水質(zhì) 16種磺胺類(lèi)抗生素的測(cè)定 固相萃取-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

ICS13.020.40CCSZ10XXT/XXXX—XXXXFORMTEXT?????水質(zhì)16種磺胺類(lèi)抗生素的測(cè)定固相萃取-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法Waterquality-Determinationof16sulfonamideantibiotics-Solidphaseextraction-Highperformanceliquidchromatography-TandemmassspectrometryFORMTEXT?????XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施新疆維吾爾自治區(qū)生態(tài)環(huán)境保護(hù)產(chǎn)業(yè)協(xié)會(huì)發(fā)布FORMTEXT?????XXXXX-XXXX水質(zhì)16種磺胺類(lèi)抗生素的測(cè)定固相萃取-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法警告：實(shí)驗(yàn)中使用的部分溶劑及標(biāo)準(zhǔn)品具有一定的毒性，試劑配制和樣品前處理應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，操作時(shí)應(yīng)按規(guī)定要求佩戴防護(hù)器具，避免接觸皮膚和衣物。適用范圍本文件規(guī)定了測(cè)定水中16種磺胺類(lèi)抗生素的固相萃取-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。本文件適用于地表水和城市污水處理廠廢水中磺胺醋酰、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲嘧啶、磺胺甲二唑、甲氧芐啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲氧噠嗪、磺胺甲噁唑、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺對(duì)甲氧嘧啶、磺胺鄰二甲嘧啶、磺胺異噁唑、磺胺苯酰、磺胺間二甲氧嘧啶等16種磺胺類(lèi)抗生素類(lèi)化合物的測(cè)定。規(guī)范性引用文件本文件引用了下列文件或其中的條款。凡是注明日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是未注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法HJ91.2-2022地表水環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范HJ91.1-2019污水監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范方法原理樣品過(guò)濾后經(jīng)固相萃取柱富集和凈化后進(jìn)樣，用固相萃取-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分離檢測(cè)磺胺類(lèi)抗生素。根據(jù)保留時(shí)間和特征離子定性，內(nèi)標(biāo)法定量。干擾和消除當(dāng)樣品中存在基質(zhì)干擾時(shí)，可通過(guò)優(yōu)化色譜條件、稀釋樣品、減少進(jìn)樣體積以及對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理等方式降低或消除。采用固相萃取法時(shí)，還可以通過(guò)減少取樣體積或增加試樣的稀釋倍數(shù)降低基質(zhì)干擾。當(dāng)樣品中存在同分異構(gòu)體干擾測(cè)定時(shí)，可通過(guò)改變色譜條件提高分離度或選擇不同的二級(jí)質(zhì)譜子離子消除干擾。試劑和材料除非另有說(shuō)明，分析時(shí)均使用符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的分析純?cè)噭?，?shí)驗(yàn)用水為新制備的不含目標(biāo)化合物的純水。甲醇（CH3OH）：色譜純。乙腈（CH3CN）：色譜純。氨水（NH3·H20）：色譜純。甲酸（CH3COOH）：色譜純。磷酸（H3PO4）：分析純。EDTA·Na2：分析純。磷酸二氫鈉（NaH2PO4）：分析純?；前奉?lèi)抗生素標(biāo)準(zhǔn)品：純度不低于99.0%?；前芳讎f唑-d4標(biāo)準(zhǔn)品：純度不低于99.0%。磷酸溶液：1+9。用磷酸（5.5）和水按1:1的體積比混合。EDTA·Na2溶液：ρ=100mg/L。稱(chēng)取0.05gEDTA·Na2（5.6）溶于少量水中，定容至500mL，混勻。磷酸二氫鈉溶液：ρ=100g/L。稱(chēng)取50gNaH2PO4（5.7）溶于少量水中，定容至500mL，混勻。氨水-甲醇混合溶液：φ(NH3·H20)=2%。用氨水（5.3）和甲醇（5.1）按2:98的體積比混合。氨水溶液：φ(NH3·H20)=0.2%。