生物制藥實驗

生物制藥實驗任課教師：糾敏單位：食品與生物工程學院生物工程系4-317Email：jiumin0912@手機驗一胰島素的制備

100Kg胰腺只能提取4-5g的胰島素2000L培養(yǎng)液產生100g胰島素內容實驗目的

實驗所用試劑實驗儀器工藝路線實驗步驟作業(yè)一、實驗目的

本實驗的目的是熟悉并掌握以豬胰臟為原料制備胰島素的工藝過程。二、實驗所用試劑

5％草酸溶液；87％乙醇溶液；冷丙酮；氨水；20％、6.5％的醋酸鋅溶液2％、10％的檸檬酸溶液；硫酸；NaCl三、實驗儀器

離心機、旋轉蒸發(fā)儀、電子天平、組織搗碎機、pH計、燒杯、錐形瓶、玻棒、量筒等。四、工藝路線五、實驗步驟提取：豬胰臟絞碎，再加2.3-2.6倍的86%-88%乙醇和5%的草酸，提取3小時。堿化：提取液用氨水調pH至8.0-8.4。酸化：在5℃下，將堿化液用硫酸調pH至3.6-3.8。濃縮：將上述提取液過濾取上清液，在30℃減壓濃縮至比重為1.04-1.06為止。去脂：將濃縮液快速加熱再快速降溫，過濾得去脂液。五、實驗步驟鹽析：向去脂溶液中加入氯化鈉調pH至2-2.5，過濾得鹽析物。除酸性蛋白：鹽析物中加入7倍量的蒸餾水溶解，再加3倍量冷丙酮，用氨水調pH4.2-4.3，補加丙酮，使水和丙酮的比例為7：3，攪拌后過夜，離心去除酸性蛋白沉淀。鋅沉淀：濾液用氨水調pH6.2-6.4，加入3.6%醋酸鋅溶液（20%濃度），再用氨水調pH6.0，4℃放置過夜，收集沉淀，冷丙酮洗滌、干燥。五、實驗步驟除堿性蛋白、結晶：按干品重量計每克加冰冷的2%檸檬酸溶液50毫升、6.5%的醋酸鋅溶液2毫升、丙酮16毫升，用冷水稀釋至100毫升，使充分溶解，冷至5℃以下，用氨水調pH8.0，過濾，濾液用10%檸檬酸溶液調pH6.0，補加丙酮，使溶液含丙酮達16%，慢速攪拌3到5小時，使結晶析出，再轉入5℃左右放置3到4天，使結晶完全，收集結晶。洗滌、干燥：用水洗滌結晶，再用丙酮、乙醚將結晶脫水，真空干燥后得到成品。六、作業(yè)實驗過程中有哪些關鍵步驟需要小心操作？觀測所得產品的質與量（收率）。實驗二

甲殼質的制備

內容實驗目的

實驗所用試劑實驗儀器工藝路線實驗步驟作業(yè)一、實驗目的甲殼質（Chitin），又稱甲殼素、幾丁質、殼多糖等。其在自然界中分布極廣，以甲殼類、昆蟲類含量較高。近年來，甲殼質的應用越來越廣泛，大量用于工業(yè)、農業(yè)、醫(yī)學、環(huán)保、生物工程等領域。其在醫(yī)療上的主要用途：可作為緩釋藥物的載體、人工透析膜、止血劑、手術縫合線等。其衍生物具有促進傷口愈合、抗血栓等功能。目前，用于制備甲殼質的原料多為蝦、蟹殼，另外還有一些真菌（黑曲霉、猴頭菇、平菇），新疆的鹵蟲卵殼；更經濟的來源可能是利用霉菌發(fā)酵的殘留物。本實驗的目的是熟悉并掌握以蟹殼為原料制備甲殼質的工藝方法。二、實驗所用試劑

5％HCl的鹽酸溶液

3％NaOH溶液

0.5‰KMnO4溶液

1％HNO3溶液三、實驗儀器

粉碎機、電爐、水浴鍋、恒溫箱、1000ml燒杯（耐酸、耐堿、耐腐蝕的器皿）、玻棒、500ml量筒、天平。四、工藝路線五、實驗步驟材料的準備將蟹殼洗凈、烘干，并研磨至d<2mm的粉末狀浸泡，除鈣質稱取干凈的蟹殼25g，放置于1000ml的燒杯中，將375ml的5%的鹽酸溶液緩緩地加入到燒杯中，并不斷地攪拌，后室溫（20℃）浸泡24h，以充分除去蟹殼中的鈣質。后去上清，水洗沉淀3次至中性；五、實驗步驟去蛋白加3％的NaOH溶液375ml于上述沉淀中，煮沸4～6h或室溫放置10h，并不斷攪拌，以除去蛋白質。后去上清，并水洗沉淀3次，以除去殘留的堿及蛋白質；

氧化脫色用0.5‰的KMnO4溶液10ml，攪拌浸泡沉淀1h，再用1％的HNO3溶液10ml于60～70℃水浴30～40min至脫色；去上清，得白色產品，水洗，干燥即可。六、作業(yè)實驗過程中的注意事項有哪些？觀測所得產品的質（色澤）與量（收率）。實驗三人血漿白蛋白制劑的制備

內容實驗目的

實驗所用試劑實驗儀器工藝路線實驗步驟作業(yè)一、實驗目的

白蛋白（albumin）又稱為清蛋白，約占血漿總蛋白的65%。其主要功能為：結合并傳輸脂肪酸、各種色素、陽離子、維生素C、各種藥物（如抗生素、磺胺類等）。另外還是維持血漿膠體滲透壓的主要物質。血漿白蛋白在臨床上用于失血性休克以及腦水腫或大腦損傷所致的腦顱壓增高，嚴重燒傷，低蛋白血癥等的治療。本實驗的目的是了解并掌握以人血漿為原料制備人血漿白蛋白的工藝流程及方法。二、實驗所用試劑

人血漿；NaHCO3溶液；

2%的利凡諾溶液；0.5MHCl溶液；

NaCl溶液；滅菌水；pH試紙三、實驗儀器

冷凍干燥機、水浴鍋、錐形瓶、玻棒、量筒、電子天平，離心機。四、工藝路線五、實驗步驟絡合（利凡諾沉淀）：量取人血漿20ml，在攪拌下加入NaHCO3調節(jié)pH至8.6，加入等體積的2%的利凡諾溶液，充分攪拌后靜置2-4小時，分離上清液與絡和物沉淀。解離：向絡和物沉淀中加入無菌水，用0.5MHCl溶液調節(jié)pH至弱酸性，加氯化鈉至0.15%-0.2%，攪拌下進行解離。

加熱去雜蛋白：充分解離后，65℃恒溫1小時，離心分離出上清液。

五、實驗步驟熱處理：60℃，10小時，滅活病毒。除菌、干燥：將熱的處理液除菌過濾，收集濾液，即白蛋白溶液，將溶液進行冷凍干燥得到白色疏松物質。

檢驗方法：外觀為白色疏松物質，白蛋