原發(fā)性支氣管肺癌5 -1課件

二、動物細胞融合與單克隆抗體原發(fā)性支氣管肺癌5-1細胞融合是正常的生命活動兩個細胞正在融合

受精作用人工條件下，如何促成動物體細胞的融合？原發(fā)性支氣管肺癌5-1（一）動物細胞融合細胞融合誘導劑：滅活的病毒、（其它物理化學手段同植物體細胞雜交）

滅活的病毒有絲分裂應用：主要用于制備單克隆抗體原發(fā)性支氣管肺癌5-1滅活病毒誘導細胞融合的原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細胞互相凝聚，細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合。滅活是指用物理或化學手段使病毒或細菌失去感染能力，但并不破壞這些病原體的抗原結構。原發(fā)性支氣管肺癌5-1主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株主要用途物理、化學方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振動、電刺激）化學（聚乙二醇）誘導方法細胞膜的流動性細胞融合的原理動物細胞融合植物體細胞雜交比較項目植物體細胞雜交與動物細胞融合的比較原發(fā)性支氣管肺癌5-1

如果患者想知道自己是否得了乙型肝炎，一般是先檢查血液里是否有病毒的蛋白質(zhì)，也就是病毒的抗原等原發(fā)性支氣管肺癌5-1

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1ABC血清中的抗體有時患者體內(nèi)無乙肝病毒，但是用血清抗體進行檢驗時，會出現(xiàn)相應的免疫反應（即假陽性）。如何得到單一的抗體A或B？原發(fā)性支氣管肺癌5-1人們獲得抗體的傳統(tǒng)方法是什么？原發(fā)性支氣管肺癌5-1細胞融合、細胞重組、雜交瘤技術細胞融合將兩個或多個細胞結合形成一個細胞（雜交細胞）。細胞重組把不同細胞的部件重新組裝，包括核移植、葉綠體移植、核糖體重建及線粒體裝配等。雜交瘤技術通過細胞融合產(chǎn)生特異雜交瘤細胞，用于生產(chǎn)單克隆抗體。原發(fā)性支氣管肺癌5-1單克隆抗體制備的原理及流程原發(fā)性支氣管肺癌5-1（二）單克隆抗體1）注射特定抗原4）篩選雜交瘤細胞3）雜交瘤細胞特點1制備過程：5）細胞培養(yǎng)（克?。?）提取單克隆抗體2單克隆抗體的優(yōu)點：特異性強、靈敏度高①②③④⑤2）效應B細胞+骨髓瘤細胞→雜交瘤細胞⑥原發(fā)性支氣管肺癌5-11）作為體外診斷試劑3應用原發(fā)性支氣管肺癌5-1結合藥物的單克隆抗體2）運載藥物如制備生物導彈原發(fā)性支氣管肺癌5-1鼠源性的嵌合的用于治療是很受限制的。原因是：人源性的對鼠源化抗體進行改造-------蛋白質(zhì)工程直接生產(chǎn)人源化抗體-------基因工程原發(fā)性支氣管肺癌5-1原發(fā)性支氣管肺癌5-1

MonoclonalAntibodiesK?hler和Milstein75年建立的技術，通過雜交瘤技術獲得的針對單一抗原決定簇的高特異性抗體。原發(fā)性支氣管肺癌5-11。細胞融合（1）動物與抗原免疫：加強免疫（2）骨髓瘤細胞：體外無限繁殖并不分泌抗體；HGPRT基因缺失，經(jīng)8-氮鳥嘌呤培養(yǎng)基篩選；對數(shù)期（3）免疫B細胞懸液制備：擠壓脾臟（4）飼養(yǎng)細胞：細胞生長需要一定密度；融合細胞大量死亡需要清除；加入同種活細胞（飼養(yǎng)細胞）——小鼠腹腔細胞（巨噬細胞；分泌促細胞生長因子和“清道夫”）；脾臟細胞和成纖維細胞（5）細胞融合：早期用仙臺病毒，現(xiàn)在用PEG，使細胞膜上脂質(zhì)結構重新排列；瘤細胞：B細胞=1：5；加瘤細胞和B細胞對照（6）基礎培養(yǎng)系統(tǒng)：胎牛血清；無?？贵w；加抗生素原發(fā)性支氣管肺癌5-12。選擇性培養(yǎng)（1）HAT培養(yǎng)液：細胞合成DNA有兩條途徑：一為主要途徑，利用糖和氨基酸合成核苷酸，氨基碟呤可阻斷；二為補救途徑，通過磷酸核糖轉化酶（HGPRT）或胸腺嘧啶核苷激酶（TK）利用次黃嘌呤、胸腺嘧啶核苷合成核苷酸。所以骨髓瘤細胞缺乏HGPRT和TK，死亡；B細胞具有HGPRT，但在體外不能長期培養(yǎng)，自然死亡；只有雜交瘤細胞從B細胞獲得HGPRT或TK基因在HAT培養(yǎng)基上生長繁殖。（2）陽性克隆篩選：用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢驗特異性抗體（3）克隆化培養(yǎng)：1個細胞/孔3。McAb擴大生產(chǎn)：（1）腹腔積液型（2）細胞生物反應器4。McAb鑒定與純化（1）單克隆抗體的鑒定（2）純化：辛酸或硫酸銨鹽析；二抗采用蛋白A或蛋白G層析原發(fā)性支氣管肺癌5-1Monoclonalantibodies:均一；純度、效價高；特異性強原發(fā)性支氣管肺癌5-1原發(fā)性支氣管肺癌5-1

細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。淋巴細胞中有這兩種DNA的合成途徑，但不能在體外無限增殖；骨髓瘤細胞中只有D途徑，可以在體外無限增殖。將這兩種細胞在試管中混合，可以獲得兩兩融合的細胞。如何從融合的細胞中分離出雜交瘤細胞？HAT培養(yǎng)基篩選雜交瘤細胞原發(fā)性支氣管肺癌5-1

將雜交瘤細胞在細胞培養(yǎng)板上培養(yǎng)。測定時，加入相應的抗原等物質(zhì)，檢測各孔的上清液中細胞分泌的抗體，產(chǎn)生有色反應的為陽性。酶聯(lián)免疫吸附試驗篩選特定的雜交瘤細胞

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將雜交瘤細胞（細胞表面攜帶抗體）固定于微孔板上。測定時，加入抗原、酶標抗體，清洗游離的成分之后，加入酶促反應底物，產(chǎn)生有色反應即為陽性。酶聯(lián)免疫吸附試驗篩選特定的雜交瘤細胞反應底物

酶標抗體某種抗原

表面抗體

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1原發(fā)性支氣管肺癌5-1有限稀釋法

分離單一的雜交瘤細胞原發(fā)