臨床免疫分析發(fā)展趨勢及化學發(fā)光技術應用課件

臨床免疫分析發(fā)展趨勢

及化學發(fā)光技術應用1可編輯課件PPT-化學發(fā)光-熒光偏振-微粒子酶放大化學發(fā)光電化學發(fā)光-時間分辨免疫熒光抗體芯片透射和散射比濁流式細胞技術-免疫擴散-免疫沉淀/免疫凝集-ELISA-IFARIAICT

免疫學和自動化技術在臨床免疫學診斷領域中的應用將大大加速2可編輯課件PPT標記免疫學分析技術發(fā)展歷程免疫熒光分析(Coons,1941)放射免疫分析(Berson和Yalow,1960)酶聯(lián)免疫吸附分析(Engvall,1971)金標免疫分析(Faulk和Taylor,1971)化學發(fā)光免疫分析(Arakawa，1977)時間分辨熒光免疫分析(Soini和Hemmila，1979)電化學發(fā)光免疫分析(Leland,1990)3可編輯課件PPT放射免疫診斷技術（RIA）酶聯(lián)免疫診斷技術（ELISA）化學發(fā)光免疫診斷技術（CLIA）20世紀60年代70年代80年代90年代2000年2020年時間近代臨床免疫診斷技術發(fā)展歷程臨床免疫診斷技術的發(fā)展基本歷經(jīng)了以下三個階段：4可編輯課件PPT方法中國歐美放射免疫法（RIA）1.興起于20世紀70年代，現(xiàn)仍普遍使用于縣級以上醫(yī)院；2.產(chǎn)品處于衰退期；3.廠商試劑與儀器共同開發(fā)，試劑基本系列化。1.興起于20世紀60年代，現(xiàn)已基本退出臨床應用；2.產(chǎn)品生命周期已終結；3.廠商試劑和儀器共同開發(fā)，試劑基本系列化酶聯(lián)免疫法（ELISA）1.興起于20世紀80年代，現(xiàn)普遍使用于各級臨床機構，為我國臨床免疫診斷的基本方法；2.產(chǎn)品處于成熟期；3.廠商試劑和儀器共同開發(fā)，試劑尚未系列化。1.興起于20世紀70年代，現(xiàn)仍在臨床應用；2.產(chǎn)品處于衰退期；3.廠商試劑和儀器共同開發(fā)，試劑基本系列化。化學發(fā)光免疫法（CLIA）1.導入于20世紀90年代，逐步進入各大中醫(yī)院；2.產(chǎn)品處于快速成長期；3.正逐步實現(xiàn)試劑和儀器共同開發(fā)，試劑逐步系列化1.興起于20世紀80年代，現(xiàn)已被臨床普遍使用，成為臨床免疫診斷的支柱方法；2.產(chǎn)品處于成熟期；3.廠商試劑與儀器共同開發(fā)，儀器自動化程度高，試劑系列化狀態(tài)好。近代臨床免疫診斷技術發(fā)展歷程5可編輯課件PPT技術成熟度高放射性（125I）污染和危害125I的半衰期短，試劑有效期短標記物125I的穩(wěn)定性差，批間、批內(nèi)的變異較大標準曲線有效期短，必須每次定標操作繁瑣，出報告時間長無法保存?zhèn)溆?。放射免疫技術（RIA）

RosalynYalow,19776可編輯課件PPT成本低廉定性、半定量和定量均可以檢測O.D值在低中濃度范圍與酶活性呈線性關系可以肉眼簡單判讀或酶標儀準確判讀結果酶免疫分析技術(EIA)7可編輯課件PPT靈敏度高，檢測低限達10-19mol測定范圍寬，可達9個數(shù)量級自動化程度高，操作簡單試劑穩(wěn)定性好，無污染有效期6－24月化學發(fā)光免疫分析（CLIA）8可編輯課件PPTBAYERACS180AxSYMElecsys2010SystemAccess?2ImmunoassaySystem9可編輯課件PPT最先進的免疫學分析技術之一非開放性試劑系統(tǒng)；試劑價格過高