用氨水（5.3）和水按0.2:99.8的體積比混合。甲酸水溶液：φ(CH3COOH)=0.2%。用甲酸（5.4）和水按0.2:99.8的體積比混合?？股貥?biāo)準(zhǔn)貯備液：ρ=1000mg/L?；前奉?lèi)抗生素標(biāo)準(zhǔn)品（5.8）用甲醇（5.1）配制成濃度為1000mg/L的磺胺類(lèi)抗生素標(biāo)準(zhǔn)貯備液，保存于棕色樣品瓶中，密封，-10℃以下冷凍避光保存?；騾⒄罩圃焐痰漠a(chǎn)品說(shuō)明保存，使用時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫并搖勻?？股貥?biāo)準(zhǔn)使用液：ρ=20mg/L將抗生素標(biāo)準(zhǔn)貯備液（5.16）按需要用甲醇稀釋。標(biāo)準(zhǔn)使用液于4℃避光保存。使用時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫，并搖勻。存放期限30天。內(nèi)標(biāo)貯備液：ρ=100mg/L。 稱(chēng)取10.0mg磺胺甲噁唑-d4標(biāo)準(zhǔn)品（5.9），用甲醇（5.1）溶解，轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，用甲醇（5.1）定容至標(biāo)線，混勻。分裝于棕色樣品瓶中，密封，?10℃以下冷凍避光保存或參照制造商的產(chǎn)品說(shuō)明保存。也可直接購(gòu)買(mǎi)有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，按標(biāo)準(zhǔn)溶液證書(shū)要求保存。使用時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫，并搖勻。內(nèi)標(biāo)使用液：ρ=0.50mg/L。移取適量?jī)?nèi)標(biāo)貯備液（5.18），用甲醇溶液（5.1）稀釋?zhuān)?℃以下冷藏避光保存或參照制造商的產(chǎn)品說(shuō)明保存。也可直接購(gòu)買(mǎi)有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，按標(biāo)準(zhǔn)溶液證書(shū)要求保存。使用時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫，并搖勻。固相萃取柱：填料為二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物，或同等柱效的萃取柱，規(guī)格為500mg/6mL。濾膜：0.45μm玻璃纖維濾膜。針頭濾膜：0.22μm針頭濾膜。儀器和設(shè)備高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子化源（ESI）。色譜柱：填料粒徑為3.5μm，柱長(zhǎng)150mm，內(nèi)徑2.1mm的C18色譜柱，或其他性能相近的色譜柱。濃縮裝置：氮吹濃縮儀、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀或其他同等性能的設(shè)備。棕色采樣瓶：500mL帶聚四氟乙烯襯墊的螺旋蓋玻璃瓶或具塞磨口瓶棕色樣品瓶：2.0mL帶聚四氟乙烯襯墊的螺旋蓋玻璃瓶。微量注射器：10μl、50μl、100μl、250μl、1.0ml。一般實(shí)驗(yàn)室常用儀器和設(shè)備。樣品樣品采集和保存按照HJ/T91和HJ91.1的相關(guān)要求進(jìn)行樣品的采集。用棕色采樣瓶（6.4）采集樣品，樣品滿(mǎn)瓶采集。樣品采集后應(yīng)于4℃冷藏、避光運(yùn)輸，及時(shí)分析。若不能及時(shí)分析，應(yīng)置于4℃冷藏避光保存，保存期為3d。試樣的制備取0.5-1.0L待測(cè)水樣，經(jīng)濾膜過(guò)濾（5.20）后，加入10.0μl內(nèi)標(biāo)使用液（5.18），添加5mLEDTA·Na2溶液（5.11），再用磷酸溶液（5.10）調(diào)節(jié)待測(cè)水樣pH值至3.0左右，最后以4mL/min的流速通過(guò)固相萃取小柱（5.19）進(jìn)行固相萃取。在固相萃取之前，依次用6mL甲醇、3mL超純水、6mL磷酸二氫鈉溶液（5.12）活化固相小柱；固相萃取完成后，用6mL超純水淋洗，之后棄去淋洗液，將小柱置于負(fù)壓下真空抽30.0min以上，使其干燥。依次使用6mL甲醇、6mL氨水甲醇-混合溶液（5.13）洗脫小柱，洗脫速度為1mL/min。洗脫液經(jīng)濃縮裝置（6.3）濃縮至近干，用甲醇溶劑定容至1mL，過(guò)針頭濾膜（5.21）后取1.0ml濾液于棕色樣品瓶（6.5）中，混勻待測(cè)。空白試樣的制備用實(shí)驗(yàn)用水代替樣品，按照與試樣的制備（7.2）相同的步驟進(jìn)行空白試樣的制備。分析步驟儀器參考條件高效液相色譜參考條件采用正離子模式（ESI+），流動(dòng)相為A：甲酸水溶液（5.15），B：乙腈（5.2），洗脫程序梯度見(jiàn)表1。流速：0.3mL/min，柱溫：40℃，進(jìn)樣體積：5μL。