實驗三-食品中微生物菌落總數(shù)的測定

實驗三

食品中微生物菌落總數(shù)的測定一、實驗目的學習并掌握標準平皿活菌計數(shù)（SPC）的基本原理和方法明確菌落總數(shù)測定對被檢樣品進行衛(wèi)生學評價的意義二、實驗原理菌落總數(shù)：食品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下（如培基基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間等）培養(yǎng)后，所得每g（mL）檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)。標準平皿活菌計數(shù)法（SPC法）是最常用的活菌計數(shù)法將微生物細胞充分稀釋到單個分散，把這些單個分散的細胞通過混菌法或涂布法使其均勻分布在平皿培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后長出的菌落肉眼可見，每個菌落都由原液中單個細胞發(fā)育而來。反映食品被細菌污染的程度由于傾注平板法的局限，會有一部分細菌在該實驗條件下不生長，故計數(shù)結(jié)果要比實際值低。三、實驗器材（一）培養(yǎng)基平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（二）實驗材料市售飲料（三）其他

1、無菌培養(yǎng)皿7套

2、無菌吸管（1支10mL，5支1mL）

3、無菌生理鹽水（225mL三角瓶1個，9mL試管5支）（四）儀器

超凈工作臺四、實驗步驟1、樣品處理：以無菌操作，先用酒精棉球擦拭樣品表面后，用無菌剪刀將包裝剪破，量取檢樣25mL放入225mL滅菌生理鹽水當中，充分振蕩，混合均勻，制成10-1稀釋度樣品2、梯度稀釋法依次稀釋樣品到10-4菌落總數(shù)操作流程圖3、選擇10-2、10-3、10-4三個稀釋度的樣品均液，用無菌移液管分別吸取1mL到無菌平皿中，每個稀釋度做2個平皿；同時，吸取1mL無菌生理鹽水到1個平皿中作為空白對照4、熔化培養(yǎng)基5、及時將已冷卻到46℃的培養(yǎng)基傾入到平皿中，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻6、37℃倒置培養(yǎng)2天7、按照計數(shù)原則計數(shù)五、菌落計數(shù)方法有較大片狀菌落生長者不宜采用，若片狀小于平板一半時且余部均勻分布，則以半個平板菌落數(shù)2倍報告無明顯界限鏈狀菌落每條單鏈視為一個菌落選取菌落數(shù)在30~300cfu之間，無蔓延生長的平板計數(shù)低于30的記錄具體菌落數(shù)，大于300的可記錄為多不可計，每個稀釋度采用2個平行的均數(shù)1、計數(shù)結(jié)果的表述若只有一個稀釋度平板在30~300CFU，則計算兩平行平板的均數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)報告之若有連續(xù)兩個稀釋度符合計數(shù)要求則按下公式：例：10-2=232，24410-3=33，35菌落總數(shù)所有符合計數(shù)要求的平板菌落數(shù)之和較低稀釋度有效平板數(shù)較高稀釋度有效平板數(shù)較低稀釋度N=

(232+244+33+35)

(2+2×0.1)×10-2=24727結(jié)果表述10-1均數(shù)10-2均數(shù)描述最終結(jié)果25536均在30~300間則按計數(shù)公式2.6×103多不可計345各平板均>300，取稀釋度最高者報告，余計為多不可數(shù)3.5×104122均小于30則取稀釋度最低者報告1.2×10233029所有平板均不在30~300CFU且一部分<30或>300者以最接近30或300者報告2.9×10300所有平板均無菌落則記為<

1乘以最低稀釋倍數(shù)報告<1×10即<

102、報告方式菌落數(shù)在100cfu內(nèi)時按四舍五入修約，采用兩位有效數(shù)字報告大于或等于100時，第三位數(shù)四舍五入修約，取前兩位數(shù)字，例：205043210000or2.1×105所有平板均為蔓延菌落而無法計數(shù)者報告菌落蔓延若空白對照有菌落則此次檢測結(jié)果無效固體樣品以cfu/g，液體以cfu/mL為單位六、實驗結(jié)果與分析

樣品菌落總數(shù)N=cfu/mL

稀釋倍數(shù)10-2

10-3

10-4菌落數(shù)(CFU)