專題二-微生物的培養(yǎng)和利用課件

專題二微生物的培養(yǎng)和利用專題二-微生物的培養(yǎng)和利用[考綱要求]1．微生物的分離和培養(yǎng)。2.某種微生物數(shù)量的測(cè)定。3.培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用1．微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)(1)培養(yǎng)基①種類→____培養(yǎng)基，____培養(yǎng)基(按物理性質(zhì)分)。②成分→_____、_____、___、_______、生長(zhǎng)因子。(2)制備固體培養(yǎng)基一般步驟：____→稱量→溶化→_____→倒平板?？键c(diǎn)突破·核心探究考點(diǎn)1微生物的分離與培養(yǎng)液體固體碳源氮源水無(wú)機(jī)鹽計(jì)算滅菌專題二-微生物的培養(yǎng)和利用(3)無(wú)菌技術(shù)①消毒→較為溫和的物理或化學(xué)方法，不能殺死_____和________。②滅菌→強(qiáng)烈的理化因素，殺死物體內(nèi)外所有的________，包括______和________。(4)無(wú)菌技術(shù)的類型、方法及對(duì)象(連線)芽孢孢子微生物芽孢孢子專題二-微生物的培養(yǎng)和利用(5)純化大腸桿菌_____________；稀釋涂布___________。(6)菌種保存臨時(shí)保存，4℃(冰箱)；長(zhǎng)期保存，________法。2．無(wú)菌技術(shù)(1)目的：獲得_________________。(2)關(guān)鍵：防止______________的入侵。平板劃線法平板法甘油管藏純凈的培養(yǎng)物外來(lái)雜菌專題二-微生物的培養(yǎng)和利用1．正誤判斷(1)培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進(jìn)行滅菌(2013·江蘇)()(2)從有機(jī)廢水中分離分解有機(jī)物的微生物時(shí)，接種后的培養(yǎng)皿須放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(2013·江蘇)()(3)消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對(duì)細(xì)胞的傷害(2013·重慶)()(4)培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽，有時(shí)還需要加入一些特殊的物質(zhì)()××√√專題二-微生物的培養(yǎng)和利用(5)無(wú)菌操作的對(duì)象只要是沒(méi)有生物活性的材料(如培養(yǎng)基、接種環(huán)等)都可采用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌()(6)下圖中甲為平板劃線法中最重要的環(huán)節(jié)，乙為操作的結(jié)果：×專題二-微生物的培養(yǎng)和利用①每一次劃線后要將接種環(huán)灼燒()②除第一次劃線外，每一次劃線的起點(diǎn)都是第一次劃線的末端()(7)用稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時(shí)，只要稀釋度足夠高，就能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落()√×√專題二-微生物的培養(yǎng)和利用2．如圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖，請(qǐng)思考。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用(1)獲得圖A效果和B效果的接種方法分別是什么？(2)某同學(xué)在純化土壤中的細(xì)菌時(shí)，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌落連成一片，最可能的原因是什么？應(yīng)當(dāng)怎樣操作才可避免此種現(xiàn)象？提示

