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彌散性血管內(nèi)凝血患者全血細(xì)胞組織因子活性改變的意義探討
[摘要]目的:探討彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)患者全血細(xì)胞組織因子(TF)活性改變的意義。方法:選取2014年9月-2016年9月在本院收治的59急性粒細(xì)胞白血病患者,劃分為A~D四組,即:正常對照組(A組)37例,疾病組中經(jīng)凝血檢查確診正常病例(B組)7例,1~2項凝血檢查異常組(C組)20例,疑似DIC組(D組)。運(yùn)用脂多糖(LPS)刺激的全血復(fù)鈣時間,對血細(xì)胞TF活性(TiFaCR)進(jìn)行檢測,對全血凝固時間進(jìn)行復(fù)鈣檢查,依據(jù)全血凝固時間縮短情況(△s),對促凝活性(TF-PCA)的強(qiáng)弱進(jìn)行判斷。結(jié)果:回顧性、描述性分析受檢病例,得知DIC患者的TF-PCA為(95.1±68.5)△s,疑似DIC為(85.7±16.8)△s,正常組為(30.3±25.0)△s,上述比較差異顯著(P<0.05),TF-PCA抑制實驗結(jié)果及TF-PCA檢測結(jié)果顯示,TiFaCR對TF-PCA測定,在特異性與靈敏性上較高。結(jié)論:DIC與疑似DIC患者經(jīng)LPS刺激之后,其TF-PCA呈顯著性增強(qiáng),TiFaCR對DIC診斷、預(yù)后評價具有突出的臨床應(yīng)用意義與價值。關(guān)鍵詞:彌散性血管內(nèi)凝血;全血細(xì)胞組織因子活性;全血細(xì)胞組織因子表達(dá)Abstract:Objective:Toinvestigatethechangesoftissuefactor(TF)activityinwholebloodofpatientswithdisseminatedintravascularcoagulation(DIC).Methods:FromSeptember2014September-2016in59patientswithacutemyeloidleukemiainourhospital,pidedintoA~Dfourgroups:normalcontrolgroup(Agroup)37cases,diagnosedbybloodcoagulationdiseasegroupinnormalcases(Bgroup)7cases,1~2bloodcoagulationabnormalitiesgroup(Cgroup)20suspectedcases,DICgroup(Dgroup).Theuseoflipopolysaccharide(LPS)stimulatedwholebloodrecalcificationtimeofbloodcells.TheuseofSPSS20.0softwaretest,theimplementationofbivariatecorrelationprocessing.Results:Retrospective,descriptiveanalysisexaminedcasesthatpatientswithDICTF-PCA(95.1±68.5)△s,DIC(85.7±16.8suspected)△s,normalgroup(30.3±25)△s,thedifferencewassignificant(P<0.05).Conclusion:DICandLPSinpatientswithsuspectedDICafterstimulation,theTF-PCAwassignificantlyenhanced,TiFaCRdiagnosisandprognosisofDIChasasignificantclinicalsignificanceandvalue.Keywords:Disseminatedintravascularcoagulation;Wholebloodtissuefactoractivity;Wholebloodtissuefactorexpression組織因子(TF)實為一種跨膜糖蛋白,其在人體凝血始動過程中發(fā)揮著關(guān)鍵性作用,對于其生理功能而言,親和受體高,乃為活化因子VⅡ(FVⅡ)與凝血因子(VⅡ)的重要輔助因子,TF-VⅡa通過對X、FIX予以水解,造成凝血酶成為始動內(nèi)、外凝血系統(tǒng),此乃形成血栓的核心誘因[1]。