DB54T-青稞中恩鐮孢毒素檢測(cè)技術(shù)規(guī)范

Q/LB.□XXXXX-XXXX目次TOC\o"1-1"\h\t"標(biāo)準(zhǔn)文件_一級(jí)條標(biāo)題,2,標(biāo)準(zhǔn)文件_附錄一級(jí)條標(biāo)題,2,"1范圍 12規(guī)范性引用文件 13方法提要 14試劑和材料 15儀器和設(shè)備 26試樣制備與保存 27測(cè)定步驟 28回收率和精密度 3附錄A（資料性）標(biāo)準(zhǔn)品基本信息 5附錄B（資料性）參考質(zhì)譜條件 6附錄C（資料性）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)色譜圖 7前言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由西藏自治區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：本文件主要起草人：青稞中恩鐮孢毒素檢測(cè)技術(shù)規(guī)范范圍本文件規(guī)定了青稞中恩鐮孢毒素殘留量的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜檢測(cè)方法的方法提要、試劑和材料、儀器和設(shè)備、試樣制備與保存、測(cè)定步驟、回收率和精密度。本文件適用于青稞中恩鐮孢毒素A、恩鐮孢毒素A1、恩鐮孢毒素B、恩鐮孢毒素B1殘留量的測(cè)定和確證。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法方法提要試樣中的恩鐮孢毒素A、恩鐮孢毒素A1、恩鐮孢毒素B、恩鐮孢毒素B1通過(guò)乙腈-水-甲酸提取，經(jīng)QuEChERS提取包凈化后，采用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀檢測(cè)，外標(biāo)法定量。試劑和材料所有試劑除特殊注明外，均為分析純，水應(yīng)符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水要求。乙腈、甲酸、甲醇：色譜純乙腈-水-甲酸溶液：量取19.9mL水和0.1mL甲酸（5.2），加入80mL乙腈，混合均勻。甲酸-水溶液：量取99.5mL水和0.5mL甲酸（5.2），混合均勻。標(biāo)準(zhǔn)品：恩鐮孢毒素A純度≧98.0%、恩鐮孢毒素A1純度≧98.0%、恩鐮孢毒素B純度≧98.0%；恩鐮孢毒素B1純度≧98.0%)標(biāo)準(zhǔn)品也可使用經(jīng)國(guó)家認(rèn)定的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。)。標(biāo)準(zhǔn)品信息參見(jiàn)附錄A)標(biāo)準(zhǔn)品也可使用經(jīng)國(guó)家認(rèn)定的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。標(biāo)準(zhǔn)溶液配置標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：分別稱取一定量的恩鐮孢毒素A、恩鐮孢毒素A1、恩鐮孢毒素B、恩鐮孢毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品（5.6），用乙腈溶解，配成0.5mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于-18℃以下避光保存。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：濃度分別為：恩鐮孢毒素A1.0μg/mL，恩鐮孢毒素A11.0μg/mL，恩鐮孢毒素B1.0μg/mL，恩鐮孢毒素B11.0μg/mL，于-18℃以下避光保存，保存時(shí)間不超過(guò)6個(gè)月?；|(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：移取不同體積的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，用空白樣品提取液配成不同濃度的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液?，F(xiàn)用現(xiàn)配。QuEChERS提取包：含有無(wú)水硫酸鎂4.0g、氯化鈉1.0g、檸檬酸鈉1.0g、檸檬酸二鈉鹽0.5g。儀器和設(shè)備液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀：配電噴霧離子源（ESI）。電子天平：感量0.1mg和0.01g。粉碎機(jī)。渦旋振蕩器。氮吹儀。高速離心機(jī)：10000r/min。離心管：5mL和50mL。試樣制備與保存取青稞樣品500g，用粉碎機(jī)粉碎并通過(guò)2.0mm圓孔篩，混勻，裝入潔凈容器內(nèi)，密閉并標(biāo)明標(biāo)記。試樣于4℃以下保存。測(cè)定步驟提取與凈化稱取2g試樣（精確至±0.01g）于50mL離心管中，加入20mL乙腈-水-甲酸溶液（5.4），以2500r/min震蕩混勻5min。加入QuEChERS提取包（5.11），以2500r/min震蕩混勻2min，10000r/min離心5min。取2mL上清液于5mL離心管中，于45℃氮吹至干，加入1mL乙腈-水-甲酸溶液（5.5）溶解，過(guò)0.22μm微孔濾膜后，供液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測(cè)定。測(cè)定條件液相色譜條件液相色譜條件如下：a)色譜柱：C18柱，柱長(zhǎng)100mm，內(nèi)徑2.1mm，粒徑2.6μm，或性能相當(dāng)者。b)流速：0.4mL/minc)柱溫：40℃d)進(jìn)樣量：2μLe)流動(dòng)相：A：甲酸-水（含0.5%甲酸）；流動(dòng)相B：色譜純甲醇。梯度洗脫條件見(jiàn)表1。梯度洗脫條件時(shí)間，min流動(dòng)相A，%流動(dòng)相B，%0.070300.0170305.050506.050507.0703010.07030質(zhì)譜參考條件質(zhì)譜參考條件如下：a)離子源：電噴霧離子源；b)掃描方式：正離子掃描；c)檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；d)其他參考質(zhì)譜條件參見(jiàn)附錄B。定性測(cè)定在相同試驗(yàn)條件下，試樣溶液中待測(cè)物的保留時(shí)間與基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中對(duì)應(yīng)待測(cè)物的保留時(shí)間偏差應(yīng)在±2.5%之內(nèi)，且試樣溶液中待測(cè)物的定性例子相對(duì)豐度與濃度接近的混合級(jí)配匹配標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中對(duì)應(yīng)待測(cè)物的定性例子的相對(duì)豐度相比較，若偏差不超過(guò)表2規(guī)定的范圍，則可判定樣品中存在對(duì)應(yīng)的待測(cè)物。定性測(cè)定時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差單位為百分號(hào)相對(duì)離子豐度>50>20~50>10~20≦10最大允許偏差±20±25±30±50定量測(cè)定根據(jù)樣液中被測(cè)化合物含量情況，選定與樣液濃度相近的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，樣品溶液與基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中恩鐮孢毒素A、恩鐮孢毒素A1、恩鐮孢毒素B、恩鐮孢毒素B1的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器測(cè)定的線性范圍內(nèi)，超過(guò)線性范圍的稀釋后再進(jìn)樣。對(duì)基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣液等體積參差進(jìn)樣測(cè)定，外標(biāo)法定量。在上述色譜條件和質(zhì)譜條件下，恩鐮孢毒素A、恩鐮孢毒素A1、恩鐮孢毒素B、恩鐮孢毒素B1的參考保留時(shí)間及標(biāo)準(zhǔn)品多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）色譜圖參加圖C.1、圖C.2、圖C.3和圖C.4?？瞻自囼?yàn)除不稱取試樣外，均按上述測(cè)定步驟同時(shí)開(kāi)展。結(jié)果計(jì)算和表述采用外標(biāo)法定量，用色譜處理器或按式（1）計(jì)算被測(cè)物的含量。計(jì)算結(jié)果應(yīng)扣除空白值。Xi=Ci×式中：Xi—試樣中被測(cè)組分殘留量，單位為微克每千克（μg/kg）；ci—從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到的被測(cè)組分溶液濃度，單位為微克每升（μg/L）;V—樣液最終定容體積，單位為毫升（mL）;f—稀釋因子；mi—最終樣液所代表的試樣量，單位為克（g）。試樣中測(cè)定的恩鐮孢毒素乘以換算系數(shù)2.5，即得恩鐮孢毒素的含量。以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留3位有效數(shù)字。回收率和精密度回收率樣品的添加濃度及回收率的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。樣品添加濃度及回收率實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)化合物添加濃度，μg/kg回收率，%恩鐮孢毒素A574.1-82.41078.4-81.25075.3-79.2恩鐮孢毒素A1585.1-90.31080.3-86.95078.6-80.8恩鐮孢毒素B576.1-78.61086.6-91.45087.5-89.3恩鐮孢毒素B1583.3-86.71084.9-92.15082.4-86.4精密度在重復(fù)性條件下，獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)這兩個(gè)測(cè)定值算術(shù)平均值的15%。