(1)獲得效果A的接種方法為稀釋涂布平板法，獲得效果B的接種方法為平板劃線法。(2)最可能的原因是菌液濃度過(guò)高或劃線時(shí)在劃下一區(qū)域前未將接種環(huán)滅菌；采取的措施是增大稀釋倍數(shù)或每次劃新區(qū)域前先將接種環(huán)滅菌。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用1．消毒和滅菌的不同點(diǎn)比較項(xiàng)目理化因素的作用強(qiáng)度消滅微生物的數(shù)量芽孢和孢子能否被消滅消毒_________部分生活狀態(tài)的微生物_______滅菌_____全部微生物____較為溫和不能強(qiáng)烈能專題二-微生物的培養(yǎng)和利用2.兩種純化細(xì)菌方法優(yōu)缺點(diǎn)的比較(1)倒平板的方法及注意事項(xiàng)a．請(qǐng)用文字和箭頭寫(xiě)出正確的倒平板操作流程：______________________。b．甲、乙、丙中的滅菌方法是______________。c．丁中的操作需要等待_____________才能進(jìn)行。丙→乙→甲→丁灼燒滅菌平板冷卻凝固專題二-微生物的培養(yǎng)和利用(2)常用的微生物接種方法有兩種a．平板劃線法：是通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面_______________的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面(如圖)。連續(xù)劃線幾種劃線方法示意圖專題二-微生物的培養(yǎng)和利用b．稀釋涂布平板法：是將菌液進(jìn)行一系列的____________，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。系列稀釋操作(如下圖所示)：梯度稀釋專題二-微生物的培養(yǎng)和利用涂布平板操作(如下圖所示)：專題二-微生物的培養(yǎng)和利用(3)平板劃線法與稀釋涂布平板法的比較項(xiàng)目?jī)?yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)平板劃線法____________________________________不能計(jì)數(shù)稀釋涂布平板法____________________________________吸收量較小，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延可以觀察菌落特征，對(duì)混合菌進(jìn)行分離可以計(jì)數(shù)，可以觀察菌落特征專題二-微生物的培養(yǎng)和利用3.純化大腸桿菌的方法(1)純化培養(yǎng)原理：想方設(shè)法在培養(yǎng)基上得到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的菌落，即可獲得較純的菌種。(2)純化大腸桿菌的關(guān)鍵步驟：________。接種專題二-微生物的培養(yǎng)和利用1．微生物的分離和培養(yǎng)是現(xiàn)代生物工程應(yīng)用中的重要環(huán)節(jié)。下圖甲、乙是大腸桿菌分離和培養(yǎng)過(guò)程中部分操作和實(shí)驗(yàn)結(jié)果示意圖，請(qǐng)據(jù)圖回答有關(guān)問(wèn)題：專題二-微生物的培養(yǎng)和利用(1)上圖甲所示的是制備固體培養(yǎng)基時(shí)的實(shí)驗(yàn)操作步驟之一，它稱為_(kāi)_______________，若用該培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌，除考慮營(yíng)養(yǎng)條件外，還要考慮________________、________________和滲透壓等條件。(2)培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染。對(duì)于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測(cè)方法是____________________________________________________________________________________________

。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用(3)上圖乙是平板劃線法接種操作示意圖，正確的操作順序是A→B→________________(用字母和箭頭表示)；找出圖乙中兩處錯(cuò)誤的操作________________、________________(用字母表示)。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用解析

(1)上圖甲所示的實(shí)驗(yàn)操作步驟之一為倒平板，若用該培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌，還要考慮溫度、氧氣、pH和無(wú)菌操作等一系列相關(guān)條件。(2)培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染，因此要設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)，對(duì)于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測(cè)方法是將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生，若有則說(shuō)明培養(yǎng)基已被污染，應(yīng)重新配制培養(yǎng)基進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。(3)上圖乙是平板劃線法接種操作示意圖，正確的操作順序是A→B→G→F→E→C→D→H；圖乙中兩處錯(cuò)誤的操作是C：未在酒精燈火焰旁進(jìn)行操作，D：將第五區(qū)域內(nèi)的劃線與第一區(qū)相連。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用答案

(1)倒平板溫度(氧氣)

pH(無(wú)菌)

(2)將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生(3)G→F→E→C→D→H

C

D專題二-微生物的培養(yǎng)和利用2．(原創(chuàng)題)中國(guó)家電研究院的洗衣機(jī)專家指出，洗衣機(jī)內(nèi)部的環(huán)境非常潮濕，洗衣機(jī)使用時(shí)間越長(zhǎng)，內(nèi)部滋生微生物的機(jī)會(huì)就越大?？此聘蓛舻南匆聶C(jī)，其內(nèi)部隱藏著一個(gè)健康的隱形殺手。某生物興趣小組的同學(xué)，利用內(nèi)桶背面的污垢進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)。(1)培養(yǎng)洗衣機(jī)內(nèi)部微生物的培養(yǎng)基中一般含有________________________________。(2)鑒定洗衣機(jī)污垢中是否有菌落時(shí)要制備固體培養(yǎng)基，在制備完畢后要進(jìn)行倒平板操作，將平板倒置。這樣做的目的是_____________________________。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用(3)有三種材料或用具需要消毒或滅菌：①培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿；②玻棒、試管、燒瓶和吸管；③實(shí)驗(yàn)操作者的雙手。其中需要消毒的是________________，需要滅菌的是________________。(4)檢驗(yàn)污垢中是否含微生物時(shí)，要將污垢制成水樣稀釋，然后將稀釋水樣用涂布器分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)，這種方法稱為_(kāi)_____________。下圖所示的四種菌落分布情況中，不可能由該方法得到的是____________。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用用該方法統(tǒng)計(jì)樣本菌落數(shù)時(shí)是否需要對(duì)照組？________________。為什么？_______________________________________________________

