動物細胞融合和單克隆抗體(1)(部編)課件

專題2細胞工程2.2.2動物細胞融合和單克隆抗體學習目標:1.了解動物細胞融合的原理、過程和意義2.舉例說出單克隆抗體制備的原理和應(yīng)用重點：單克隆抗體的制備過程難點：單克隆抗體的制備過程2002年12月30日，

兩場籌備了10年的“太空婚禮”首次在神舟四號飛船上舉行，植物細胞“新人”—黃花煙草和革新一號煙草葉肉細胞原生質(zhì)體，動物細胞“新人”是小鼠B淋巴細胞和骨髓瘤細胞，兩批新人同時在“產(chǎn)房”—電融合儀內(nèi)孕育新生命?！疤栈槎Y”這兩場“太空婚禮”實質(zhì)是哪兩項細胞工程技術(shù)？植物體細胞雜交技術(shù)動物細胞融合技術(shù)實例1：自然條件受精作用一.動物細胞融合1970年人工條件下的人-鼠細胞融合實驗實例2：人工誘導１、動物細胞融合過程（P52資料卡）思考：為什么細胞融合過程中使用的病毒需要滅活？不滅活行嗎？3、原理：1、動物細胞融合的基本原理是什么？2、動物細胞融合的誘導方式是什么？與植物細胞融合的誘導方式有什么不同？與植物原生質(zhì)體融合的基本原理相同，即細胞膜的流動性。4、誘導方式：物理法：電激、振動、離心化學法：聚乙二醇（PEG）生物法：滅活的病毒例如：仙臺病毒2、概念：指兩個或多個動物細胞結(jié)合形成一個細胞的過程。5、過程：動物細胞A動物細胞B誘導，融合2個完整的雜交細胞AB有絲分裂（膜融合、細胞融合的實質(zhì)質(zhì)融合、核融合）單核細胞篩選滅活的病毒顆粒黏附于細胞表面細胞膜被病毒顆粒穿通細胞膜連接細胞融合，形成雜交細胞（細胞膜具有一定的流動性）注意：動物細胞的融合也需要把多個兩種細胞放在一起，讓它們隨機融合后，再從中篩選雜交細胞6、意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交（種間、屬間、科間、動植物之間）成為可能。7、應(yīng)用：成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段鼠—雞、鼠—兔、鼠—猴、人—鼠、人—兔、人—雞、人—蛙、酵母菌—雞、人—胡蘿卜等重要用途：制備單克隆抗體。問題討論１、植物體細胞雜交最終得到的是完整的植物個體，動物細胞融合后能形成雜種動物個體嗎？

不能，只能得到雜交細胞2、動物細胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理是否相同？相同，都是細胞膜的流動性3、為什么要用滅活的病毒？病毒一般對生物體是有傷害的。仙臺病毒喪失感染活性保留融合活性物理或化學方法主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株用途物理、化學方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振動、電刺激）化學（聚乙二醇）誘導方法使細胞分散后誘導細胞融合去除細胞壁后誘導原生質(zhì)體融合細胞融合的方法細胞膜的流動性細胞膜的流動性、植物細胞全能性原理動物細胞融合植物體細胞雜交比較項目植物、動物細胞融合的比較1.概念：2.結(jié)果：雜交細胞3.原理：細胞膜的流動性5.意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交（種間、屬間、科間、動植物之間）成為可能。成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。特別是利用雜交瘤技術(shù)制造單克隆抗體6.應(yīng)用：4.誘導方法：物理法;化學法和生物法活動1：請同學們快速閱讀課本P52總結(jié)

