yīng)包括：

a)唾液標(biāo)本采集、鑒定、儲存及運(yùn)往實驗室設(shè)施的全過程；

b)采集標(biāo)本前須遵循的規(guī)定，特別是與營養(yǎng)、口腔衛(wèi)生有關(guān)的要求，例如在采集樣本前禁食；

c)采集標(biāo)本時避免混有咳嗽/咳痰或鼻分泌物（打噴嚏）所產(chǎn)生的黏液。

為方便自行采集，樣品患者應(yīng)配備合適的唾液采集裝置、身份識別標(biāo)簽（例如標(biāo)簽、射頻識別

（RFID）），以及其他用于采集、貯存及運(yùn)送標(biāo)本的所需物品。

此外，應(yīng)為標(biāo)本供體/患者提供電子的或紙質(zhì)版的唾液標(biāo)本采集的詳細(xì)步驟。

采集標(biāo)本的人能以編碼代稱，根據(jù)GB/T22576.1的要求，應(yīng)記錄采集唾液的時間和日期。

對于唾液采集管的標(biāo)簽（樣本/標(biāo)本識別），應(yīng)遵循GB/T22576.1的標(biāo)準(zhǔn)或附加要求（例如二維碼）。

4

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唾液采集裝置應(yīng)遵循操作說明，特別是：

1)所需的唾液量；

2)采集唾液后立即搖晃或倒置，使唾液與穩(wěn)定劑混合。

注：如果唾液采集裝置中的添加劑與標(biāo)本沒有均勻混合，那么可能會影響唾液DNA的質(zhì)量和數(shù)量，從而可能影響檢

驗結(jié)果的有效性和可靠性。

應(yīng)記錄所有對唾液標(biāo)本的處理過程。

標(biāo)本供體/患者或從標(biāo)本供體/患者處采集唾液標(biāo)本的人應(yīng)確認(rèn)與提供的唾液標(biāo)本采集說明一致。

5.1.3.2使用含DNA穩(wěn)定劑的唾液采集裝置

用戶宜應(yīng)提交經(jīng)過核實的唾液標(biāo)本采集說明書（例如特定的采集裝置、加入穩(wěn)定劑的樣本等）。

如用戶沒有提供這些說明書（例如由于以前的法律要求較寬松），有關(guān)程序需應(yīng)由實驗室進(jìn)行指定、

核實和記錄。實驗室應(yīng)為使用者提供可行的相應(yīng)說明。唾液采集裝置制造商關(guān)于儲存和運(yùn)輸條件的規(guī)定

能作為實驗室自行檢查的具體驗證步驟的基礎(chǔ)或框架。這些宜應(yīng)包括患者/標(biāo)本供體采集標(biāo)本前的準(zhǔn)備，

例如在唾液標(biāo)本采集前至少30分鐘不要吃、喝、吸煙、親吻或咀嚼任何物質(zhì)。

注：使用帶穩(wěn)定劑的采集裝置采集的標(biāo)本可以適應(yīng)較長時間的運(yùn)輸和儲存。

5.1.3.3使用不含DNA穩(wěn)定劑的唾液采集裝置

如果用戶允許使用不含穩(wěn)定劑的唾液采集裝置，則應(yīng)為唾液采集提供指定的經(jīng)驗證過的采集說明。

如果用戶沒有提供這些說明（例如由于以前的法律要求不那么嚴(yán)格），有關(guān)程序應(yīng)由實驗室進(jìn)行指

定、核實和記錄。實驗室應(yīng)為使用者提供相應(yīng)的可行的說明。這些說明宜應(yīng)包括標(biāo)本供體/患者采集標(biāo)