。(5)判斷污垢中微生物的種類可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征進(jìn)行初步的______________________。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用過(guò)的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行滅菌處理才能倒掉，此目的是____________________。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用解析

(1)培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基中一般含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽。(2)倒置平板的目的是防止皿蓋上凝有的水珠落入培養(yǎng)皿造成污染，同時(shí)還可使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)。(3)實(shí)驗(yàn)者的雙手需要進(jìn)行消毒處理，培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基及其他實(shí)驗(yàn)器材等需要進(jìn)行滅菌處理。(4)本題中將污垢水樣接種在培養(yǎng)基上的方法為稀釋涂布平板法。D屬于利用平板劃線法得到的菌落分布。利用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)時(shí)需要設(shè)置對(duì)照組，將一個(gè)未接種污垢水樣的培養(yǎng)基放在相同條件下培養(yǎng)，以此判斷培養(yǎng)基是否被雜菌污染。

專題二-微生物的培養(yǎng)和利用(5)污垢中的微生物種類可以根據(jù)菌落的形狀、大小等進(jìn)行初步分類。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，為防止污染環(huán)境，應(yīng)對(duì)用過(guò)的培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌處理后再倒掉。答案

(1)水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽(2)防止皿蓋上凝結(jié)的水珠落入培養(yǎng)皿造成污染，還可使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)(3)③①②(4)稀釋涂布平板法D需要因?yàn)樾枰袛嗯囵B(yǎng)基是否被雜菌污染(培養(yǎng)基滅菌是否合格)

(5)鑒定(或分類)防止造成環(huán)境污染專題二-微生物的培養(yǎng)和利用3．下圖甲、乙是微生物接種常用的兩種方法，請(qǐng)回答相關(guān)問(wèn)題。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用(1)圖甲是利用________________法進(jìn)行微生物接種，圖乙是利用____________法進(jìn)行微生物接種。這兩種方法所用的接種工具分別是____________和____________；對(duì)這兩種接種工具進(jìn)行滅菌和消毒的方法依次是________________和酒精消毒。(2)接種操作為什么一定要在火焰附近進(jìn)行？______________________________________________________________________

。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用(3)接種后，在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)為什么進(jìn)行倒置培養(yǎng)？_______________________________________________________________________________________________________________________________________________。(4)如圖是采用上述接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖解，其接種方法是________________(填“圖甲”或“圖乙”)。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用解析

圖甲和圖乙分別是平板劃線法和稀釋涂布平板法，這兩種方法所用的接種工具分別是接種環(huán)和涂布器。由于在酒精燈火焰附近存在著無(wú)菌區(qū)域，因此接種常在火焰附近進(jìn)行。在微生物培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生水，對(duì)微生物的生長(zhǎng)造成影響，故需要倒置培養(yǎng)。答案

