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馬鈴薯6種病毒的檢測RT-PCR法Detectionofthesixpotatoviruses—RT-PCRmethod2015-02-09發(fā)布2015-05-01實施中華人民共和國農(nóng)業(yè)部I1馬鈴薯6種病毒的檢測RT-PCR法4.475%乙醇4.810×PCRbuffer(Mg2+free)24.151.5%瓊脂糖凝膠板多存放3d。3[也可以用隨機引物或oligo-dT(但不適用于PLRV,只能用于其他5種病毒)]。6.4.1.2RNA預(yù)變性離心，使試劑沉降到PCR管底。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)后取出直接進行PCR或置-2表1PCR擴增反應(yīng)體系下游引物10×PCR緩沖液92℃預(yù)變性5min;92℃變性30s,55.5℃退火30s,72℃延伸45s,循環(huán)30次；72℃延伸8min。6.5多重RT-PCR執(zhí)行雙重RT-PCR的反轉(zhuǎn)錄時，每種病毒下游引物加0.5μL,DEPC水減少0.5pL;執(zhí)行三重45縮略語67病毒引物序列見表C.1。引物名稱引物序列(5′～3)PCR擴增片段長度注1:F代表每種病毒的上游引物。注2:R代表每種病毒的下游引物。PVS?和PVSA株系。8見圖D.2。PLRV;D.3PVM和PVS雙重RT-PCR檢測體系建立9圖D.5PVY、PLRV和PVS三重RT-PCR檢測體系建立
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