本前的準(zhǔn)備工作，例如在唾液標(biāo)本采集前至少30分鐘不能吃、喝、吸煙、親吻或咀嚼任何食物。

5.1.4標(biāo)本的儲存要求

5.1.4.1概述

對于計劃在生物樣本庫中長期儲存的標(biāo)本，通常不知道后續(xù)會進(jìn)行哪項DNA檢驗，因此，為盡量

保存DNA的完整性，宜應(yīng)使用帶有DNA穩(wěn)定劑的采集裝置。如果采集裝置不含DNA穩(wěn)定劑，則宜應(yīng)根

據(jù)6.4.條例在儲存前對DNA的質(zhì)量和數(shù)量進(jìn)行評估。如果是自行采集，用戶、實驗室或醫(yī)生應(yīng)向標(biāo)本

供體/患者提供書面的唾液標(biāo)本存儲說明。

標(biāo)本供體/患者或從標(biāo)本供體/患者處采集唾液樣本的人員應(yīng)確認(rèn)標(biāo)本是否符合儲存要求。

總儲存時間包含上述所述的唾液標(biāo)本在采集裝置中臨時儲存的時間。

制定唾液標(biāo)本采集的通用規(guī)范。

5.1.4.2使用含DNA穩(wěn)定劑的唾液采集裝置

用戶宜應(yīng)提供經(jīng)過驗證的關(guān)于采集的唾液標(biāo)本的儲存和運(yùn)送要求（例如持續(xù)時間、溫度）。

如果用戶沒有提供這些說明（例如由于以前的法律要求不那么嚴(yán)格），有關(guān)程序應(yīng)由實驗室進(jìn)行指

定、核實和記錄。實驗室應(yīng)為使用者提供相應(yīng)的可行的說明。實驗室能參考唾液采集裝置制造商關(guān)于儲

存和運(yùn)輸條件的規(guī)定制定自己的規(guī)程。

5.1.4.3使用不含DNA穩(wěn)定劑的唾液采集裝置

如果用戶允許使用不含穩(wěn)定劑的唾液采集裝置，則他們應(yīng)提供經(jīng)過核實的唾液標(biāo)本的儲存和運(yùn)送要

求（例如持續(xù)時間、溫度）。如果用戶沒有提供這些說明（例如由于以前的法律要求不那么嚴(yán)格），有

關(guān)程序應(yīng)由實驗室進(jìn)行指定、核實和記錄。實驗室應(yīng)為使用者提供相應(yīng)的可行的說明。標(biāo)本一般需要立

5

GB/TXXXXX—XXXX/ISO4307:2021

即冷凍，在≤-20℃下可儲存3個月，在≤-80℃下可長期儲存。實驗室應(yīng)核實最長的儲存時間，并按

其最短時間進(jìn)行儲存。

不建議在實驗室外使用不含DNA穩(wěn)定劑的采集裝置進(jìn)行自我采集，貯存條件應(yīng)記錄在案（即貯存

時間及溫度）。

轉(zhuǎn)運(yùn)要求

5.2.1概述

用戶需應(yīng)為采集的唾液標(biāo)本提供經(jīng)過驗證的可行的運(yùn)輸條件（例如持續(xù)時間、溫度）。

如果用戶沒有提供這些說明（例如由于以前的法律要求不那么嚴(yán)格），有關(guān)程序應(yīng)由實驗室進(jìn)行指

定、核實和記錄。實驗室應(yīng)為使用者提供相應(yīng)的可行的說明。

實驗室應(yīng)記錄運(yùn)輸?shù)臈l件，包括運(yùn)輸條件的變化，并宜以適當(dāng)?shù)姆绞剑ɡ鐪囟扔涗浧鳎┻M(jìn)行溫度