電化學發(fā)光免疫測定（Electrochemiluminescenceimmunoassay,ECLI）是電化學發(fā)光（ECL）和免疫測定相結合的產(chǎn)物。它的標記物的發(fā)光原理與一般的化學發(fā)光（CL）不同，是一種在電極表面由電化學引發(fā)的特異性化學發(fā)光反應，實際上包括了電化學和化學發(fā)光二個過程。ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發(fā)光反應，而CL是通過化合物混合啟動發(fā)光反應。Elecsys2010System10可編輯課件PPT免疫學檢驗技術發(fā)展趨勢快速簡便精確靈敏集成高通量

金標免疫層析檢測磁珠免疫層析檢測

化學發(fā)光時間分辨熒光

AlphaScreen

陣列芯片液相懸浮芯片11可編輯課件PPT化學發(fā)光免疫分析技術及其在臨床診斷中的應用12可編輯課件PPT

簡史：本世紀70年代中期Arakawe首次報道用發(fā)光信號進行酶免疫分析，利用發(fā)光的化學反應分析超微量物質，特別是用于臨床免疫分析中檢驗超微量活性物質。目前，這一技術已從實驗室的稀有技術過渡到臨床醫(yī)學的常規(guī)檢測手段。原理：發(fā)光底物在酶的作用下，底物發(fā)生化學反應并釋放出大量的能量，產(chǎn)生激發(fā)態(tài)的中間體。這種激發(fā)態(tài)中間體，當其回到穩(wěn)定的基態(tài)時，可同時發(fā)射出光子。利用發(fā)光信號測量儀器即可測量光量子產(chǎn)額，該光量子產(chǎn)額與催化的酶的量成正比,由此可以建立標準曲線并計算樣品中待測物質的含量.

CLIA試劑盒國產(chǎn)化程度已經(jīng)較高，質量與國外產(chǎn)品的差距逐漸減小。缺乏國產(chǎn)化的自動檢測儀器化學發(fā)光免疫分析發(fā)展史CLIA13可編輯課件PPT發(fā)光檢測方法分類和對比

類型

原理

試劑

發(fā)光類型化學發(fā)光免疫分析(CLIA)化學發(fā)光物質直接標記抗原(體)

吖啶酯異魯米諾

閃光型化學發(fā)光酶免疫分析(CLEIA)在酶免疫分析完成后加入底物魯咪諾系統(tǒng)AMPPD系統(tǒng)

輝光型電化學發(fā)光免疫分析（ELCIA)電致化學發(fā)光與電化學手段相結合三聯(lián)吡啶釕三丙氨系統(tǒng)

閃光型熒光免疫分析根據(jù)抗原抗體反應的原理，先將已知的抗原或抗體標記上熒光素，制成熒光抗體，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢測組織或細胞內(nèi)的相應抗原（或抗體）