表1流動(dòng)相梯度洗脫程序時(shí)間/min流動(dòng)相A/%B/%09915901022505023406024.599126991質(zhì)譜參考條件離子源采用電噴霧離子源（ESI），掃描方式為正離子模式，監(jiān)測(cè)方式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）。由于測(cè)試結(jié)果受到所用儀器影響，不能給出質(zhì)譜儀普遍參數(shù)。附錄A提供參考質(zhì)譜參數(shù)。儀器調(diào)諧不同廠家的儀器調(diào)諧參數(shù)存在一定差異，應(yīng)按照儀器使用說(shuō)明書(shū)在規(guī)定時(shí)間和頻次內(nèi)對(duì)質(zhì)譜儀進(jìn)行儀器質(zhì)量數(shù)和分辨率的校正，以確保儀器處于最佳測(cè)試狀態(tài)。校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立移取適量的磺胺類(lèi)抗生素標(biāo)準(zhǔn)使用液（5.17），逐級(jí)稀釋?zhuān)渲浦辽?個(gè)濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)系列，各組分質(zhì)量濃度分別為1、2、5、10、20、50、100、200μg/L（此為參考濃度）。移取1.0ml配制好的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液于棕色樣品瓶（6.5）中，加入10.0μl內(nèi)標(biāo)使用液（5.18），混勻待測(cè)。按照儀器參考條件（8.1），由低濃度到高濃度依次對(duì)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液進(jìn)行測(cè)定。以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中目標(biāo)組分的質(zhì)量濃度（μg/L）為橫坐標(biāo)，以其對(duì)應(yīng)的峰面積（或峰高）與內(nèi)標(biāo)物峰面積（或峰高）的比值和內(nèi)標(biāo)物濃度的乘積為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。注：為保證定量統(tǒng)一，標(biāo)準(zhǔn)曲線稀釋時(shí)所使用的溶劑應(yīng)與制備的試樣一致。標(biāo)準(zhǔn)參考譜圖在本文件的儀器參考條件（8.1）下，目標(biāo)化合物（200μg/L）的總離子流圖見(jiàn)附圖B。試樣測(cè)定按照與標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立（8.2.1）相同的儀器條件進(jìn)行試樣（7.2）的測(cè)定?？瞻自囼?yàn)按照與試樣測(cè)定（8.3）相同的儀器條件進(jìn)行空白試樣（7.3）的測(cè)定。結(jié)果計(jì)算與表示定性分析每個(gè)目標(biāo)化合物選擇1個(gè)母離子和2個(gè)子離子進(jìn)行定性分析。在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，試樣中目標(biāo)化合物的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)樣品中該目標(biāo)化合物的保留時(shí)間比較，相對(duì)偏差的絕對(duì)值應(yīng)小于2.5%；樣品譜圖中各目標(biāo)化合物定性離子的相對(duì)離子豐度（Ksam）與濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖中對(duì)應(yīng)的定性離子的相對(duì)離子豐度（Kstd）進(jìn)行比較，偏差不超過(guò)表3規(guī)定的范圍，則可判定為樣品中存在對(duì)應(yīng)的目標(biāo)化合物。定性離子的相對(duì)離子豐度分別按照式（1）、式（2）計(jì)算：Ksam式中：Ksam——樣品中某組分定性離子的相對(duì)離子豐度，%；A2——樣品中某組分定性離子對(duì)的峰面積（或峰高）；A1——樣品中某組分定量離子對(duì)的峰面積（或峰高）。Kstd式中：Kstd——標(biāo)準(zhǔn)樣品中某組分定性離子的相對(duì)離子豐度，%；Astd2——標(biāo)準(zhǔn)樣品中某組分定性離子對(duì)的峰面積（或峰高）；Astd1——標(biāo)準(zhǔn)樣品中某組分定量離子對(duì)的峰面積（或峰高）。表3定性確認(rèn)時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差單位：%標(biāo)準(zhǔn)樣品中某組分定性離子的相對(duì)離子豐度（Kstd）Kstd＞5020＜Kstd≤5010＜Kstd≤20Kstd≤10樣品中某組分定性離子的相對(duì)離子豐度（Ksam）允許的最大偏差±20±25±30±50結(jié)果計(jì)算樣品中目標(biāo)化合物的質(zhì)量濃度，按照式（4）計(jì)算：ρi式中：ρi——樣品中目標(biāo)化合物的質(zhì)量濃度，μg/L；ρ1——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的試樣中目標(biāo)化合物的質(zhì)量濃度，μg/L；V1——試樣體積，ml；V——取樣體積，ml；D——樣品的稀釋倍數(shù)。