監(jiān)控和記錄。如果無法進(jìn)行記錄，則宜估計并記錄周圍環(huán)境溫度。參見GB/T22576.1相關(guān)條例。

標(biāo)本運(yùn)送到實驗室的時間也是影響總儲存時間的一個因素。這也包括運(yùn)送到實驗室之前的第三方處

理時間。

5.2.2使用含DNA穩(wěn)定劑的唾液采集裝置

如果使用含DNA穩(wěn)定劑的唾液采集裝置，用戶應(yīng)對廠家提供的運(yùn)輸條件（即持續(xù)時間和溫度）進(jìn)行

驗證。如果檢驗提供者的要求更加嚴(yán)格，則應(yīng)遵守更嚴(yán)格的要求。同時應(yīng)記錄運(yùn)送條件（即持續(xù)時間及

溫度）。

5.2.3使用不含DNA穩(wěn)定劑的唾液采集裝置

如果使用不含DNA穩(wěn)定劑的唾液采集裝置，同樣應(yīng)記錄運(yùn)送條件（即持續(xù)時間及溫度）。

如果使用不含DNA穩(wěn)定劑的唾液采集裝置，同時檢驗提供者沒有提供運(yùn)輸條件，則應(yīng)參考5.1.4.3

相關(guān)條例，即宜在≤-20℃條件下運(yùn)送標(biāo)本，以盡量減少唾液DNA的降解和碎裂，同時應(yīng)記錄運(yùn)送條件

（即持續(xù)時間及溫度）。

6實驗室內(nèi)部

標(biāo)本準(zhǔn)備

實驗室應(yīng)記錄唾液標(biāo)本/樣品的接收日期、時間和采集裝置類型。同時應(yīng)采集并檢查標(biāo)本供體/患者

或曾向標(biāo)本供體/患者采集唾液標(biāo)本的人士的合格確認(rèn)書。與既定運(yùn)送程序規(guī)程的任何偏離都應(yīng)進(jìn)行記

錄，如不符合規(guī)格的標(biāo)簽和運(yùn)輸條件、唾液標(biāo)本體積不足或過量、滲漏/破損、變色器具、不適當(dāng)?shù)牟?/p>

集器具類型或采集規(guī)格等。如果標(biāo)簽、運(yùn)輸及貯存條件或唾液體積不符合規(guī)定，可能會影響檢驗的有效

性和可靠性，標(biāo)本應(yīng)重新采集。

貯存要求

接收標(biāo)本的負(fù)責(zé)人應(yīng)采用名稱或編碼記錄。用戶應(yīng)提供經(jīng)過核實的關(guān)于唾液標(biāo)本儲存的可行的要求

（例如貯存時間、溫度）。如果用戶沒有提供這些說明（例如由于以前的法律要求較寬松），有關(guān)程序

應(yīng)由實驗室進(jìn)行指定、核實和記錄。實驗室應(yīng)為使用者提供相應(yīng)的紙質(zhì)說明書。實驗室應(yīng)記錄標(biāo)本和樣

品采集到DNA提取之前的儲存溫度和時間。儲存溫度和總儲存時間應(yīng)不得超過5.1.4和5.2相關(guān)規(guī)定。

唾液標(biāo)本的總儲存時間應(yīng)包括在唾液采集地點(diǎn)的時間（見5.1.4）、運(yùn)往實驗室的運(yùn)輸時間（見5.2）

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以及在實驗室、生物樣本庫或其他機(jī)構(gòu)中進(jìn)一步儲存的時間，總儲存時間應(yīng)不得超過指定的最長貯存期