近些年來,經(jīng)多方研究證實[2-4],血液當(dāng)中的細(xì)胞TF表達(dá)增高高于正常時,乃為導(dǎo)致血栓的重要征兆,在妊高癥、糖尿病及心腦血管疾病患者的血液當(dāng)中的單核細(xì)胞表面TF表達(dá)呈現(xiàn)增強(qiáng)狀況,此乃形成血栓的潛在性、關(guān)鍵性危險因素。至此,測定細(xì)胞TF活性,已然成為對血栓形成予以判斷的關(guān)鍵途徑。本次研究通過選取可能為彌散性血管內(nèi)凝血的59例患者,對其實施TiFaCR檢測,現(xiàn)報道如下。1.資料與方法1.1一般資料選取來我院行健康體檢且自愿獻(xiàn)血的37例學(xué)生,其中男24例,女13例,年齡區(qū)間21~29歲,平均24.3歲,受檢者經(jīng)全面體檢,未查出與血栓形成、出血等有關(guān)的各類病癥,隨即取靜脈血,檢測凝血功能及TiFaCR,檢查前,均無藥物服用情況。選取2014年9月-2016年9月在本院收治的59急性粒細(xì)胞白血?。ˋML)患者,其中男41例,女22例,年齡區(qū)間12~75歲,平均32.3歲,多用DA方法治療AML患者,即阿醣胞苷q12×7d、柔紅霉素60×3d,DIC患者多選用2000單位低分子量肝素鈉q12h。全部病例DIC診斷均與全國第七屆血栓止血會議所頒布的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)相符。分組:正常對照組(A組)37例,疾病組中經(jīng)凝血檢查確診正常病例(B組)7例,1~2項凝血檢查異常組(C組)20例,疑似DIC組(D組,凝血檢查≥3項,但與DIC診斷標(biāo)準(zhǔn)不相符者)11例,與DIC診斷相符病例(E組)22例。1.2設(shè)備與試劑選用設(shè)備有:SysnexCA-7000全自動血凝儀(日本);BOCA半自動血凝儀(中泰公司聯(lián)合制造);凝膠電泳分析系統(tǒng)(上海四星公司產(chǎn));Centrifuge5810R低溫離心機(jī)(德國Eppendorf公司產(chǎn))。試劑:DIC檢測試劑均為商購(DadeBehring公司產(chǎn));TF途徑抑制物(TFPI,ADI公司產(chǎn));脂多糖(LPS,ADI公司產(chǎn));抗TF熒光標(biāo)記抗體(Atf-FSC,ADI公司)。1.3實驗方法測定全血組織因子促凝活性(TF-PCA),自然靜脈枸緣酸抗凝全血(抗凝劑與血質(zhì)量比例1:9),將LPS加至抗凝全血,使之質(zhì)量濃度維持在9μg/ml全血,另將等體積全血、咪唑緩沖液加至另一試管,以此來替代LPS,隨即在測定試管當(dāng)中加入300μl自然全血,另將35μl濃度為0.2mol/L的氯化鈣溶液加入試管,運(yùn)用Sysmex-7000血凝儀,對全血凝固時間進(jìn)行測定,將經(jīng)過刺激以及未經(jīng)刺激的兩試管(有剩余血液),均放置于37℃環(huán)境中水浴,分別在1、2、4、8與24h,采用上述方法對凝血時間進(jìn)行測定,實驗測定均進(jìn)行2次,對于測定中所存在的時間差,則取均值,用TF-PCA△s表示最終結(jié)果。凝血檢測抗凝血酶、纖維蛋白原(Fg)、APTT及DD二聚體(DD)。1.4統(tǒng)計學(xué)分析SPSS20.0處理本次研究所得數(shù)據(jù),方差分析TF-PCA檢測結(jié)果。