液相色譜儀使用中常見故障處理及工作原理

第第頁液相色譜儀使用中常見故障處理及工作原理

液相色譜儀，在分析儀表中具有、快速、靈敏等特點(diǎn)，應(yīng)用于生物化學(xué)、生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境化學(xué)、石油化工等部門。但是在使用過程中由于多方面因素的影響，會(huì)導(dǎo)致液相色譜儀顯現(xiàn)故障問題。液相色譜儀常見的故障問題緊要有如下幾種：

一、柱壓高

緩沖液鹽分如（乙酸銨等）沉積于柱內(nèi)或樣品污染沉積。處理對于*種情況先用40～50℃的純水，低速正向沖洗柱子，待柱壓漸漸下降后，相應(yīng)提高流速?zèng)_洗，柱壓大幅度下降后，用常溫純水沖洗，之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘；對于第二種情況，由樣品的沉積引起污染的C18柱，和純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著用甲醇+異丙醇（4+6）沖洗柱子（沖洗時(shí)間的長短由樣品污染的情況而定），再用換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，zui后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。

二、峰拖尾

色譜柱超載時(shí)，要削減進(jìn)樣量或稀釋樣品或使用高溶量的色譜柱；色譜柱性能不佳時(shí)，更換色譜柱；死體積或柱外體積過大時(shí)，將連接降至zui低，并對全部連接點(diǎn)作合理的調(diào)整，盡可能接受細(xì)內(nèi)徑的連接；加入硅羥基，其作用是純化色譜柱，加添緩沖液的濃度，降低流動(dòng)相的pH值，純化樣品；顯現(xiàn)峰干擾時(shí)，應(yīng)清潔樣品，調(diào)整流動(dòng)相。

三、壓力波動(dòng)大，流量不穩(wěn)定

原因系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物，使得兩者不能密封。處理工作中注意察看流動(dòng)相的量，保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底，避開吸入空氣，流動(dòng)相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物，拆下單向閥，放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。

四、基線產(chǎn)生不規(guī)定噪聲，

起因于系統(tǒng)不穩(wěn)定或沒達(dá)到化學(xué)平衡（使其平衡，若用離子對試劑，在使用使需要充分的時(shí)間和溶劑體積，色譜柱才能達(dá)到充分的平衡），流動(dòng)相被污染（更換流動(dòng)相，清洗儲液器、過濾器，沖洗并重新平衡系統(tǒng)），色譜柱被污染（為證明可能的原因更換系統(tǒng)的色譜柱或使用一根同類的被證明性能好的色譜柱），檢測器不穩(wěn)定。

五、短期有規(guī)定的噪聲，

可能起因于泵壓不穩(wěn)或泵脈沖，調(diào)整溶劑不適當(dāng)（如，兩種溶劑的互溶性問題），泵入口管路松或堵塞，泵太臟，泵柱塞磨損，檢測器不穩(wěn)定；液相色譜儀的原理結(jié)構(gòu)高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分構(gòu)成。儲液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱（固定相）內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的調(diào)配系數(shù)；在兩相中做相對運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附—解吸的調(diào)配過程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分別成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。液相色譜儀系統(tǒng)由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分構(gòu)成。儲液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱（固定相）內(nèi)；由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的調(diào)配系數(shù)，在兩相中作相對運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附—解吸的調(diào)配過程；各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分別成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀。高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動(dòng)相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分別熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。與試樣預(yù)處理技術(shù)相搭配，HPLC所達(dá)到的高辨別率和高靈敏度,使分別和同時(shí)測定性質(zhì)上特別相近的物質(zhì)成為可能,能夠分別多而雜相體中的微量成分。隨著固定相的進(jìn)展，有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分別HPLC成為解決生化分析問題zui有前途的方法。由于HPLC具有高辨別率、高靈敏度、速