(1)平板劃線稀釋涂布平板接種環(huán)涂布器灼燒滅菌(2)火焰附近存在著無(wú)菌區(qū)域(3)避免培養(yǎng)過(guò)程產(chǎn)生的水分影響微生物的生長(zhǎng)(4)圖乙專題二-微生物的培養(yǎng)和利用1．土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)(1)分離原理：土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣蒧______，這種物質(zhì)在把尿素分解成無(wú)機(jī)物的過(guò)程中起到_________作用。(2)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目：統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌一般用________________法。(3)實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣→____________→微生物的培養(yǎng)與觀察→細(xì)菌的________。考點(diǎn)2微生物的篩選和計(jì)數(shù)脲酶催化稀釋涂布平板樣品的稀釋計(jì)數(shù)專題二-微生物的培養(yǎng)和利用2．分解纖維素的微生物的分離(1)纖維素酶①組成：一種______________，它至少包括三種組分，即____________________________。復(fù)合酶C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶纖維二糖(2)篩選原理紅色消失，出現(xiàn)________。透明圈專題二-微生物的培養(yǎng)和利用(3)篩選方法①方法：剛果紅染色法，即通過(guò)是否產(chǎn)生_______來(lái)篩選纖維素分解菌。②培養(yǎng)基：以________為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。(4)實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣→選擇培養(yǎng)→___________→將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上→挑選產(chǎn)生_________的菌落透明圈纖維素梯度稀釋透明圈專題二-微生物的培養(yǎng)和利用1．正誤判斷(1)對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)只能采用稀釋涂布平板法，而不能用平板劃線法()(2)篩選能分解尿素的細(xì)菌所利用的培養(yǎng)基中，尿素是唯一的氮源()(3)分解尿素的細(xì)菌在分解尿素時(shí)，可以將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使得培養(yǎng)基的酸堿度降低()(4)纖維素是構(gòu)成植物細(xì)胞壁的主要成分，在纖維素酶的作用下，纖維素可以水解成葡萄糖()×√×√專題二-微生物的培養(yǎng)和利用(5)剛果紅可以與纖維素形成透明復(fù)合物，所以可以通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌()(6)在篩選能分解纖維素的細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)中，選擇培養(yǎng)的目的是增大樣品中目的菌株的濃度()(7)剛果紅染色法只能在培養(yǎng)微生物的時(shí)候加入剛果紅()×√×專題二-微生物的培養(yǎng)和利用2．(2016·廣州質(zhì)檢)利用農(nóng)作物秸稈為原料可生產(chǎn)乙醇，生產(chǎn)過(guò)程中可采用微生物將秸稈水解或用酶水解，其主要技術(shù)流程如下圖所示，下列相關(guān)說(shuō)法錯(cuò)誤的是秸稈碎屑①,反應(yīng)罐水解②,過(guò)濾出渣③,酒精發(fā)酵④,真空分餾A．可用剛果紅染色法篩選過(guò)程①所需的纖維素分解菌B．過(guò)程①加入的是葡萄糖苷酶C．酒精發(fā)酵接種的酵母菌需在無(wú)氧條件下發(fā)酵D．酒精發(fā)酵前需對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌專題二-微生物的培養(yǎng)和利用解析

篩選纖維素分解菌可采用剛果紅染色法；纖維素酶為復(fù)合酶，至少包含三種組分，C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶；酒精發(fā)酵需在無(wú)氧條件下進(jìn)行；酒精發(fā)酵前需對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。答案

B專題二-微生物的培養(yǎng)和利用1．篩選菌株的原則是：人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件(包括________________________等)，同時(shí)______________________其他微生物的生長(zhǎng)。2．探究菌株篩選原理的不同點(diǎn)營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH抑制或阻止土壤中分解尿素的細(xì)菌分解纖維素的微生物①選擇培養(yǎng)基的成分：______作為唯一的氮源②鑒定方法：在培養(yǎng)基中加入____指示劑，若指示劑____，pH升高，說(shuō)明細(xì)菌能分解尿素①選擇培養(yǎng)基的成分：_______作為唯一的碳源②鑒定方法：剛果紅染色法，即剛果紅與纖維素形成____________，當(dāng)纖維素被分解后，培養(yǎng)基出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈尿素酚紅變紅纖維素紅色復(fù)合物專題二-微生物的培養(yǎng)和利用3.在微生物的篩選與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)中，設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)的目的是：排除實(shí)驗(yàn)組中___________因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。4．怎樣設(shè)置證明培養(yǎng)基未被污染的對(duì)照？提示用空白培養(yǎng)基作對(duì)照。5．怎樣設(shè)置證明選擇培養(yǎng)基選擇作用的對(duì)照？提示用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基接種等量同種菌液作對(duì)照。非測(cè)試專題二-微生物的培養(yǎng)和利用【易錯(cuò)警示】

