牛羊冷凍精液重要垂直傳播人畜共患病原的檢測技術(shù)_第1頁
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1牛羊冷凍精液重要垂直傳播人畜共患病原的檢測技術(shù)本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了動物布魯氏菌病、結(jié)核病、Q熱、衣原體四種疫病診斷所用的常規(guī)分離鑒定及qPCR4縮略語BHQ1：無熒光猝滅基團(tuán)(Blackholequencher-1)Ct值：每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號達(dá)到設(shè)定的閾值所經(jīng)歷的循環(huán)FAM：6-羧基熒光素（6-carboxyfluorescein)PCR：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase25.3精液采樣器。5.4高速臺式冷凍離心機(jī)，可控溫至4℃,離心速度可達(dá)12000g以上。5.6渦旋震蕩儀。5.7無菌注射器或EP管。5.10恒溫水浴鍋：0℃~1005.12高壓滅菌鍋。6.1除另有規(guī)定，本方法試驗用水應(yīng)符合GB/T6682-2008規(guī)定的二級水，所用化學(xué)試劑均為分以種特異的基因組序列為模板；Q熱立克次體qPCR以IS1111為模板；流產(chǎn)衣原體以O(shè)mpA基因為3刺激其射精。也可按摩雄性動物的生殖器或用電刺激其發(fā)情中樞或性敏感區(qū)，使其射精。臨床癥狀和采樣時間、采樣人等信息。此外采樣、樣品處理及檢測過程所涉及的實驗操作應(yīng)遵守GB9.1精液前處理加1倍~2倍量的滅菌水，1000g離心20物涂片鏡檢、培養(yǎng)。安福民（antiformin）沉淀濃縮法具體操作參見附錄B9.2基因組DNA的提取在上述已完成前處的樣品（沉淀物）中加人509.3qPCR反應(yīng)體系和條件42μL,補(bǔ)充ddH2O至20μL9.4結(jié)果判定5酸二氫鈉（NaH2PO4·2H2O）31.2g，溶于蒸餾水中B液（0.2mol/LNa2HPO4溶液稱取十二水合磷酸氫二鈉（N酸氫二鈉（Na2HPO4·2H2O）35.6g，溶于蒸餾水稱取17g氯化鈉，用適量蒸餾水溶解，量取13mLA液和87mLB液，混合，用蒸餾水定容至6物加蒸餾水恢復(fù)

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