《 化妝品用原料 纖連蛋白》-征求意見(jiàn)稿

3化妝品用原料纖連蛋白本文件適用于作為化妝品原料的重組纖連蛋白的質(zhì)GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試3.13.2采用重組DNA技術(shù)，對(duì)編碼所需人纖連蛋白質(zhì)的基因進(jìn)行遺傳操作和（或）修飾，利用質(zhì)?；虿《?.3形態(tài)分類(lèi)morphologicalclassi噴干類(lèi)纖連蛋白spray-dried凍干類(lèi)纖連蛋白freeze-driedfibr纖連原蛋白溶液fibrinogensol4合而成的重組人源化纖連蛋白，或是與天然纖連蛋白氨4.2劑型4.3質(zhì)量要求4,4感官指標(biāo)標(biāo)b符合規(guī)定氣味4.5理化指標(biāo)符合“標(biāo)示值±10kD”//54.6微生物指標(biāo)4.7安全性物質(zhì)指標(biāo)4.8生物學(xué)活性纖連蛋白的生物學(xué)活性是指以重組纖連蛋白生物學(xué)特性相關(guān)的屬性為基礎(chǔ)的生物學(xué)作用。纖連蛋連蛋白相互作用來(lái)評(píng)價(jià)重組纖連蛋白的生物學(xué)4.9凈含量4.10包裝外觀(guān)本文件所用試劑和水，在沒(méi)有注明其他要求時(shí)，均指分析純?cè)噭┖虶B/T6682規(guī)定的一級(jí)水。實(shí)6溶液樣品解凍完全后，直接取樣50mg混合均勻，粉末類(lèi)固體樣品稱(chēng)取50mg加水制成10mg/mL的待測(cè)溶液，將被測(cè)樣品置于無(wú)色透明的容器內(nèi)，在自然光下觀(guān)察色澤、性狀，可見(jiàn)異物和鑒別氣5.2理化指標(biāo)5.2.1鑒別5.2.1.1氨基酸序列人源纖連蛋白的氨基酸序列同源性≥70%。5.2.1.2蛋白質(zhì)分子量注：對(duì)于易發(fā)生降解的纖連蛋白，在描述分子量時(shí)，應(yīng)考按《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2015年版第四章1.1pH值中的方法測(cè)定，溶液樣品解凍完全后可采用直測(cè)法測(cè)定，固體樣品稱(chēng)取50mg加水制成1mg/mL的待測(cè)溶液進(jìn)行測(cè)定。5.6.1鉛、砷、鎳、汞、鎘5.7生物學(xué)活性測(cè)定細(xì)胞增殖、分化、黏附和遷移生物學(xué)活性可參照YY/T1876.2.1本產(chǎn)品由生產(chǎn)廠(chǎng)的質(zhì)量檢驗(yàn)部門(mén)按本文件的規(guī)定進(jìn)行檢驗(yàn)，合格后方可出廠(chǎng)。生產(chǎn)廠(chǎng)應(yīng)保證所有出廠(chǎng)的產(chǎn)品都均符合本文件的要求。每批出廠(chǎng)的產(chǎn)品都應(yīng)有合6.2.2出廠(chǎng)檢驗(yàn)項(xiàng)目為：感官指標(biāo)、理化指標(biāo)（鑒別和純度除外）、微生物指標(biāo)中的6.3型式檢驗(yàn)——新產(chǎn)品或老產(chǎn)品轉(zhuǎn)廠(chǎng)生產(chǎn)的試制定型鑒定；——產(chǎn)品停產(chǎn)半年以上，恢復(fù)生產(chǎn)時(shí)；6.4抽樣6.5判定規(guī)則簽追溯到原料的基本信息（包括但不限于原料標(biāo)7.2包裝密不滲漏。包裝外觀(guān)要求應(yīng)符合QB/T167.3運(yùn)輸固體劑型可在常溫下短時(shí)間運(yùn)輸，長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)輸應(yīng)在0℃~10℃環(huán)境中。產(chǎn)品運(yùn)輸時(shí)應(yīng)輕裝、輕卸，按箱7,4貯存作為蛋白制品，產(chǎn)品貯存過(guò)程中的溫度條件與劑型有關(guān)，溶液劑型貯存環(huán)境為-25℃~-15℃,凝膠劑型貯存環(huán)境為0℃~10℃,固體劑型可在常溫下短時(shí)間貯存，長(zhǎng)時(shí)間貯存應(yīng)在0℃~10℃冷庫(kù)中。