動物細胞融合也稱________。是指_________動物細胞結(jié)合成一個細胞的過程。形成的具有原來兩個或多個細胞遺傳信息的

____細胞，稱為________。兩個多個或單核細胞雜交

8、動物細胞的篩選方式：1）利用抗藥性篩選系統(tǒng)：利用生物細胞對藥物敏感性差異篩選雜種細胞。親本A：對氨芐青霉素敏感，對卡娜霉素不敏感親本B：對卡娜霉素敏感，對氨芐青霉素不敏感雜種細胞可以在含有兩種抗生素的培養(yǎng)基上生長2）營養(yǎng)互補篩選系統(tǒng)：細胞在缺乏一種或幾種營養(yǎng)成分時，不能生長繁殖，即營養(yǎng)缺陷型細胞。利用兩種親本細胞營養(yǎng)互補作用原理可以篩選雜種細胞。親本A：色氨酸缺陷型親本B：蘇氨酸缺陷型雜種細胞可以在不含色氨酸和蘇氨酸的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，而親本細胞均會死亡。3）溫度敏感突變型雜種細胞的篩選：一般的培養(yǎng)細胞能在32度到40度的范圍內(nèi)生長，但溫度敏感突變型的細胞能在高溫或低溫下生長。由此篩選雜種細胞。親本一：具有卡那霉素抗性但只能在37度左右生長。親本二：高溫敏感突變型，但不能抗卡娜霉素。雜種細胞能在高溫和含卡娜霉素的培養(yǎng)基上生長。二、單克隆抗體的制備1.圖中是哪種免疫類型是？２.抗體由何種細胞產(chǎn)生？３.抗體主要分布在哪里？４.傳統(tǒng)的抗體的生產(chǎn)方法及缺陷是什么？溫故知新漿細胞主要在血清體液免疫

反復注射漿細胞

抗原

動物體內(nèi)抗體產(chǎn)量低、純度低,特異性差,反應(yīng)不夠靈敏活動２:閱讀P５３找一找：科學家發(fā)現(xiàn)B淋巴細胞有什么特點？并討論：怎樣才能獲得大量的單一抗體？體外培養(yǎng)時，一個B淋巴細胞不能無限增殖問題１：我們所學的哪種細胞是可以無限增殖的問題２：有什么方法能使B細胞產(chǎn)生抗體的能力和無限增殖能力同時具備科學家發(fā)現(xiàn)：１.體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類多達百萬種以上２.每個B細胞只分泌一種特異性的抗體單克隆抗體克隆一個B淋巴細胞

細胞群抗體遺憾：癌細胞動物細胞融合一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細胞（癌細胞）能無限增殖雜交細胞動物細胞培養(yǎng)１.實驗設(shè)想：動物細胞融合單克隆抗體既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生專一抗體1975年，米爾斯坦和柯勒1984年，諾貝爾生理學或醫(yī)學獎雜交瘤細胞考考你！1.在制備單克隆抗體的過程中，選用哪兩種細胞進行融合？為什么選擇這兩種細胞？漿細胞和骨髓瘤細胞漿細胞能產(chǎn)生單一抗體，但不能無限增殖；骨髓瘤細胞能無限增殖，但不能產(chǎn)生單一抗體。（經(jīng)過免疫的）B淋巴細胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤細胞培養(yǎng)骨髓瘤細胞融合多種雜交細胞在具有篩選作用的培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體檢驗陽性克隆上述雜交細胞分開不同雜交細胞，克隆專一抗體，檢驗陽性細胞單克隆抗體注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)2、單克隆抗體的制備過程:第2次篩選目的：在雜交瘤細胞中篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞。特異性強，靈敏度高瘤-瘤細胞B-瘤細胞B-B細胞動物細胞融合第1次篩選目的：得到雜交瘤細胞（多種）。動物細胞培養(yǎng)雜交細胞滅活的病毒等手段小鼠骨髓瘤細胞B淋巴細胞經(jīng)免疫的小鼠提取雜交瘤細胞第一次篩選用特定的選擇性培養(yǎng)基第二次篩選能產(chǎn)生特定抗體、培養(yǎng)條件下能無限增殖的雜交瘤細胞體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔提取單克隆抗體單克隆抗體制備過程單克隆抗體的制備

看書上53頁圖，分組討論，單抗制備過程分哪幾步？請用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來。順序是？