（資料性）

標(biāo)準(zhǔn)品基本信息標(biāo)準(zhǔn)品基本信息中文名稱英文名稱CAS號(hào)分子式相對(duì)分子質(zhì)量恩鐮孢毒素AEnniatinA2503-13-1C36H63N3O9681.9恩鐮孢毒素A1EnniatinA14530-21-6C35H61N3O9667.8恩鐮孢毒素BEnniatinB917-13-5C33H57N3O9639.8恩鐮孢毒素B1EnniatinB119914-20-6C34H59N3O9653.8

（資料性）

參考質(zhì)譜條件氣簾氣壓力（CUR）：30psi（氮?dú)猓ｋ妵婌F電壓（IS）：5500V。離子源溫度（TEM）：600℃。離子源氣體1（GAS1）：55psi（氮?dú)猓ｋx子源氣體2（GAS2）：60psi（氮?dú)猓?。其他質(zhì)譜參數(shù)：見(jiàn)表B.1。主要參考質(zhì)譜參數(shù)化合物母離子m/z子離子m/z駐留時(shí)間minDPCXPCE/eV恩鐮孢毒素A682.60210.3*101001040228.3101001040恩鐮孢毒素A1668.60210.4*10841038228.110841038恩鐮孢毒素B640.60196.1*10901038214.010901038恩鐮孢毒素B1654.50196.1*10881040210.310881040注：表中帶*的離子為定量離子。對(duì)于不同的質(zhì)譜儀器，儀器參數(shù)可能存在差異，測(cè)定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。

（資料性）

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)色譜圖恩鐮孢毒素A的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）色譜圖見(jiàn)C.1。恩鐮孢毒素A的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）色譜圖（5