熒光素

閃光型

14可編輯課件PPT【化學發(fā)光免疫分析種類】

1.直接化學發(fā)光A吖啶酯發(fā)光原理：納米磁珠分離后的吖啶酯標記的抗原抗體復合物，在含H2O2的強酸、強堿激發(fā)底物的作用下，快速發(fā)出可見光，通過光電倍增管進行光子計數(shù)，相對光強度RLU與待測抗原濃度成函數(shù)關系。特點：發(fā)光過程在5秒內(nèi)完成，激發(fā)發(fā)光程序簡單，測試速度快，但發(fā)光標記物吖啶酯在緩沖液中不穩(wěn)定，易水解，影響試劑穩(wěn)定性。代表儀器：拜耳公司的ACS180，雅培Architect。15可編輯課件PPT原理圖16可編輯課件PPT【化學發(fā)光免疫分析種類】B異魯米諾發(fā)光原理：發(fā)光過程和原理與吖啶酯完全相同，但激發(fā)發(fā)光速度更快，在3秒內(nèi)完成整個過程，測試速度最快，而且克服了吖啶酯在緩沖液不穩(wěn)定、易水解的缺點。代表儀器：德國Byk–Sangtec公司的LIAISON17可編輯課件PPT原理圖18可編輯課件PPT2、酶促化學發(fā)光或持久發(fā)光原理：酶促化學發(fā)光一般是將堿性磷酸酶（AP)或辣根過氧化物酶(HRP)標記在抗體或抗原上，固相抗體或抗原與AP或HRP標記的抗原、抗體復合物在發(fā)光底物AMPPD或Luminol作用下，持續(xù)發(fā)出可見光，通過光電倍增管讀取光信號。特點：堿磷酶體系：水解反應，起光較慢，發(fā)光強度較弱，靈敏度較高。辣根酶體系：氧化還原反應，起光較快，發(fā)光強度較大。代表儀器和試劑：進口品牌：強生VitrosECi（魯米喏），美國貝克曼公司的ACCESS（AMPPD）。國產(chǎn)主要廠家：鄭州安圖（HRP-LUMINOL)

、北京源德（HRP-LUMINOL)

、泰格可信（HRP-LUMINOL)

、科美東雅(AMPPD)、威海威高（HRP-LUMINOL)等【化學發(fā)光免疫分析種類】19可編輯課件PPTVitrosECi（魯米喏）原理圖英國強生VitrosECi（魯米喏）

20可編輯課件PPT3、電化學發(fā)光原理：納米磁珠分離后的三聯(lián)吡啶釕標記的抗原抗體復合物，在三丙胺的作用下，發(fā)生氧化還原反應，發(fā)出可見光，通過光電倍增管進行光子計數(shù)，相對光強度RLU與待測抗原濃度成函數(shù)關系。特點：激發(fā)發(fā)光過程復雜，時間長，每一個發(fā)光過程約需25秒，測試速度慢。代表儀器：瑞士ROCHE公司的ELECSYS1010和ELECSYS2010?！净瘜W發(fā)光免疫分析種類】21可編輯課件PPT電化學發(fā)光檢測技術（ELECSYS1010ELECSYS2010）原理圖羅氏（RocheDiagnostics）22可編輯課件PPT1結合了活化的三聯(lián)吡啶釕衍生物即[Ru(bpy)3]2++N羥基琥珀酰胺酯（NHS）的抗-HBs和結合了生物素的抗-HBs與待測血清同時加入一個反應杯中孵育9分鐘

操作步驟23可編輯課件PPT將被鏈霉親和素包被的磁珠加入反應杯中，再次孵育9分鐘，使生物素通過與親和素的結合將磁珠、抗-HBs連接為一體，形成雙抗體夾心法24可編輯課件PPT25可編輯課件PPT3蠕動泵將形成的[Ru(bpy)3]2+－抗體－抗原－抗體－磁珠復合體吸入流動測量室，此時，磁珠被工作電極下面的磁鐵吸附于電極表面。同時，游離的抗-HBs（與生物素結合的和與[Ru(bpy)3]2+結合的抗體）也被吸出測量室

26可編輯課件PPT4蠕動泵加入含三丙胺（TPA）的緩沖液，同時電極加電壓，啟動ECL反應過程27可編輯課件PPT28可編輯課件PPT5終止電壓，移開磁珠，加入清洗液沖洗流動測量室，準備下一個樣品測定29可編輯課件PPT4、免疫熒光4.1時間分辨免疫熒光（TRFIA)

美國PerkinElmer

芬蘭Wallac

新波達安基因4.2光激化學發(fā)光（Lica）博陽

4.3多種技術綜合美國雅培AxSYMMEIA

日本東曹MEIA【化學發(fā)光免疫分析種類】30