檢特別提醒：1.1.雜交瘤細胞的特點①B淋巴細胞的特點:有產(chǎn)生單一抗體的能力，但不能大量增殖②骨髓瘤細胞的特點：能在體外大量增殖，但不能產(chǎn)生抗體③雜交瘤細胞的特點：既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生專一抗體。2.篩選的目的：第1次篩選目的：得到雜交瘤細胞（多種）第2次篩選目的：在雜交瘤細胞中篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞。3.技術(shù)手段：動物細胞融合、動物細胞培養(yǎng)4.培養(yǎng)雜交瘤細胞的方式：體外培養(yǎng)；注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖5.單克隆抗體的特點：特異性強，靈敏度高，可大量制備。學科網(wǎng)已成功的動物細胞融合實例有很多，如鼠—雞、鼠—兔、鼠—猴、人—鼠、人—兔、人—雞、人—蛙等上百種融合細胞。甚至已成功完成了酵母菌—雞、人—胡蘿卜等細胞的融合。想了解更多信息，可通過網(wǎng)絡(luò)、電視、雜志等途徑關(guān)注動物細胞融合和單克隆抗體的最新信息。生物種間雜交想像圖第一步：從一只小鼠體內(nèi)提取T淋巴細胞，然后與骨髓瘤細胞誘導融合。第二步：再用普通培養(yǎng)基進行篩選，在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死去。第三步：對上述經(jīng)選擇性培養(yǎng)的雜交瘤細胞直接在體外條件下做大規(guī)模培養(yǎng)，這樣從細胞培養(yǎng)液中就可以提出破傷風桿菌單克隆抗體。已注入過滅活破傷風桿菌的小鼠B淋巴細胞選擇培養(yǎng)基必須經(jīng)過克隆化培養(yǎng)和專一抗體檢驗陽性1.下面是某同學根據(jù)單克隆抗體技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風桿菌抗體的實驗方案。指出不足之處。小結(jié)三、檢驗[變式練習]２.如圖為細胞融合的簡略過程，請據(jù)圖回答：⑴若A、B是植物細胞，在細胞融合之前用

處理，除去了

；A、B到細胞C的過程中，常用的化學方法是用

誘導．

⑵若A、B是植物細胞，則形成的D細胞還要應(yīng)用

技術(shù)把D培養(yǎng)成植株。⑶若A、B是動物細胞，一般用

，使其分散開來，A、B到C的過程中，常用的不同于植物細胞的誘導因素是

，所形成的D稱為

。⑷若該過程是制備單克隆抗體，A為B淋巴細胞，在獲得此細胞之前，小鼠已被注射了

。在A、B到C的過程中，所形成的C有

種，用來培養(yǎng)的D細胞應(yīng)該是

。纖維素酶和果膠酶細胞壁聚乙二醇植物組織培養(yǎng)胰蛋白酶或膠原蛋白酶滅活的病毒雜交細胞特定抗原３雜交瘤細胞小結(jié)B體外培養(yǎng)骨髓瘤細胞雜交瘤細胞足夠數(shù)量的細胞群注射到小鼠腹腔AC

[自我評論]

3、下圖為某同學根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的實驗方案。2、該方案能達到預期效果嗎？為什么？3、圖中B為________

過程，特有的誘導方法_________。該細胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。1、該實驗方案的目的是

４、C過程指細胞培養(yǎng)此細胞的分裂方式

_______。制備單克隆抗體動物細胞融合滅活的病毒雙親細胞產(chǎn)生專一抗體迅速大量增殖不能沒有將抗原注小鼠體內(nèi),無法獲得產(chǎn)生單一抗體的B淋巴細胞有絲分裂小結(jié)四、單克隆抗體的應(yīng)用１.作為診斷試劑：有準確，高效，快速的優(yōu)點２.可用于治療疾?。?可用于運載藥物（作為運載對應(yīng)疾病的藥物的“生物導彈“。）“生物導彈”＝單克隆抗體＋藥物單抗導向藥物為彈頭結(jié)合同位素的單抗-----生物導彈單抗放射性同位素課堂小結(jié)動物細胞融合動物細胞A動物細胞B動物細胞_____________法誘導培養(yǎng)物理化學生物雜交細胞（單核）膜融合質(zhì)融合單克隆抗體篩選二雜交細胞等雜交瘤細胞體外或體內(nèi)培養(yǎng)篩選一骨髓瘤細胞

誘導融合分泌特異抗體的雜交瘤細胞雜交瘤細胞群提取已免疫的B淋巴細胞動物細胞融合技術(shù)動物細胞培養(yǎng)技術(shù)單克隆抗體的制備既能迅速大量繁殖又能產(chǎn)生專一抗體特異性強靈敏度高可大量制備課堂注射抗原1、(2006，廣雅中學考題)研究單克隆抗體治療癌癥的思路是（）A．利用單克隆抗體特異性地對抗癌細胞B．以單克隆抗體作抗癌藥物殺死癌細胞C．抗癌物質(zhì)在克隆細胞中大量合成D．單克隆抗體攜帶抗癌藥物特異性地與癌細胞結(jié)合2.根據(jù)下圖，回答相關(guān)問題(1)若A細胞是小鼠骨髓瘤細胞，則B細胞是取自小鼠體內(nèi)的