限。

唾液DNA的分離

6.3.1概述

用戶應(yīng)為唾液DNA的提取提供經(jīng)過驗證的可行程序。

為避免DNA檢驗過程中所生成的擴(kuò)增物質(zhì)產(chǎn)生交叉污染，宜使用密閉系統(tǒng)，否則DNA分離與檢測過

程的擴(kuò)增步驟不應(yīng)在相同地方進(jìn)行。

如果開發(fā)自動化的DNA分離程序，則應(yīng)采取措施以避免標(biāo)本/樣品之間的交叉污染。

用戶所選用的DNA提取程序提取的DNA分子應(yīng)符合分子檢驗的要求和規(guī)格（例如DNA的質(zhì)量和數(shù)量、

DNA濃度、DNA長度）。

由于唾液標(biāo)本含有微生物、病毒和食物殘渣，所以分離出來的人類DNA通常會含有微生物DNA和

少量來自食物的其他生物DNA。由于唾液標(biāo)本中的微生物和病毒含量可能在樣本供體/患者之間具有很

大的變異性，所以微生物DNA污染的程度也不同，這可能影響人類DNA的定量。一些研究顯示，從含

有穩(wěn)定劑的特定采集管采集的每毫升唾液中，總DNA產(chǎn)量（不分人類和非人類DNA）介于0.1微克和

26微克之間。在含有穩(wěn)定劑的特定采集管內(nèi)采集的標(biāo)本，微生物含量中位數(shù)低于漱口水和口腔拭子樣

本。與DNA接觸的試劑和消耗品宜是無DNA的。DNA提取性能宜在DNA能力驗證中進(jìn)行檢測。

6.3.2使用商品化試劑盒

如果用戶要求使用市面上某種專用的DNA分離試劑盒，則應(yīng)嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作。

如果用戶沒有明確要求（例如由于以往較寬松的法律要求），但唾液采集裝置制造商已推薦某一

DNA分離試劑盒，實驗室能推薦使用此試劑盒。

如果兩者都沒有指定專用的DNA分離試劑盒，實驗室應(yīng)選擇使用有批文的合適的DNA分離試劑盒。

如果可能的話，選擇指定標(biāo)本/樣品為唾液的DNA分離試劑盒。實驗室應(yīng)驗證所選試劑盒是否合適。

6.3.3使用實驗室自建的程序

如果所有的商用DNA分離試劑盒均可能無法滿足實驗要求，實驗室應(yīng)通過以下兩種方式建立自己的

規(guī)程：

——以唾液為提取標(biāo)本/樣品修改現(xiàn)有的DNA分離試劑盒提取程序；

——使用市售的只用于研究的DNA分離試劑盒；

——建立自己的規(guī)程。

經(jīng)上述程序選擇并確認(rèn)的DNA分離程序，實驗室應(yīng)給出可按照執(zhí)行的具體使用說明。

注1：不同的DNA分離程序獲得的DNA片段長度可能不一。此外，DNA數(shù)量和質(zhì)量（例如純度）可能也會有所不同。

注2：采用離心、酶或化學(xué)液化等方法對粘性標(biāo)本/樣品進(jìn)行預(yù)處理，能使樣品均勻化，提高核酸的提取效率。

注3：穩(wěn)定分子可能會干擾實驗，因此在DNA提取過程種，需要專門的步驟避免DNA穩(wěn)定分子的污染。

DNA的定性和定量評估

在進(jìn)行實驗前，需要根據(jù)檢驗提供者的程序，宜對DNA進(jìn)行定性和定量評估，如果檢驗提供者沒有

相應(yīng)程序，則依照公認(rèn)的物理、化學(xué)和生物化學(xué)程序驗證?？赡馨ㄒ韵乱环N或多種檢測技術(shù)（根據(jù)具

體的檢驗測試做選擇）：

a)通過檢測吸光度（A260）或熒光光譜測定量；

注：唾液標(biāo)本的核酸可能含有大量微生物、病毒和食物殘渣的DNA。這些共同構(gòu)成了唾液核酸的總量。因此只能使

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用特定的實驗（d）對人類的DNA進(jìn)行定量。

b)通過測量吸光度檢測純度（如：波長掃描、計算A260/A280的比值）；

c)檢測DNA完整性，比如通過電泳、毛細(xì)管電泳、色譜、分子生物方法（如3’/5’分析或差異長

度擴(kuò)增子比率）；

d)人類DNA定量（例如針對人類基因組中已知拷貝數(shù)的一個獨(dú)特的保守序列的定量PCR或定向

PCR，此方法需要一個初級或次級人類DNA標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行校準(zhǔn)）。