行t檢驗,對TF-PCA濃度反應(yīng)曲線實施兩變量相關(guān)性處理,若經(jīng)比較差異顯著,則由P<0.05表示。2.結(jié)果2.1患者與正常人TF-PCA△s的測定結(jié)果2.1.1各組TF-PCA△s結(jié)果C、D與E組TF-PCA△s相比于A、B組,差異顯著(P<0.05),C組較之D組與E組,差異不顯著(P>0.05),D組與E組比較,無顯著性差異(P>0.05),TF-PCA與D-D、APTT等變化程度無相關(guān)性。見表1。表1各組TF-PCA△s的測定結(jié)果(±s)組別例數(shù)TF-PCA(△s)APTT(s)Fg(g/L)D-D(mg/L)A組3730.3±25.029.8±2.923.38±0.490.31±0.08B組745.9±14.0*26.5±4.282.93±0.590.17±0.12C組2057.4±27.8#&26.1±4.202.77±1.340.32±0.30D組1185.7±16.8△23.8±2.992.43±1.310.79±0.29E組2295.1±68.7△31.7±11.71.90±1.270.78±0.34注:與D組、E組相比,*P<0.05;與A組相比,#P<0.05;與D組、E組相比,△P<0.05。2.1.2各受檢組TF-PCA△s與其他檢測指標(biāo)的異常狀況將超出正常人組(±s)作為異常判斷標(biāo)準(zhǔn)的界值,由表2可知,E組與D組TF-PCA,以及在其他方面的檢測,在異常率上相比于其他各組,高于后者,由表1可知,C組、D組、E組相比于A組、B組,差異顯著(P<0.05),D組與E組無顯著性差異(P>0.05)。表2各受檢組TF-PCA△s與其他檢測指標(biāo)的異常狀況[例(%)]組別例數(shù)TF-PCAAPTTFgD-DC組209(45.0)8(40.0)6(30.0)3(15.0)D組116(54.55)7(63.64)6(54.55)10(90.91)E組2213(59.09)14(63.64)21(95.45)19(86.36)2.1.3受檢病例動態(tài)觀察經(jīng)典型病例動態(tài)觀察得知,TF-PCA與DIC病程的發(fā)展、預(yù)后之間存在緊密關(guān)聯(lián)。如圖1所示。圖1典型病例動態(tài)觀察TF-PCA變化情況注:例1—DIC治療后好轉(zhuǎn),例2—抗血病治療過程中出現(xiàn)DIC,經(jīng)治療后得以好轉(zhuǎn),例3—DIC治療無效并死亡。2.2TF-PCA實驗的特異性及影響因素分析2.2.1全血細(xì)胞TF-PCA抑制實驗分析取2只抗凝全血,將LPS加入,另一只5ng/ml的TFPI加入其中,另一只則加入緩沖液,于37℃水浴溫育,時間為3h,對凝血時間進(jìn)行測定,最終結(jié)果得知,沒有TFPI加入的試管,其凝固時間為(80.5±34.0)△s,而對于加TFPI的試管,則為(59.0±32.3)△s,兩組比較差異顯著(P<0.05),由此得知,促凝活性存在部分被抑制狀況。2.2.2TF-PCA濃度反應(yīng)曲線適量取丙酮對人腦浸出液進(jìn)行處理,對其進(jìn)行調(diào)整,使之維持在正常血漿范圍內(nèi),于12.0~12.5s凝固,設(shè)定其TF活性單位,即100%。依據(jù)1:16~256比例,稀釋此TF溶液,將抗凝全血加入,另將0.2mol/L氯化鈣溶液加入,對凝固時間進(jìn)行記錄,經(jīng)半對數(shù)直線回歸顯示得知,TF-PCA與兩管TiFaCT在差值方面具有緊密的相關(guān)性(r=0.915,P=0.028)。3.討論3.1DIC診斷中TF-PCA改變的意義部分研究指出,患者血液當(dāng)中的粒細(xì)胞表面組織因子存在高表達(dá)狀況,乃是機(jī)體內(nèi)凝血被激活的突出表現(xiàn)與核心機(jī)制。通過對細(xì)胞TF開展深入研究得知,基于病理框架下,諸如細(xì)胞因子、內(nèi)毒素等,對于單核細(xì)胞表達(dá)TF,均具有誘導(dǎo)作用,尤其是脂多糖(LPS),對于單核細(xì)胞高表達(dá)TF,具有突出的誘導(dǎo)作用,并且在促凝活性方面也比較顯著,此點已得到臨床研究證實[5]。