(1)為了使結(jié)果接近真實(shí)值，應(yīng)設(shè)置三個(gè)或三個(gè)以上的平板，計(jì)算出菌落平均數(shù)。(2)計(jì)算時(shí)明顯偏離實(shí)際值(本組實(shí)驗(yàn)其他平板計(jì)數(shù)值)的要舍棄掉后求平均值。(3)對(duì)照實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)首先要明確設(shè)計(jì)的目的，分析出實(shí)驗(yàn)的自變量之后才能準(zhǔn)確設(shè)計(jì)。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用1．幽門(mén)螺桿菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病因素。在患者體內(nèi)采集樣本并制成菌液后，進(jìn)行分離培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)基本步驟如下：請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題。(1)在配制培養(yǎng)基時(shí)，要加入尿素和酚紅指示劑，這是因?yàn)镠p含有________________，它能以尿素作為氮源；若有Hp，則菌落周圍會(huì)出現(xiàn)________________色環(huán)帶。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用(2)下列對(duì)尿素溶液進(jìn)行滅菌的最適方法是__________滅菌。A．高壓蒸汽B．紫外燈照射C．體積分?jǐn)?shù)為70%酒精浸泡D．過(guò)濾(3)步驟X表示________________。在無(wú)菌條件下操作時(shí)，先將菌液稀釋，然后將菌液________________到培養(yǎng)基平面上。菌液稀釋的目的是為了獲得________________菌落。(4)在培養(yǎng)時(shí)，需將培養(yǎng)皿倒置并放在________中。若不倒置培養(yǎng)，將導(dǎo)致________________。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用(5)臨床上用14C呼氣試驗(yàn)檢測(cè)人體是否感染Hp，其基本原理是Hp能將14C標(biāo)記的________________分解為NH3和14CO2。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用解析

(1)幽門(mén)螺桿菌(Hp)含有脲酶，能以尿素為氮源，在加入尿素和酚紅指示劑的培養(yǎng)基中培養(yǎng)Hp，由于尿素經(jīng)脲酶的降解可產(chǎn)生堿性的NH3，NH3能使培養(yǎng)基中的酚紅由紅黃色變成紅色，故菌落周圍會(huì)出現(xiàn)紅色環(huán)帶。(2)由于尿素加熱會(huì)分解，對(duì)尿素溶液進(jìn)行滅菌最好用G6玻璃砂漏斗過(guò)濾。(3)微生物的分離和培養(yǎng)步驟是：配制培養(yǎng)基→滅菌、倒平板→接種→培養(yǎng)。為獲得單菌落，接種操作前應(yīng)先將菌液稀釋，然后將菌液涂布到培養(yǎng)基平面上即可。

專題二-微生物的培養(yǎng)和利用(4)微生物培養(yǎng)時(shí)需將培養(yǎng)皿倒置并放在恒溫培養(yǎng)箱中，若不倒置培養(yǎng)，則無(wú)法形成單菌落。(5)幽門(mén)螺桿菌能將14C標(biāo)記的尿素分解為NH3和14CO2，故臨床上常用14C呼氣試驗(yàn)檢測(cè)人體內(nèi)幽門(mén)螺桿菌的存在。答案

(1)脲酶紅(2)D

(3)接種涂布單(4)恒溫培養(yǎng)箱無(wú)法形成單菌落(5)尿素專題二-微生物的培養(yǎng)和利用2．(2014·全國(guó)課標(biāo)Ⅰ)植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解?；卮鹣铝袉?wèn)題。(1)分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶是由3種組分組成的復(fù)合酶，其中的葡萄糖苷酶可將________________分解成________________。(2)在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅(CR)時(shí)，CR可與纖維素形成________________色復(fù)合物。用含有CR的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時(shí)，培養(yǎng)基上會(huì)出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的________________。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用(3)為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學(xué)設(shè)計(jì)了甲、乙兩種培養(yǎng)基(成分見(jiàn)下表)：酵母膏無(wú)機(jī)鹽淀粉纖維素粉瓊脂CR溶液水培養(yǎng)基甲＋＋＋＋－＋＋培養(yǎng)基乙＋＋＋－＋＋＋注“＋”表示有，“－”表示無(wú)。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲________________(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是________________；培養(yǎng)基乙________________(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是_______________________________________________________________________________________。答案