e)檢測干擾物質(zhì)的存在（使用外源性質(zhì)控品，即加入DNA質(zhì)控品；或檢驗異常的qRCP反應(yīng)曲

線）；

f)通過將增加的洗脫液體積引入檢驗中，使用內(nèi)源性DNA進(jìn)行RT-qPCR抑制試驗。

宜使用成熟的DNA測試程序監(jiān)控DNA分離的全過程。

DNA的儲存

6.5.1概述

用戶應(yīng)提供經(jīng)核實的可行的唾液DNA儲存說明書。

如果唾液DNA需要長期存儲，通常將DNA冷凍在≤-20℃。也能采取經(jīng)確認(rèn)的更適合后續(xù)檢測的其

他方法。

長期貯存時，宜將DNA等分分裝，以避免反復(fù)凍融。

DNA樣本的任何解凍和冷凍都宜記錄在案。

對于少量DNA，宜使用能夠減少管壁對核酸吸附的貯存容器。

宜避免DNA在長期貯存過程中因水分蒸發(fā)而意外產(chǎn)生的冷凍干燥。因此，在長期貯存過程中，宜

使用適宜的貯存容器（如：帶螺旋蓋的低溫小瓶）以避免水分蒸發(fā)。宜記錄貯存容器的類型及蓋子類型。

應(yīng)保證樣品的可追溯性。若果DNA需要長期儲存，宜建立一個經(jīng)過確認(rèn)的過程來組織并唯一標(biāo)記

含有分離DNA或其衍生物的等分試樣的貯存容器。為避免樣品遺失或混淆，建議使用適合貯存溫度的

標(biāo)識，包括可讀的RFID，一維或二維條形碼，或制造商提供的、帶有預(yù)先打印的唯一編碼并適用于低

溫貯存的貯存容器。

6.5.2使用商品化試劑盒提取的DNA的儲存

如果用戶沒有提供唾液DNA儲存說明（例如由于以前的法律要求不太嚴(yán)格），實驗室能以唾液DNA

分離試劑盒制造商的使用說明作為基礎(chǔ)，制定自己的經(jīng)驗證過的DNA儲存程序。此儲存程序應(yīng)以書面

形式呈現(xiàn)并要求嚴(yán)格遵守。

6.5.3使用實驗室自建規(guī)程提取的DNA的儲存

如果用戶沒有提供唾液DNA儲存說明，唾液DNA檢測實驗室應(yīng)指定、核實和記錄儲存唾液DNA的

條件，例如溫度、時間和儲存所需的其他條件。這些應(yīng)以書面形式呈現(xiàn)并要嚴(yán)格遵守。

為長期儲存，分離的DNA宜放在適當(dāng)?shù)木彌_液（例如TE）中，并儲存在≤-20℃。也能使用其他經(jīng)確

認(rèn)的儲存方法。

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參考文獻(xiàn)

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[4]ISO20395,Biotechnology—Requirementsforevaluatingtheperformanceof

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similarityinqPCR.NucleicAcidsRes.2011,pp.1–12

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GB/TXXXXX—XXXX/ISO4307:2021

目次

前言II

..........................................................................................................................................................

引言III

........................................................................................................................................................

1范圍1

.....................................................................................................................................................

2規(guī)范性引用文件1

..................................................................................................................................

3術(shù)語和定義1

..........................................................................................................................................

4總則3

.....................................................................................................................................................

5實驗室外部4

..........................................................................................................................................

標(biāo)本采集4

.......................................................................................................................................

轉(zhuǎn)運(yùn)要求6

.......................................................................................................................................

6實驗室內(nèi)部6

..........................................................................................................................................

標(biāo)本準(zhǔn)備6

.......................................................................................................................................

貯存要求6

.......................................................................................................................................

唾液DNA的分離7

..........................................................................................................................

DNA的定性和定量評估7

................................................................................................................

DNA的儲存8

..................................................................................................................................

參考文獻(xiàn)9

...................................................................................................................................................