另與報道指出[6],靜息血小板相應(yīng)TF抗原,以α顆粒以及開放管道系統(tǒng)存在較多,如若血小板處于活化狀態(tài),TF發(fā)生易位,其中的部分則攜帶有些許的TF微粒,以一種載的方式,向血漿中發(fā)射。當(dāng)前,大多研究未能于體外,誘導(dǎo)粒細(xì)胞,使之出現(xiàn)蛋白表達(dá)與TFmRNA,對于用作推測粒細(xì)胞上的相應(yīng)TF,同樣可能從中得到其他細(xì)胞,這些細(xì)胞還可能在的腫瘤細(xì)胞可表達(dá)TF中不斷循環(huán),進(jìn)而形成持續(xù)性、不間斷的TF-PCA。經(jīng)本次研究得知,受檢的急性白血病患者當(dāng)中,多數(shù)均存在不同程度的凝血指標(biāo)異常狀況,另外,還有部分患者存在TF-PCA增高狀況,其在整個疾病組所占比重為52.54%(31/59),其中增高最為明顯的是DIC與疑似DIC組,其在整個總陽性例數(shù)當(dāng)中所占比重為54.84%(17/31),通過開展凝血相關(guān)檢查,得知正常組與輕微異常組(B組、C組)的異常率為32.26%(10/31),正常組(A組)異常率則為6.45%(2/31)。C組、D組與E組的TF-PCA相比于A組,存在顯著性差異;C組與D組、E組相比,同樣存在顯著性差異,AL患者通常會出現(xiàn)凝血功能異常,還會并發(fā)DIC,已有諸多研究與報道所證實[7],尤其是早幼粒細(xì)胞白血?。ˋPL),其在DIC發(fā)生率方面非常高,本次研究6例APL當(dāng)中,TF-PCA增高占4例,且經(jīng)臨床診斷,均確診為伴有DIC。近年研究指出[7-8],一些APL臨床嚴(yán)重性出血,與纖溶活性增強(qiáng)造成原發(fā)性性纖溶亢進(jìn),以及AL細(xì)胞表面在annexinⅡ持續(xù)性增高相關(guān)。經(jīng)本次研究得知,DIC與疑似DIC組的TF-PCA相比于其他各組,增高顯著,而DIC組在TF-PCA方面相比于疑似DIC組,差異不明顯,由此提示,TiFaCT檢查,并與臨床癥狀相結(jié)合,可為DIC診斷提供重要參考。通過對一些患者開展動態(tài)觀察,得知TF-PCA的變化與其DIC治療預(yù)后之間存在著緊密關(guān)聯(lián)。3.2TF-PCA方法的靈敏性與特異性通過上述誓言得知,運(yùn)用TFPI抑制縮短的TiFaCT實驗,由此得知,實施移植之后,TiFaCT存在顯著性延長,但對于全血當(dāng)中的促凝活性而言,并無全部被抑制,由此得知,全血當(dāng)中的PCA來源并非單一,仍有其他來源。運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)實施測定得知,LPS刺激之后,全血當(dāng)中的白細(xì)胞TF表達(dá)增高顯著,至此,TiFaCT對TF-PCA的測定,在特異性方面比較高。另外,通過分析TF-PCA濃度反應(yīng)曲線得知,此方法在靈敏性上也比較高,對6份LPS刺激標(biāo)本開展1~24h的密切觀察,得知于4h時,TF-PCA具有最強(qiáng)的表現(xiàn),而到2h之后,仍有TF-PCA,由此可知,LPS刺激細(xì)胞TF-PAC,持續(xù)的時間比較長。參考文獻(xiàn):[1]鐘洪明,葉倩.彌散性血管內(nèi)凝血患者血漿中游離組織因子途徑抑制物的測定及臨床意義[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2008,31(4):438-439.[2]楊威,王彪,遲昨非,等.初診急性白血病患者細(xì)胞膜組織因子和血漿F1+2檢測的臨床意義[J]
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