結(jié)果表示測(cè)定結(jié)果小數(shù)點(diǎn)后位數(shù)的保留與方法檢出限一致，最多保留3位有效數(shù)字。檢出限和定量限方法檢出限和定量限見(jiàn)附錄C。準(zhǔn)確度和精密度在添加濃度10~100ng/L范圍內(nèi)，回收率為61.1%~123.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.1%~12.5%。質(zhì)量保證和質(zhì)量控制空白試驗(yàn)每20個(gè)樣品或每批次（少于20個(gè)樣品）應(yīng)至少做一個(gè)空白試驗(yàn)，測(cè)定結(jié)果應(yīng)低于方法檢出限。校準(zhǔn)分析樣品之前，應(yīng)建立能夠覆蓋樣品濃度范圍的至少5個(gè)濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，曲線的相關(guān)系數(shù)應(yīng)≥0.995。每20個(gè)樣品或每批次（少于20個(gè)樣品）應(yīng)測(cè)定一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線中間濃度點(diǎn)，其測(cè)定結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)曲線該點(diǎn)濃度的相對(duì)誤差應(yīng)在±20%以?xún)?nèi)，否則，應(yīng)建立新的標(biāo)準(zhǔn)曲線。平行樣每20個(gè)樣品或每批次（少于20個(gè)樣品）應(yīng)分析一個(gè)平行樣，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)平行樣的相對(duì)偏差應(yīng)≤20%?；w加標(biāo)每20個(gè)樣品或每批次（少于20個(gè)樣品）應(yīng)進(jìn)行一個(gè)基體加標(biāo)樣的分析，基體加標(biāo)回收率應(yīng)在60%～130%之間。廢物處置實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生的廢物應(yīng)集中收集，并做好相應(yīng)標(biāo)識(shí)，依法委托有資質(zhì)的單位進(jìn)行處理。附錄A（資料性）參考質(zhì)譜條件A.1目標(biāo)化學(xué)物的質(zhì)譜條件毛細(xì)管高壓：4.8kv;去溶劑氣溫度：450oC;霧化氣流速：1.5L/Min;去溶劑氣流速：8L/Min;反吹氣流速：1L/Min。目標(biāo)化學(xué)物的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)條件見(jiàn)表A.1。表A.1目標(biāo)化合物的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)條件抗生素母離子（m/z）子離子（m/z）碰撞能量/V去簇電壓/V入口電壓/V出口電壓/V磺胺醋酰215.1156.0*11505050107.923505050磺胺嘧啶251.0156.0*16505050108.027505050磺胺噻唑255.8156.0*24505050108.035505050磺胺吡啶250.2156.1*24505050184.124505050磺胺甲嘧啶265.0107.9015505050磺胺甲二唑271.1156.2*22505050108.235505050甲氧芐啶291.0230.0*28505050261.026505050磺胺二甲嘧啶278.9186.1*19505050155.918505050磺胺甲氧噠嗪280.9155.9*1750505092.031505050磺胺甲噁唑253.8155.9*23505050108.135505050磺胺間甲氧嘧啶281.0156.1*19505050107.828505050磺胺對(duì)甲氧嘧啶280.9156.1*25505050108.037505050磺胺鄰二甲嘧啶311.1155.9*19505050107.730505050磺胺異噁唑268.1155.9*2250505011324505050磺胺苯酰277.1155.8*20505050108.135505050磺胺間二甲氧嘧啶310.9156.0*32505050108.025505050附錄B（資料性）目標(biāo)化合物的總離子流色譜圖圖B.1目標(biāo)化合物的總離子流色譜圖附錄C（規(guī)范性附錄）方法的檢出限和測(cè)定下限表C.1給出了本方法中16種目標(biāo)化合物的方法檢出限和測(cè)定下限。表C.1方法檢出限和測(cè)定下限抗生素LOQ(ng/L)LOD(ng/L)磺胺醋酰0.4621.540磺胺嘧啶0.0100.034磺胺噻唑0.0450.150磺胺吡啶0.0450.149磺胺甲嘧啶0.0080.028磺胺甲二唑0.0700.234甲氧芐啶0.0010.003磺胺二甲嘧啶0.0120.039磺胺甲氧噠嗪0.0280.095磺胺甲噁唑0.0330.109磺胺間甲氧嘧啶0.0480.1