I

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分子體外診斷試驗唾液檢驗前過程的規(guī)范提取人類DNA

1范圍

本文件規(guī)定了在分子檢驗的檢驗前階段，如何處理、貯存、處置和記錄擬作人類DNA檢驗的唾液標(biāo)

本的要求和建議。

本文件適用于分子體外診斷檢驗，包括醫(yī)學(xué)實驗室和分子病理學(xué)實驗室進(jìn)行的實驗室自建項目；也

能適用于實驗室客戶、體外診斷開發(fā)人員和制造商、生物樣本庫、從事生物醫(yī)學(xué)研究的機(jī)構(gòu)和商業(yè)組織

及監(jiān)管機(jī)構(gòu)。

本文件不包括對唾液收集到吸收材料或通過漱口采集唾液需要采取的專用措施。不包括保存和處理

唾液中游離DNA、病原體和其他細(xì)菌或整個微生物組DNA的措施。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB19781-2005醫(yī)學(xué)實驗室-安全要求（ISO15190:2003,IDT）

GB/T22576.1-2018醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力的要求第1部分：通用要求（ISO15189:2012,IDT）

WS/T806-2022臨床血液與體液檢驗基本技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)

WS/T442-2014臨床實驗室生物安全指南

WS/T514-2017臨床檢驗方法檢出能力的確認(rèn)和驗證

3術(shù)語和定義

GB/T22576.1界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。

環(huán)境溫度ambienttemperature

未經(jīng)調(diào)節(jié)的周圍空氣的溫度。

分析物analyte

被測量名稱所代表的組分。

[來源：GB/T21415-2008,3.2，有修改]