細胞，從小鼠體內(nèi)提取分離該細胞之前，應(yīng)給小鼠注射_____________類物質(zhì)。（2）d過程是一個_____________過程，該過程的進行常用_____________或_____________的誘導。(3)假設(shè)僅考慮某兩個細胞的融合，則可形成

種類型的C細胞，因此需用__________培養(yǎng)基篩選出D細胞用于培養(yǎng)，D細胞的名稱是

，其特點是_________________________________________。漿

抗原

動物細胞融合

聚乙二醇滅活的病毒

選擇3既能迅速大量增殖又能產(chǎn)生專一抗體

雜交瘤細胞(4)在培養(yǎng)時通過________分裂方式大量繁殖。D細胞體外培養(yǎng)需要注意的條件是（要求答5項）__________________________________。（5）單克隆抗體在疾病的診斷、治療和預防方面，與常規(guī)抗體相比，其特點是_________________。特異性強、靈敏度高

有絲無菌、無毒的環(huán)境；充足的營養(yǎng)；適宜的溫度和pH；適宜的氣體環(huán)境

3、下圖是單克隆抗體制備流程階段示意圖。（1）_______________技術(shù)是單克隆抗體技術(shù)的基礎(chǔ)。（2）根據(jù)培養(yǎng)基的用途分類，圖中HAT培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。（3）單克隆抗體與常規(guī)的血清抗體相比，最大的優(yōu)越性是________________。（4）動物細胞融合除了采用植物細胞原生質(zhì)體融合常用的誘導劑外，還可以采用________________。（5）選出的雜交瘤細胞既具備骨髓瘤細胞的_______________特點，又具備淋巴細胞的_______________特點。（6）淋巴細胞是由動物體_________中的______________細胞分化、發(fā)育而來。動物細胞培養(yǎng)選擇特異性強,靈敏度高滅活的病毒迅速大量增殖分泌專一抗體骨髓造血干細胞4、科學家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得到雜交細胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細胞融合的是（）A、經(jīng)過免疫的B淋巴細胞B、不經(jīng)過免疫的T淋巴細胞C、經(jīng)過免疫的T淋巴細胞D、不經(jīng)過免疫的B淋巴細胞5．只能使動物細胞融合的常用誘導方法（）A．PEGB．滅活的病毒C．電刺激D．離心6、“生物導彈”是指（）A.單克隆抗體B.雜交瘤細胞C.產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細胞D.在單抗上連接抗癌藥物7.已知細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋巴細胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤細胞中盡管沒有S途徑，但能不斷分裂增殖，將這兩種細胞在試管中混合，加聚乙二醇促融，獲得雜種細胞。請回答：（1）試管中除融合的雜種細胞外，還有

種融合細胞。（2）設(shè)計一方法（不考慮機械方法），從培養(yǎng)液中分離出雜種細胞，并說原理。方法：

。原理：培養(yǎng)液中加入氨基嘌呤，收集增殖的細胞加入氨基嘌呤后,使D合成的途徑阻斷,所以僅D合成途徑的骨髓瘤細胞或彼此融合的細胞就不能增殖,但雜種細胞則可以利用淋巴細胞中的S途徑合成DNA而增殖項目植物體細胞雜交動物細胞融合原理融合前處理用_____________和__________去除細胞壁后誘導原生質(zhì)體融合用____________使細胞分散后誘導細胞融合誘導融合的方法

雜種植株（或雜交細胞）特點雜種植株含有兩種生物的遺傳物質(zhì)雜交細胞具有意義和用途克服

不親和的障礙，獲得雜種_________

突破_________________，使__________成為可能。獲得雜交細胞，用于_______歸納提升細胞膜的流動性植物細胞全能性細胞膜的流動性纖維素酶果膠酶胰蛋白酶或膠原蛋白酶物理法（離心，振動，電激）化學法：PEG物理法（離心，振動，電激）化學法：PEG還有生物法：滅活的病毒遠緣雜交兩個或多個細胞的遺傳物質(zhì)遠緣雜交單克隆抗體制備植株有性雜交局限25.無性繁殖和有性繁殖的主要區(qū)別是什么？26.動物細胞融合的基本原理是什么？

