反芻動物消化道排泄物蠕蟲蟲卵診斷技術(shù)規(guī)范

2本文件規(guī)定了反芻動物消化道排泄物蠕蟲蟲卵診斷GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試GB/T25169-2022畜禽糞便監(jiān)測技術(shù)GB/T36195-2018畜禽糞便無害化處理技4.1消化道排泄物的采集4.1.1從反芻動物直腸采集新鮮排泄物或觀察動物消化道排泄物排出后立即從飼養(yǎng)區(qū)域地面上收集新鮮的排泄物。采集的排泄物應(yīng)放置在干凈的容器內(nèi)，盡量保持完整，避免受到污染。4.1.3每個動物應(yīng)收集10-20g排泄物（最少34.1.4采集的排泄物應(yīng)注明收集時間和日期、動物種類、動物名稱或編號、動物主人4.1.5采集時應(yīng)注意排泄物的顏色、粘稠度和是否有蠕蟲。應(yīng)注意排泄物中是否有線蟲或絳蟲節(jié)4.2消化道排泄物的運輸和保存4.2.3若需保存較長時間，應(yīng)將排泄物與10%福爾馬林按1體積排泄物與3體積裹并放置在一個聚苯乙烯泡沫容器或厚紙板箱中4.3消化道排泄物檢查通過肉眼或放大鏡對采集的消化道排泄物進(jìn)4.3.1.3觀察排泄物是否帶血：在新鮮排泄物中，若蠕蟲病嚴(yán)重，或/和其他腸道疾病，血液呈現(xiàn)），4.3.1.5觀察排泄物是否含蠕蟲：絳蟲的節(jié)片/段、線蟲等蠕蟲或幼蟲可以肉眼觀察到。若有應(yīng)從排泄物中取出，用放大鏡或解剖顯微鏡進(jìn)行檢查。若是用藥物驅(qū)蟲后的排泄物，應(yīng)注意觀察的4.3.2顯微鏡檢查常用的顯微鏡物鏡放大倍率為4×、10×4.3.2.1直接涂片法檢查。為提高檢出率和準(zhǔn)確性，每個樣本應(yīng)至少檢查十片以上。4.3.2.2漂浮法4將少量的新鮮排泄物樣品（大約1-2g）加到10ml的漂浮溶液中，在充分混合后，將懸浮液倒入試在顯微鏡下檢查。或用離心機，通過離心加4.3.2.3沉淀法取排泄物樣品2g，加足量清水（100ml以上），攪拌均勻，將排泄物通過粗棉布或銅篩過濾，濾液4.3.2.4錦綸篩兜集卵法取篩兜內(nèi)排泄物殘渣用直接涂片法檢查。此法適用于寬度大于60μm的4.3.2.5排泄物樣品中蟲卵計數(shù)法麥?zhǔn)嫌嫈?shù)室，置顯微鏡下觀察記數(shù)計數(shù)室（1cm2）內(nèi)蟲卵數(shù)。通常一次記數(shù)4個室，然后以平均值計。pergramoffeces，EPG）。每克糞便蟲卵數(shù)或幼蟲數(shù)量來預(yù)估動物感染強度或抗蠕蟲藥物4.3.3排泄物樣品的培養(yǎng)與幼蟲分離由一根橡膠管連接到一個試管。然后將漏斗灌滿水或生理鹽水，溫度約為30℃,在樣本上方留1至3cm。4.3.3.2培養(yǎng)皿培養(yǎng)法育成第三期幼蟲，并集中于培養(yǎng)皿蓋上的水滴中。將幼蟲吸出置載玻片上，放顯微鏡下檢54.3.4注意事項始終穿戴潔凈的實驗服和乳膠或塑料手套及口罩。在檢查完成后，用消毒液或肥皂徹底洗手，在實4.4消化道排泄物檢查后處理依據(jù)下列蟲卵或蟲體特征，判定蠕蟲蟲卵為吸蟲、絳蟲、線蟲或棘頭5.2絳蟲5.2.1絳蟲卵5.3線蟲5.3.1線蟲卵65.4棘頭蟲棘頭蟲蟲體一般呈橢圓、紡錘或圓柱形等不同形態(tài)。大小為1～65cm，多數(shù)在25cm左右。蟲體分刺，有假分節(jié)現(xiàn)象。體表常由于吸收宿主的營養(yǎng)，特別是脂類物質(zhì)而呈現(xiàn)紅、橙、褐、黃或乳白色。7每小格的絕對長度為0.01mm（10μm）。使用時將鏡臺測微尺放在顯微鏡載物臺上，調(diào)整固定好測量時8蠕蟲蟲體的保存和運輸采集的線蟲應(yīng)在水中簡單清洗以去除附著物，然后將其放入熱的70%酒精中。然后讓酒精冷卻，再存在5%甘油或70%酒精或5%-10%福爾馬林的混合液中。吸蟲應(yīng)像絳蟲一樣保存。如果絳蟲和吸蟲后期進(jìn)行染色，應(yīng)先在冰水和自來水中交替讓其“放松”大約3h，然后輕輕地壓在兩玻璃片之間浸入10%福爾9[1]孔繁瑤.家畜寄生蟲學(xué),第二版（修訂版）.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社:北京,2010.[2]HendrixCM,RobinsonE.Diagnosticparasitologyforveterinarytechnicians,sixth.Elsevier:Missouri,2023.[3]BowmanDD.Georgis'