酪氨酸酶的提取及其催化活性的研究

酪氨酸酶的提取及其催化活性的研究作者摘要關(guān)鍵詞實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼J(rèn)識(shí)生物體中酶的存在和催化作用，便于我們了解生物體系中酶存在下的合成或分解與普通的有機(jī)合成的不同和相同之處，認(rèn)識(shí)一些生物化學(xué)過(guò)程的特殊性。掌握生物活性物質(zhì)的提取和保存方法，學(xué)會(huì)使用儀器分析的手段研究催化反應(yīng)特別是生物化學(xué)體系中催化過(guò)程的基本思想和方法。實(shí)驗(yàn)原理許多復(fù)雜的有機(jī)物合成與分解反應(yīng)需要在高溫、高強(qiáng)酸堿或減壓等苛刻條件下才能進(jìn)行，而在生物體內(nèi)，即使在十分溫和的條件下，如常溫、常壓和近中性溶液中，許多復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng)卻能順利進(jìn)行，其根本原因就是由于生物酶的存在。生物酶是一種生物催化劑，按照它的組成，可分為兩類，一類是簡(jiǎn)單蛋白質(zhì)，其活性取決于它的結(jié)構(gòu)，如脲酶、淀粉酶等；第二類的結(jié)合蛋白質(zhì)酶，它需要加入某些非蛋白質(zhì)組分（稱為輔助因子）后，才能表現(xiàn)出酶的活性。酶蛋白質(zhì)與輔助因子結(jié)合形成的復(fù)合物稱為全酶。例如酪氨酸酶是以銅離子為輔助因子的全酶。通常反被酶作用的物質(zhì)稱為該酶的底物，一種酶催化特定的一個(gè)或一類底物的反應(yīng)，具有很高的選擇性和靈敏度，因而引起廣大分析工作者的重視和興趣。酶已作為一種分析試劑得到應(yīng)用。特別是有生化、醫(yī)學(xué)方面有很高的應(yīng)用價(jià)值。例如生命物質(zhì)和流體中的特殊有機(jī)成分，用其他方法測(cè)定有困難，用酶法分析卻有其獨(dú)到之處。本實(shí)驗(yàn)從土豆中提取酪氨酸酶，并測(cè)定其催化活性。當(dāng)土豆、蘋果、香焦等的受損面接觸空氣后會(huì)產(chǎn)生深棕色的現(xiàn)象是人們都見(jiàn)過(guò)的，這是這類物質(zhì)含有酪氨酸和酪氨酸酶，酶存在于物質(zhì)內(nèi)部，當(dāng)暴露在空氣中后，在氧氣的參與下，會(huì)發(fā)生一系列反應(yīng)。以下是主要的反應(yīng)過(guò)程。由于多巴轉(zhuǎn)變成多巴紅的反應(yīng)速率較快，再轉(zhuǎn)到下一步產(chǎn)物速率則慢得多，故可選擇多巴轉(zhuǎn)變?yōu)槎喟图t的反應(yīng)速率的測(cè)定來(lái)判斷催化反應(yīng)的活性。因多巴紅具有特殊的顏色，故可用分光光度法測(cè)定，在不同的時(shí)刻測(cè)定某特定波長(zhǎng)下的吸光度，用吸光度對(duì)時(shí)間作圖，從所得的直線斜率求酶的活性。其反應(yīng)過(guò)程如下圖所示酶的活性計(jì)算方法：一般定義在優(yōu)化的條件下（包括pH值、離子強(qiáng)度、溫度等），25℃時(shí)在1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1mol底物所需要催化劑的量為活性單位。通過(guò)下式可計(jì)算酶的活性：，式中，為所用溶液的酶的活性，為最大吸收波長(zhǎng)吸光度的變化，t為時(shí)間（min），k為多巴紅的摩爾吸收系數(shù)，V為加入酶的體積，進(jìn)而計(jì)算出原料（土豆）中酶的活性：。式中A為原料中酶的活性（注意此處A不是吸光度A），V0為原料所得的酶溶液的總體積，m為原料總質(zhì)量。三．實(shí)驗(yàn)儀器與試劑1、儀器：分光光度計(jì)、離心機(jī)、研缽、水浴、秒表2、試劑：二羥基苯丙胺酸（多巴）、磷酸二氫鈉、氫氧化鈉、鹽酸、土豆1、影響酶活性的因素有哪些？答：酶是一種活性蛋白質(zhì)。因此，一切對(duì)蛋白質(zhì)活性有影響的因素都影響酶的活性。酶與底物作用的活性，受溫度、pH值、酶液濃度、底物濃度、酶的激活劑或抑制劑等許多因素的影響。2、提取物在放置過(guò)程中為何會(huì)變黑？答：它們的組織中都含有酪氨酸和酪氨酸酶，酶存在于物質(zhì)內(nèi)部，當(dāng)內(nèi)部物質(zhì)暴露于空氣中，在氧的參與下將發(fā)生反應(yīng)，生成黑色素。3、熱處理后酶的活性為何會(huì)