(1)纖維二糖葡萄糖(2)紅透明圈(3)不能液體培養(yǎng)基不能用于分離單菌落不能培養(yǎng)基中沒(méi)有纖維素，不會(huì)形成CR-纖維素紅色復(fù)合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌專題二-微生物的培養(yǎng)和利用3．自然界中的微生物往往是混雜生長(zhǎng)的。人們?cè)谘芯课⑸飼r(shí)一般要將它們分離提純，然后進(jìn)行數(shù)量的測(cè)定。下面是對(duì)大腸桿菌進(jìn)行數(shù)量測(cè)定的實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)回答有關(guān)問(wèn)題。實(shí)驗(yàn)步驟：(1)制備稀釋倍數(shù)為102、103、104、105、106的系列稀釋液。(2)為了得到更加準(zhǔn)確的結(jié)果，你選用________________法接種樣品。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用(3)適宜溫度下培養(yǎng)。結(jié)果分析：(1)測(cè)定大腸桿菌數(shù)時(shí)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確可信的是________________，其理由是_________________________________________________________。A．一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230B．兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是220和260，取平均值240C．三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、50和520，取平均值260D．四個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、300、240和250，取平均值250專題二-微生物的培養(yǎng)和利用(2)一同學(xué)在稀釋倍數(shù)為105的培養(yǎng)基中測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均值為234，那么每毫升樣品中的菌落數(shù)是________________(涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.1mL)。(3)用這種方法測(cè)定的大腸桿菌密度，實(shí)際活菌數(shù)量要比測(cè)得的數(shù)量________________，因?yàn)開(kāi)______________________________________________________________________________________________________________。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用解析

實(shí)驗(yàn)步驟：為了得到更加準(zhǔn)確的結(jié)果，應(yīng)用稀釋涂布平板法接種樣品。結(jié)果分析：(1)選取多個(gè)菌落數(shù)相差不大的平板計(jì)數(shù)，取其平均值。(2)234÷0.1×105＝2.34×108。(3)因?yàn)榫淇赡苡蓛蓚€(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起生長(zhǎng)而成，所以實(shí)際活菌數(shù)量要比測(cè)得的數(shù)量多。

專題二-微生物的培養(yǎng)和利用答案實(shí)驗(yàn)步驟：(2)稀釋涂布平板結(jié)果分析：(1)D在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要涂布至少三個(gè)平板作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性；在分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，要考慮所設(shè)置的重復(fù)組的結(jié)果是否合理(2)2.34×108

(3)多當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落專題二-微生物的培養(yǎng)和利用【技法提煉】統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法(1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法①原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量。②方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。③缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。(2)間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用②計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝(C÷V)×M，其中，C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。③操作：設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。同時(shí)為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用課堂歸納·要點(diǎn)速記網(wǎng)控全局專題二-微生物的培養(yǎng)和利用規(guī)范術(shù)語(yǔ)1.無(wú)菌操作技術(shù)包括消毒和滅菌，消毒包括煮沸消毒、巴氏消毒、化學(xué)藥劑消毒和紫外線消毒等；滅菌包括灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌。2.培養(yǎng)基的制備包括計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板等步驟，倒置平板的目的是防止培養(yǎng)皿蓋上的水滴滴入培養(yǎng)基造成污染。3.大腸桿菌的純化包括平板劃線法和稀釋涂布平板法。平板劃線法要求多次劃線，稀釋涂布平板法要求菌液要充分地稀釋。4.微生物的計(jì)數(shù)要求制作多個(gè)平板，且每個(gè)平板上能長(zhǎng)出30～300個(gè)菌落。5.尿素分解菌和纖維素分解菌的分離都運(yùn)用了選擇培養(yǎng)基，前者所用的培養(yǎng)基中尿素是唯一的氮源，后者所用的培養(yǎng)基中纖維素是唯一的碳源。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用1．(2015·課標(biāo)Ⅰ)已知微生物A可以產(chǎn)生油脂，微生物B可以產(chǎn)生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生產(chǎn)?；卮鹩嘘P(guān)問(wèn)題：(1)顯微觀察時(shí)，微生物A菌體中的油脂通?？捎糜赺___________染色。微生物A產(chǎn)生的油脂不易揮發(fā)，可選用__________(填“萃取法”或“水蒸氣蒸餾法”)從菌體中提取。［真題集訓(xùn)］高效訓(xùn)練·能力提升專題二-微生物的培養(yǎng)和利用(2)為了從自然界中獲得能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B的單菌落，可從含有油料作物種子腐爛物的土壤中取樣，并應(yīng)選用以________為碳源的固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。(3)若要測(cè)定培養(yǎng)液中微生物B的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用________直接計(jì)數(shù)；若要測(cè)定其活菌數(shù)量，可選用________法進(jìn)行計(jì)數(shù)。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用(4)為了確定微生物B產(chǎn)生的脂肪酶的最適溫度，某同學(xué)測(cè)得相同時(shí)間內(nèi)，在35℃、40℃、45℃溫度下降解10g油脂所需酶量依次為4mg、1mg、6mg，則上述三個(gè)溫度中，______℃條件下該酶活力最小。為了進(jìn)一步確定該酶的最適溫度，應(yīng)圍繞________℃設(shè)計(jì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用解析

