(高清版)GBT 40832-2021 芒果葉中芒果苷的測定 高效液相色譜法

芒果葉中芒果苷的測定高效液相色譜法2021-10-11發(fā)布2022-05-01實(shí)施I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由中國標(biāo)準(zhǔn)化研究院提出并歸口。本文件起草單位：中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院分析測試中心、深圳市品牌建設(shè)促進(jìn)中心、重慶兩江創(chuàng)享醫(yī)藥檢驗(yàn)認(rèn)證科技有限公司、中國標(biāo)準(zhǔn)化研究院、食藥環(huán)檢驗(yàn)研究院(山東)集團(tuán)有限公司、中山內(nèi)得農(nóng)業(yè)科技有限公司、大連依利特分析儀器有限公司、華測檢測認(rèn)證集團(tuán)股份有限公司、江蘇康華信息科技有限公司、中關(guān)村國際醫(yī)藥檢驗(yàn)認(rèn)證科技有限公司。1芒果葉中芒果苷的測定高效液相色譜法本文件描述了芒果葉中芒果苷含量的高效液相色譜法測定方法。本文件適用于芒果葉中芒果苷含量的測定。對含有芒果苷產(chǎn)品的含量檢測可參照使用。本文件檢出限為0.75mg/g,定量限為2.50mg/g。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。樣品中加入70%甲醇溶液，經(jīng)超聲輔助提取，高效液相色譜法分離及在258nm下測定，根據(jù)保留時間定性，外標(biāo)法定量。5試劑與材料除另有規(guī)定外，所用試劑均為分析純，水應(yīng)符合GB/T6682中一級水的要求。5.1試劑5.2溶液配制5.2.170%(體積分?jǐn)?shù))甲醇溶液：量取700mL甲醇，加300mL超純水，混勻。5.2.2流動相A:0.1%甲酸溶液，1L超純水中加入1mL甲酸，充分混勻。5.3標(biāo)準(zhǔn)品芒果苷(C?HO?,CAS號：4773-96-0):純度≥98%25.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配置5.4.1芒果苷標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液(200μg/mL):稱取10mg(精確至0.0001g)芒果苷，置于50mL容量瓶中，加甲醇超聲溶解并定容至刻度線，配制成200μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，-18℃冰箱避光保存，有效期3個月。5.4.2芒果苷中間濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確移取0.5mL芒果苷標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液于10mL容量瓶中，用甲醇稀釋至定容刻度線，搖勻，得到芒果苷中間濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液(質(zhì)量濃度10μg/mL)。5.4.3芒果苷系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別準(zhǔn)確移取0.1mL、0.2mL、0.5mL、1mL、2mL芒果苷中間濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液于不同的10mL容量瓶中，用70%甲醇溶液稀釋、定容，搖勻，得到芒果苷系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(質(zhì)量濃度分別為0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL)。5.5材料5.5.5聚四氟乙烯(PTFE)微孔濾膜(孔徑0.22μm,直徑13mm)或者相當(dāng)者。6儀器和設(shè)備6.1高效液相色譜儀：配紫外(UV)檢測器或二極管陣列檢測器(DAD或PDA)。6.2電子天平：感量0.0001g和0.01g。6.3超聲波振蕩儀：功率不低于250W,或相當(dāng)?shù)脑O(shè)備。6.4組織搗碎機(jī)。6.5高速組織勻漿機(jī)。7試樣制備與保存新鮮芒果葉片充分打碎、混勻，置于潔凈容器中，密封并做好標(biāo)記，于一18℃冰箱避光保存。8測定步驟芒果葉試樣解凍，稱取1g(精確至0.01g),置于100mL離心管中，加入提取溶劑70%甲醇溶液60mL,18000r/min高速勻漿1min,將樣品轉(zhuǎn)移到250mL具塞磨口三角瓶中，另取60mL提取溶劑洗滌離心管和刀頭，并將溶劑轉(zhuǎn)移至三角瓶中。將三角瓶瓶塞蓋上，室溫下超聲提取30min,取出，靜置，使分層。將上清液轉(zhuǎn)入250mL容量瓶中。三角瓶中再加入70%甲醇溶液100mL,超聲30min,對樣品進(jìn)行二次提取，提取液合并至250mL容量瓶，用70%甲醇溶液定容，搖勻，得到芒果葉樣品提取液。吸取樣品提取液1.0mL,放入100mL容量瓶中，用70%甲醇溶液定容，搖勻。取適量體積樣品溶GB/T40832—20218.2測定8.2.1高效液相色譜參考條件高效液相色譜參考條件如下：b)流動相：乙腈：甲酸水溶液(0.1%)=15:85(體積比);8.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制分別取適量的芒果苷系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(0.1μg/mL～2.0μg/mL),按照8.2.1列出的條件進(jìn)行液相色譜分析測定。以標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。芒果苷標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖參見附錄A中的圖A.1。將試樣溶液按照8.2.1列出的條件進(jìn)行液相色譜分析測定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留時間定性。試樣溶液中芒果苷的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，超過線性范圍則應(yīng)稀釋后再進(jìn)行分析，外標(biāo)法定量。9結(jié)果計算9.1結(jié)果計算試樣中目標(biāo)物的含量按式(1)計算： (1)X——試樣中芒果苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，單位為毫克每克(mg/g)p——樣品溶液中芒果苷的質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);V——樣品溶液定容體積，單位為毫升(mL);n——稀釋倍數(shù)；m——試樣質(zhì)量，單位為克(g);1000——換算系數(shù)。9.2結(jié)果表示測定結(jié)果以