27.什么是病毒的滅活？有性繁殖是通過產(chǎn)生有性生殖細胞——配子（包括精細胞、卵細胞），配子結(jié)合后生長成新的個體。無性繁殖是不經(jīng)生殖細胞結(jié)合的受精過程，由母體的一部分直接產(chǎn)生子代的繁殖方法。細胞膜的流動性滅活是指用物理或化學手段使病毒失去感染能力，但是并不破壞病毒的抗原結(jié)構(gòu)。28.滅活病毒誘導細胞融合的原理是什么？病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細胞互相凝聚，細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合。因為滅活的病毒能使細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合29.什么是抗體？抗體是機體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。30.抗體有什么應(yīng)用價值？（1）診斷疾?。喝鐚Π┌Y、乙肝等疾病的診斷（2）治療疾?。喝缰委煻旧咭?/p>

（3）物質(zhì)檢測：如目的基因表達的檢測31.怎樣獲得抗體？向動物體內(nèi)反復注射某種抗原，使動物產(chǎn)生抗體，從血清中分離出的抗體,稱為血清抗體。特點：多種抗體的混合物，純度差、特異性差、產(chǎn)量低。32.如何獲得單一種類抗體？

由于每一個B細胞只分泌一種特異性抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須克隆單一的B淋巴細胞，形成細胞群。利用動物細胞培養(yǎng)技術(shù)，培養(yǎng)單個B淋巴細胞，就可以克隆單一B淋巴細胞，獲得單一種類抗體。33.正常情況下，一個B淋巴細胞不能無限增殖形成細胞群，怎樣才能克隆出單一的B淋巴細胞？設(shè)法使一種能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細胞與能在體外大量增殖的骨髓瘤細胞進行融合，所得到的融合細胞既能大量增殖，又能產(chǎn)生足夠數(shù)量的特定抗體。34.怎樣才能獲得產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細胞？用某種抗原（多次）注射實驗動物，使其發(fā)生特異性免疫反應(yīng)，分化形成能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細胞34.從何處取得經(jīng)過免疫的B淋巴細胞？35.可以采用什么方法誘導動物細胞融合？36.把B淋巴細胞和骨髓瘤細胞放在一起融合時，有幾種融合方式？離心、振動、電激；聚乙二醇；滅活的病毒

從免疫動物的脾臟獲取。B-B融合細胞雜交瘤細胞瘤-瘤融合細胞資料：細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。淋巴細胞有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。骨髓瘤細胞中只有D途徑而沒有S途徑，但能不斷分裂增殖。在培養(yǎng)液中加入氨基嘌呤，收集增殖的細胞，就是雜交瘤細胞。這種培養(yǎng)基被稱為“HAT”選擇培養(yǎng)基。37.如何篩選雜交瘤細胞？38.雜交瘤細胞有什么特點？既能大量繁殖，又能產(chǎn)生專一抗體。39.篩選出的雜交瘤細胞產(chǎn)生的是同一種抗體嗎？否，由于與骨髓瘤細胞融合的B淋巴細胞有許多種，因此從這些種雜交瘤細胞中提取抗體的仍然是多種抗體的混合物。

抗原

抗原針對同種抗原的多種抗體40.怎樣從眾多雜交瘤細胞中篩選到能產(chǎn)生我們需要的產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞？通常采用有限稀釋克隆細胞的方法獲得單細胞克隆，再利用抗原抗體雜交法檢測，篩選出分泌產(chǎn)生所需特異抗體的雜交細胞株，然后進行擴大培養(yǎng)。41.如何得到大量的單一抗體？42.如何培養(yǎng)雜交瘤細胞？培養(yǎng)特異的雜交瘤細胞，從中提取出單一抗體，即單克隆抗體。體外培養(yǎng)或體內(nèi)培養(yǎng)43.單克隆抗體的概念由單個雜交瘤細胞進行無性繁殖,也就是通過克隆，形成細胞群，這一細胞群所產(chǎn)生的化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體稱為單克隆抗體。44.單抗隆抗體的特點①特異性強、靈敏度高②可以大量制備45.單抗隆抗體有何應(yīng)用價值？①作為診斷試劑具有準確、高效、簡易、快速的優(yōu)點，可定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病。