87.5保質(zhì)期9SDS法是一種變性的聚丙烯胺凝膠電泳方法。本法分離蛋白質(zhì)的原理是根據(jù)多數(shù)蛋白質(zhì)都能與陰離子表面活性劑十二烷基硫酸鈉（SDS）按重量比結(jié)合成復(fù)合物，使蛋白質(zhì)分子所帶的負(fù)電荷遠(yuǎn)超過(guò)天然蛋白質(zhì)分子的凈電荷，消除了不同蛋白質(zhì)分子的電荷效應(yīng)，使蛋白質(zhì)按分子大小分A.2主要儀器、設(shè)備A.3試劑和材料A.3.4N-N-甲叉雙丙稀酰胺。A.3.5三羥基甲基氨基甲烷(TrA.3.10溴酚藍(lán)。A.3.14冰醋酸。A.3.1514N-N-N`-N`-四甲基乙A.4試劑配置A.4.130%丙稀酰胺(WN)取18.17gTirs，溶于60mL去離子水中，加入約3mL以上的濃鹽酸（HCI）調(diào)節(jié)A.4.410%十二烷基硫酸鈉（SDA.4.6TEMED(N-N-N`-N`-四甲基乙二胺)原液A.4.7分離膠緩沖液(1.5mol/LTris-HCA.4.9還原型蛋白上樣緩沖液A.4.10考馬斯亮藍(lán)R-250染色液(1A.4.11脫色液(1L)A.5試驗(yàn)步驟與方法A.5.1樣品前處理將蛋白溶液按照4:1的比例加入5×還原型蛋白上樣緩沖液，沸水浴10min，使樣品中的蛋白A.5.2制備蛋白膠按照目的蛋白分子量依據(jù)表A.1制定相應(yīng)濃度的4245-555543-A.5.3上樣電泳A.5.4染色取A.4.10配制完成的考馬斯亮藍(lán)染色。置于搖床上，室溫染色30min。A.5.5脫色。生紫色的BCA-銅復(fù)合物，在562nm處具有強(qiáng)線(xiàn)性吸收，吸收度隨蛋白濃度增加而升高。在550nm~570nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)，可對(duì)紫色進(jìn)行測(cè)量。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，進(jìn)而根據(jù)擬合方程計(jì)算樣本中蛋B.3.2試劑：試劑盒型號(hào)為碧云天（Beyotime）-B.3.4BCA工作液的配制：根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工取1.2mL蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液加入到一管蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液。配制后可立即使用，也可以-20℃長(zhǎng)期保存。取適量25mg/mL蛋白標(biāo)準(zhǔn)，稀釋至終濃度為0.5mg/mL。將待測(cè)樣品去離子水稀釋至檢測(cè)范圍在標(biāo)準(zhǔn)曲B.5.1標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作：取一塊96孔酶標(biāo)板，按下表B.1數(shù)12345678012488400B.5.6根據(jù)測(cè)得的吸光值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上計(jì)算出樣品的蛋分子排阻色譜法是根據(jù)待測(cè)組分的分子大小進(jìn)行分離的一種液相色譜技術(shù)。分子排阻色譜法的分離原理為凝膠色譜柱的分子篩機(jī)制。色譜柱多以親水硅膠、凝膠或經(jīng)過(guò)修飾的凝膠如葡聚糖凝膠（Sephadex）和瓊脂糖凝膠（Sepharose）等為填充劑，這些填充劑表面分布著不同孔徑尺寸的孔，藥按配方氯化鈉0.9%和氨丁三醇0.36%配置流動(dòng)性，裝柱前先將約15g葡聚糖凝膠SephadexG-10用水浸泡48h，使之充分