SN∕T 4848.5-2017 出口蜂蜜中常見蜜源植物成分的檢測方法實時熒光PCR法 第5部分：椴樹_第1頁
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出口蜂蜜中常見蜜源植物成分的檢測方法實時熒光PCR法第5部分：椴樹I 第8部分：紫云英。本部分為SN/T4848的第5部分。1實時熒光PCR法第5部分：椴樹SN/T4848的本部分規(guī)定了出口蜂蜜中椴樹成分的實時熒光PCR檢本部分適用于出口蜂蜜中椴樹成分的定性檢測。本部分所規(guī)定方法的最低檢出限(LOD)為1%GB14963—2011食品安全國家標準蜂蜜GB/T27403—2008實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品分子生物學(xué)檢測2UNG:尿嘧啶N-糖基化酶(uracilN-glycosylase)物種名稱引物/探針序列(5'→3)物種名稱引物/探針序列(5'→3)F:GCTGAAGCAGCTACTTTCGAAR:AGGAGCCGTGTGAGATGAP:FAM-TGGAGTGGGAGAGTCAGAGTCGAAAAGAGP:FAM-AAAGAAGATGCGCCTACAAGACCTGTTGC長度靶基因內(nèi)參照36.4體積分數(shù)為70%的乙醇。6.6蛋白酶K(20mg/mL)。pH=8.0。7.8pH計。48.1.2蜂蜜上清DNA提取于-20℃保存。使用核酸蛋白分析儀或紫外分光光度計分別檢測260nm和280nm處的吸光值A(chǔ)26o和A280。A——260nm處的吸光值；N——核酸稀釋倍數(shù)。8.3實時熒光PCR擴增8.3.1實時熒光PCR反應(yīng)體系實時熒光PCR反應(yīng)體系的反應(yīng)條件見表2。DNA模板(10ng/pL～200ng/pL)無菌ddH?O8.3.2實時熒光PCR反應(yīng)程序內(nèi)參照基因和椴樹nrl基因擴增程序均為：50℃2min;95℃預(yù)變性10min;95℃15s,60℃5b)Ct值≥40,則判定為陰性。c)35<Ct值<40,則重復(fù)實驗一次。如再次擴增后Ct值<40,則判定為陽性；Ct值≥40,則判定檢測過程中防止交叉污染的措施按照GB/T27403-2008中附錄D的規(guī)定執(zhí)行。6GGGCATCGAACATGAGCTTTTTAGCTCCTATTAAAGAAGATGCTGCGCTGGTTCCACGTGAGAAAATCCCATGC沉淀溶液/recipitationSolu注：以Promeg

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