本題主要考查了植物油脂的染色和提取方法、選擇培養(yǎng)基的配制、微生物的計(jì)數(shù)以及確定酶的最適溫度的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)等。(1)脂肪可用蘇丹Ⅲ染液(或蘇丹Ⅳ染液)進(jìn)行染色。微生物A產(chǎn)生的油脂不易揮發(fā)，不能用水蒸氣蒸餾法提取，應(yīng)用萃取法加以提取。(2)能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B可存在于含有油料作物種子的腐爛物的土壤中，為了選擇培養(yǎng)，固體培養(yǎng)基上應(yīng)以油脂作為唯一碳源。(3)測(cè)定培養(yǎng)液中的微生物的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù)；而要測(cè)定活菌數(shù)。則可利用稀釋涂布平板法進(jìn)行計(jì)數(shù)。

專題二-微生物的培養(yǎng)和利用(4)酶量需要最多的溫度下，其酶活力最小，即酶活力最小的溫度應(yīng)為45℃。三個(gè)溫度下酶活力最大的溫度是40℃，但40℃不一定是該酶的最適溫度，故應(yīng)圍繞40℃設(shè)計(jì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)。答案

(1)蘇丹Ⅲ(或者蘇丹Ⅳ)萃取法(2)油脂(3)血細(xì)胞計(jì)數(shù)板稀釋涂布平板(4)45

40專題二-微生物的培養(yǎng)和利用2．(2015·江蘇單科)人工瘤胃模仿了牛羊等反芻動(dòng)物的胃，可用來(lái)發(fā)酵處理秸稈，提高秸稈的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。為了增強(qiáng)發(fā)酵效果，研究人員從牛胃中篩選纖維素酶高產(chǎn)菌株，并對(duì)其降解纖維素能力進(jìn)行了研究。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)在樣品稀釋和涂布平板步驟中，下列選項(xiàng)不需要的是________________(填序號(hào))。①酒精燈②培養(yǎng)皿③顯微鏡④無(wú)菌水專題二-微生物的培養(yǎng)和利用(2)在涂布平板時(shí)，滴加到培養(yǎng)基表面的菌懸液量不宜過(guò)多的原因是______________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)向試管內(nèi)分裝含瓊脂的培養(yǎng)基時(shí)，若試管口粘附有培養(yǎng)基，需要用酒精棉球擦凈的原因是______________________________________________________________________

。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用(4)剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，但并不與纖維素降解產(chǎn)物纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。研究人員在剛果紅培養(yǎng)基平板上，篩到了幾株有透明降解圈的菌落(見(jiàn)圖)。圖中降解圈大小與纖維素酶的________________有關(guān)。圖中降解纖維素能力最強(qiáng)的菌株是________________(填圖中序號(hào))。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用(5)研究人員用篩選到的纖維素酶高產(chǎn)菌株Jl和J4，在不同溫度和pH條件下進(jìn)行發(fā)酵，測(cè)得發(fā)酵液中酶活性的結(jié)果見(jiàn)下圖，推測(cè)菌株________________更適合用于人工瘤胃發(fā)酵，理由是______________________________________________________________________。專題二-微生物的培養(yǎng)和利用專題二-微生物的培養(yǎng)和利用解析

本題考查微生物培養(yǎng)與分離的相關(guān)知識(shí)。(1)樣品稀釋需用無(wú)菌水，在培養(yǎng)基中涂布接種時(shí)需在酒精燈的火焰旁進(jìn)行。(2)涂布平板時(shí)，滴加到培養(yǎng)基表面的菌液一般為0.1mL，量過(guò)大將導(dǎo)致菌體密度過(guò)大而影響分離效果。(3)分裝含瓊脂的培養(yǎng)基時(shí)，試管口粘有培養(yǎng)基易造成雜菌滋生，故應(yīng)用酒精棉球擦凈。(4)纖維素酶活性越大，菌落周圍被分解的纖維素量也越大，菌落周圍的透明圈也就越大。故圖中降解纖維素能力最強(qiáng)的