檢驗性能examinationperformance

測試待測分析物檢驗的準(zhǔn)確度、精密度和靈敏度。

注：也包含其他測試性能特性，比如穩(wěn)健性、重復(fù)性等。

1

GB/TXXXXX—XXXX/ISO4307:2021

DNA穩(wěn)定劑DNAstabilizers

指能盡量減少DNA降解和碎裂的化合物、溶液或混合物。

封閉系統(tǒng)closedsystem

供應(yīng)商提供的不可改變的系統(tǒng)，包括分析所需的所有組成部分（即硬件、軟件、程序和試劑）。

DNA

以雙鏈或單鏈形式存在的脫氧核糖核苷酸聚合體。

檢驗examination

以確定一個特性的值或特征為目標(biāo)的一組操作。

注：從分離的分析物開始并包括各種用于定性或定量檢驗的參數(shù)測試或化學(xué)操作的過程。

檢驗提供者examinationprovider

提供特定分析測試的實體。

干擾物質(zhì)interferingsubstance

能存在于標(biāo)本中的可能改變檢驗結(jié)果的內(nèi)源性或外源性物質(zhì)（例如穩(wěn)定劑）。

微生物microorganism

包括細(xì)菌、真菌和原生動物。

檢驗前過程pre-examinationprocess

分析前階段/檢驗前工作流程：按時間順序從臨床醫(yī)生的申請開始，包括檢驗申請、患者的準(zhǔn)備和

身份識別、原始樣品的采集、運(yùn)送到醫(yī)學(xué)或病理實驗室和在實驗室內(nèi)進(jìn)行運(yùn)送、分析物的分離并以分析

檢驗開始為結(jié)束的過程。

注：檢驗前階段包括影響預(yù)期檢驗結(jié)果的準(zhǔn)備流程。

原始樣品primarysample

為檢驗、研究或分析一種或多種量或特性而取出的認(rèn)為可代表全部的一獨(dú)立部分的體液、呼出氣、

頭發(fā)或組織。

能力驗證proficiencytesting

利用實驗室間比對，按照預(yù)先制定的準(zhǔn)則評價參加者的能力。

室內(nèi)溫度roomtemperature

本文件中是指18℃-25℃

注：地方或國家法規(guī)可能存在不同定義。

唾液saliva

唾液是一種生物液體，主要由三大唾液腺（腮腺、頜下腺和舌下腺）和口腔內(nèi)的唾液腺分泌物組成。

2

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唾液采集器salivacollectiondevice

用于采集唾液標(biāo)本的試管或其他容器。

樣品sample

取自原始樣品的一部分或多部分。

穩(wěn)定性stability

標(biāo)本/樣品在特定儲存條件下，在特定時間內(nèi)保持特定屬性值的能力。

注：本文件涉及的分析物是所分離的DNA。

貯存storage

在適宜的條件下長時間中斷樣品、分析物或其衍生物（如染色切片或組織塊）的分析前工作流程，

以保持其特性。

注：通常在實驗室檔案庫或生物樣本庫中進(jìn)行長時間貯存。

確認(rèn)validation

通過提供客觀證據(jù)對特定的預(yù)期用途或應(yīng)用要求已得到滿足的認(rèn)定。

驗證verification

通過提供客觀證據(jù)確認(rèn)特定要求已得到滿足。

注1：“已驗證”一詞用于表明相應(yīng)的狀態(tài)。

注2：認(rèn)定可能包括以下活動：進(jìn)行替代計算；比較新的設(shè)計規(guī)格與相似的已核實設(shè)計規(guī)格；進(jìn)行測試和示范；以

及在簽發(fā)前審查文件。

工作流程workflow

完成一項工作所需活動的結(jié)構(gòu)化順序。

4總則

醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量管理體系的通用要求，特別是樣品采集、接收和處理（包括避免交叉污染），參照

GB/T22576.1或ISO/IEC17020。有關(guān)實驗室設(shè)備、試劑和消耗品的要求應(yīng)遵循GB/T22576.1和

ISO/IEC17020。有關(guān)標(biāo)本采集、運(yùn)輸、接收、處理及貯存的內(nèi)容，參照ISO/TS20658。對于生物樣

本庫也能參照ISO20387。

診斷工作流程的所有步驟都可能影響最終的檢驗結(jié)果。因此，包括生物分子穩(wěn)定性、標(biāo)本/樣品貯

存條件以及它們對擬被檢測的生物分子的穩(wěn)定性的影響在內(nèi)的整個工作流程都宜應(yīng)得到驗證和確認(rèn)。這

包括研發(fā)體外診斷醫(yī)療儀器。在整個檢驗前過程中宜應(yīng)檢驗人類DNA的穩(wěn)定性。性能的驗證以及預(yù)期

檢驗的確認(rèn)應(yīng)考慮到唾液標(biāo)本質(zhì)量的可變性。

設(shè)計和開發(fā)唾液DNA實驗時，應(yīng)進(jìn)行風(fēng)險評估（另見ISO14971）。如有需要，應(yīng)制定消除或減

少已確定風(fēng)險的措施，以確保檢驗工作的順利進(jìn)行。這部分內(nèi)容應(yīng)包括審核檢驗前的工作流程步驟。

在設(shè)計檢驗之前或期間，宜確保檢驗所需的最低DNA含量、大小及純度等人類DNA質(zhì)量參數(shù)，確

保其不會影響實驗結(jié)果。

關(guān)于標(biāo)本運(yùn)送和處理的安全說明應(yīng)參見GB/T22576.1和GB19781相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。

3

GB/TXXXXX—XXXX/ISO4307:2021

在整個檢驗前過程中，應(yīng)采取預(yù)防措施避免不同標(biāo)本/樣品之間的交叉污染，例如：處理不同的標(biāo)

本/樣品時，使用一次性的材料（可行時），或是采用適當(dāng)?shù)那逑闯绦颉?/p>

所有檢驗前步驟，應(yīng)遵循廠家的說明書（如果有）。

如因正當(dāng)理由（例如未能滿足患者的需要）而未按照廠家的說明書進(jìn)行操作，則用戶應(yīng)對其使用和

性能負(fù)責(zé)。

在首次使用任何有潛在危險的物料（例如穩(wěn)定劑中的化學(xué)品）前，宜詳細(xì)閱讀廠家的物料安全資料

表。

5實驗室外部

標(biāo)本采集

5.1.1標(biāo)本供體/患者信息

應(yīng)包括標(biāo)本供體/患者的ID，能用編碼的形式。應(yīng)包括但不局限于：a)標(biāo)本供體/患者的相關(guān)健康狀

況，例如健康狀況、疾病類型、伴隨疾病、人口統(tǒng)計信息（如性別、年齡）；b)