。②定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病③用于治療疾病和運載藥物

制成生物導彈，將藥物定向帶到癌細胞所在的位置，在原位殺死癌細胞，療效高、副作用小。46.動物細胞融合與植物體細胞雜交過程有何不同47.誘導動物細胞融合與植物原生質(zhì)體融合的原理和方法是否基本相同?植物體細胞融合前需去掉細胞壁，然后再融合；動物細胞融合是兩個體細胞直接融合。誘導動物細胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理相同——細胞膜的流動性，方法也基本類似，不同的是除物理法、化學法外，還用到生物方法，即滅活的病毒。例：1975年Kohler和Milstein的單克隆抗體技術(shù)在生產(chǎn)和使用抗體方面開創(chuàng)了新紀元，圖10示單克隆抗體制備流程階段示意圖。請據(jù)圖回答下列問題：（1）該技術(shù)是在動物細胞培養(yǎng)技術(shù)和

技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。（2）圖10中細胞A體外培養(yǎng)不具有分裂能力，但能分泌

，細胞B體外培養(yǎng)能夠

。（3）動物細胞融合常用的方法是

。圖10動物細胞融合分泌特異性抗體無限增殖PEG（滅活的病毒、電激）圖10（4）細胞融合是隨機的過程，在HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)，要篩選出

細胞。在細胞培養(yǎng)過程中，為了促進細胞攝取葡萄糖，常向培養(yǎng)液中加入

(激素)（5）培養(yǎng)2周后，即測定培養(yǎng)細胞的特征，篩選出

細胞置于不同孔內(nèi)（如圖所示）培養(yǎng)。此操作前要將培養(yǎng)細胞稀釋到7～10個細胞/ml，每孔滴入0.1ml細胞稀釋液，其目的是

。（6）要獲得大量的單克隆抗體，可對獲得的雜交瘤細胞進行

培養(yǎng)。保證每個孔內(nèi)不多于一個細胞，達到單克隆培養(yǎng)的目的（單一細胞培養(yǎng)以保證抗體的純度）體外或體內(nèi)雜交瘤胰島素特異性分泌抗X蛋白抗體的1.人類在預防與診療傳染性疾病過程中，經(jīng)常使用疫苗和抗體。已知某傳染性疾病的病原體為RNA病毒，該病毒表面的A蛋白為主要抗原，且疾苗生產(chǎn)和抗體制備的流程之一如下圖：提取③②病毒RNADNAA基因A基因表達載體受體細胞A蛋白小鼠皮下小鼠骨髓瘤細胞效應(yīng)B淋巴細胞X抗A蛋白的單克隆抗體①請回答：（1）過程①代表的是

。（2）過程②構(gòu)建A基因表達載體時，必須使用

和

兩種工具酶。DNA連接酶逆轉(zhuǎn)錄限制性核酸內(nèi)切酶③②病毒RNADNAA基因A基因表達載體受體細胞A蛋白小鼠皮下小鼠骨髓瘤細胞效應(yīng)B淋巴細胞X抗A蛋白的單克隆抗體①（3）過程③采用的實驗技術(shù)是

，獲得的X是

。（4）對健康人進行該傳染病免疫預防時，可選用圖中基因工程生產(chǎn)的

所制備的疫苗。對該傳染病疑似患者確診時，可以疑似患者體內(nèi)分離病毒，與已知病毒進行_________比較；或用圖中的_______進行特異性結(jié)合檢測?？笰蛋白的單克隆抗體細胞融合雜交瘤細胞A蛋白核酸（基因）序列該RNA病毒表面的A蛋白為主要的抗原，故而可選用通過基因工程生產(chǎn)的A蛋白制備疫苗；確診時為判斷該病毒是否為題目中的RNA病毒，可以進行核酸序列的比對；也可以利用單克隆抗體具備特異性，利用抗A蛋白的特異性單克隆抗體通過能否特異性結(jié)合判斷病毒表面是否有A蛋白的存在進一步進行檢測是否為目的RNA病毒。⑴寫出ａ、ｂ所指的細胞工程各稱：ａ

ｂ

。⑵實施細胞工程ａ時，所需的受體細胞大多采用動物卵細胞的原因是：。⑶多莉面部的毛色是

，判斷依據(jù)是：。⑷繼植物組織培養(yǎng)之后，克隆綿羊培育成功