內(nèi)毒素檢查的常見干擾及消除

細菌內(nèi)毒素檢查的常見干擾及消除湛江安度斯生物有限公司2009年3月BET干擾的普遍性一項對人用藥品與鱟試驗相容性的研究證實了干擾的影響范圍，在所研究的品種中僅30%的藥品可以不經(jīng)任何處理直接進行BET；有97%的干擾問題可以通過稀釋供試品的方法去消除。2024/7/2Page2Http://干擾的表現(xiàn)凝膠法FDA的鱟試驗指南中規(guī)定，同一標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素的陽性對照與陽性樣品對照系列的反應(yīng)終點存在顯著差異時，即可確定為存在干擾。CP2005規(guī)定無干擾條件：0.5λ≤Es≤2λ；0.5Es≤Et≤2Es

USP27規(guī)定無干擾條件：0.5λ≤Es≤2λ；0.5λ≤Et≤2λ光度法CP、USP規(guī)定無干擾條件：

50%≤

R≤200%FDA規(guī)定無干擾條件：50%≤R≤150%平行管數(shù)溶液C（Es）2λλ?λ?λ1＋＋－－2＋＋－－3＋＋－－4＋＋－－平行管數(shù)溶液B（Et）SE2λSEλSE?λSE?λ1＋＋－－2＋＋－－3＋＋－－4＋＋－－2024/7/2Page3Http://最理想的無干擾狀況表a平行管數(shù)溶液C（Es）2λλ?λ?λ1＋＋＋－2＋＋＋－3＋＋＋－4＋＋＋－平行管數(shù)溶液B（Et）SE2λSEλSE?λSE?λ1＋－－－2＋－－－3＋－－－4＋－－－平行管數(shù)溶液C（Es）2λλ?λ?λ1＋＋＋－2＋＋＋－3＋＋＋－4＋＋＋－平行管數(shù)溶液B（Et）SE2λSEλSE?λSE?λ1＋＋＋＋2＋＋＋－3＋＋＋－4＋＋＋－不符合CP要求，但符合USP要求符合CP要求，但不符合USP要求2024/7/2Page4Http://表b表c出現(xiàn)表b或表c的極端情況均為不適宜的實驗結(jié)果，需要檢查實驗條件。干擾的類型抑制供試品含有的內(nèi)毒素濃度≥2倍檢測試劑的靈敏度，但檢測結(jié)果仍為陰性，稱之為假陰性增強供試品含有的內(nèi)毒素濃度低于檢測試劑靈敏度的1/2，但檢測結(jié)果仍為陽性，稱之為假陽性2024/7/2Page5Http://抑制的來源由內(nèi)毒素激活的酶反應(yīng)受抑制pH值不適宜二價陽離子不足酶的改良及活性不足內(nèi)毒素損耗吸附損耗2024/7/2Page6Http://抑制的解決辦法鱟試驗的正常反應(yīng)需要中性的pH值、一定濃度的鈉離子及二價陽離子；用BET水稀釋供試品可以解決絕大多數(shù)的抑制pH值鱟試驗的反應(yīng)混合液（TAL+供試品）的pH值應(yīng)在6~8范圍內(nèi)用BET水在容許范圍對供試品進行稀釋用緩沖液制備樣品稀釋液用酸、堿或緩沖液來調(diào)節(jié)pH2024/7/2Page7Http://二價陽離子在含有鰲合劑的樣品制備中使用MgSO4或CaCl2緩沖劑可維持Ca++、Mg++離子的濃度蛋白和酶的改良血漿和血清中的絲氨酸蛋白酶可經(jīng)加熱處理使其變性；

某些蛋白的變性或酶的抑制原料需要用超濾方法去除內(nèi)毒素損耗在標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素制備及使用過程，需要經(jīng)常旋渦混合其溶液避免使用對標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素有吸附作用的實驗器具2024/7/2Page8Http://增強的來源和解決方法來源β-葡聚糖是造成鱟試劑結(jié)果假陽性的一個已知來源。

美國藥典BET法的要求：

“除了內(nèi)毒素，鱟試劑還與某些β-葡聚糖反應(yīng)。一些經(jīng)特殊制備的鱟試劑不會與β-葡聚糖反應(yīng)，應(yīng)使用這種鱟試劑檢測含β葡聚糖的樣品”解決方法湛江安度斯公司的TAL可以抵抗一般水平的β-葡聚糖干擾。用湛江安度斯公司的抗增液復(fù)溶鱟試劑可以消除（1-3）β-D葡聚糖的干擾。2024/7/2Http://Page9E0.03E0.3E3.0NC每個濃度的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素溶液分別與抗增液復(fù)溶的鱟試劑及BET水復(fù)溶的鱟試劑反應(yīng)2024/7/2Page10Http://0.1Mg/ml葡聚糖（抗增液）0.1Mg/ml葡聚糖0.1Mg/ml葡聚糖+E0.3（抗增液）0.1Mg/ml葡聚