微生物學(xué) 第十八章 支原體

第十八章支原體

Mycoplasma第一節(jié)概述支原體（Mycoplasma）缺乏細(xì)胞壁，呈高度多形性能通過(guò)濾菌器能夠在無(wú)生命培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖的最小原核細(xì)胞型微生物2柔膜體綱支原體目肺炎支原體，人型支原體，生殖支原體，穿透支原體，發(fā)酵支原體，梨支原體等解脲脲原體分類(lèi)支原體科無(wú)膽甾原體科螺原體科支原體屬脲原體屬3形態(tài)染色細(xì)胞個(gè)體小，直徑0.3-0.5mm。無(wú)細(xì)胞壁，只有細(xì)胞膜，呈高度多形性。革蘭氏染色陰性，不易著色。4細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)細(xì)胞膜厚度7.5-10nm，有外、中、內(nèi)三層。內(nèi)外兩層為蛋白質(zhì)及多糖中間層為含膽固醇的脂質(zhì)成分凡能作用于膽固醇的物質(zhì)，如皂素、毛地黃甙、二性霉素B等均能破壞細(xì)胞膜，使支原體死亡。有的支原體有莢膜、特殊的頂端結(jié)構(gòu)等。5特殊的頂端結(jié)構(gòu)肺炎支原體、生殖支原體、穿透支原體等具有特殊的頂端結(jié)構(gòu)，呈燒瓶狀。頂端結(jié)構(gòu)具有黏附于宿主上皮細(xì)胞表面的作用，與支原體的致病性有關(guān)。6培養(yǎng)特性營(yíng)養(yǎng)要求：高于一般細(xì)菌，培養(yǎng)基中需加入血清以提供膽固醇與其它長(zhǎng)鏈脂肪酸，多數(shù)支原體還需添加酵母浸液、組織浸液、核酸提取物和輔酶。pH：適宜pH為7.6-8.0，低于7.0時(shí)易死亡。但解脲脲原體最適pH為6.0-6.5。7培養(yǎng)特性氧氣：兼性厭氧，但大多數(shù)寄生性支原體在37℃時(shí)在微氧環(huán)境（含5%CO2和90%N2）中生長(zhǎng)最佳。繁殖方式：通常以二分裂繁殖，也可以出芽、分枝、斷裂等方式增殖。8菌落形態(tài)支原體生長(zhǎng)緩慢，3-4h繁殖一代。在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)48-96h形成菌落。在瓊脂含量較少的固體培養(yǎng)基上，2-7天后形成“荷包蛋”樣菌落（“friedegg”colony）。菌落中心致密隆起，深入瓊脂，周邊為較薄的透明顆粒區(qū)。9支原體典型菌落10液體培養(yǎng)基：清亮，用顏色變化單位（CCU）表示。肺炎支原體培養(yǎng)結(jié)果1.培養(yǎng)基對(duì)照；2~5.肺炎支原體培養(yǎng)第2～5天1234511支原體與細(xì)菌L型支原體有許多特性與細(xì)菌L型相似

無(wú)細(xì)胞壁，呈多形性能通過(guò)濾菌器對(duì)青霉素不敏感，對(duì)低滲敏感“荷包蛋”樣菌落臨床表現(xiàn)相似，為間質(zhì)性肺炎等。12支原體與細(xì)菌L型的區(qū)別支原體細(xì)菌L型非細(xì)菌與原菌相關(guān)，可以回復(fù)細(xì)胞膜含高濃度膽固醇細(xì)胞膜不含膽固醇培養(yǎng)時(shí)需要膽固醇大多需要高滲培養(yǎng)生長(zhǎng)慢，菌落小菌落稍大液體培養(yǎng)混濁度極低有一定混濁度，可黏附于管底或管壁13生化反應(yīng)支原體葡萄糖精氨酸尿素吸附細(xì)胞致病性肺炎支原體+--紅細(xì)胞肺炎、支氣管炎人型支原體-+--泌尿生殖道感染生殖支原體+---泌尿生殖道感染穿透支原體++-紅細(xì)胞CD4+T細(xì)胞巨噬細(xì)胞條件感染多見(jiàn)于艾滋病解脲脲原體--+-泌尿生殖道感染流產(chǎn)及不孕不育14抗原結(jié)構(gòu)支原體抗原結(jié)構(gòu)主要來(lái)自細(xì)胞膜，由蛋白質(zhì)和糖脂組成。不同支原體均有其特有的抗原結(jié)構(gòu)，交叉較少，在鑒定支原體時(shí)有重要意義。15抗原結(jié)構(gòu)

補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)可檢測(cè)糖脂類(lèi)抗原

ELISA試驗(yàn)可檢測(cè)蛋白質(zhì)類(lèi)抗原

血清抗體鑒定：

生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)（growth

inhibitiontest,GIT）

代謝抑制試驗(yàn)（metabolicinhibitiontest,MIT）

16抵抗力抵抗力比細(xì)菌弱，易被脂溶劑及常用消毒劑殺滅，對(duì)紫外線、低滲、干燥及熱敏感。對(duì)醋酸鉈、結(jié)晶紫和亞碲酸鉀抵抗力強(qiáng)。對(duì)影響細(xì)胞壁合成的抗生素不敏感。對(duì)干擾蛋白質(zhì)合成的抗生素和阻礙DNA復(fù)制的藥物敏感。17致病性黏附素、莢膜、毒性代謝產(chǎn)物、超抗原、其他：如穿透支原體黏附侵入CD4＋T細(xì)胞引起損傷。支原體主要寄生于細(xì)胞外，一般為表面感染，大多不侵入血液及組織細(xì)胞內(nèi)。致病物質(zhì):18

固有免疫適應(yīng)性免疫體液免疫：抗膜蛋白的抗體包括IgM、IgG和SIgA。細(xì)胞免疫：主要是特異性CD4＋Th1

細(xì)胞分泌細(xì)胞因子。免疫性以體液免疫為主，細(xì)胞免疫也起作用。19第二節(jié)主要病原性支原體肺炎支原體MycoplasmaPneumoniae解脲脲原體UreaplasmaUrealyticum穿透支原體MycoplasmaPenetrans20肺炎支原體菌體大小為0.2-0.3mm，呈短細(xì)絲狀具有特殊的頂端結(jié)構(gòu)。位于該結(jié)構(gòu)表面的P1蛋白，是肺炎支原體與宿主細(xì)胞膜受體結(jié)合的部位。P1表面蛋白（170kDa）和P30（32kDa）為主要的黏附蛋白。21肺炎支原體22生物學(xué)特性初次分離應(yīng)在含血清和新鮮酵母浸出液的培養(yǎng)基中，一般10天左右長(zhǎng)出菌落，多次傳代后生長(zhǎng)加快。產(chǎn)生過(guò)氧化氫和溶血素。能發(fā)酵葡萄糖，不分解精氨酸與尿素。23致病性與免疫性主要侵犯呼吸系統(tǒng)傳播途徑：通過(guò)飛沫傳播夏末秋初為多發(fā)季節(jié)，以5-20歲青少年發(fā)病率最高。流行特點(diǎn)為間歇性。每4-6年出現(xiàn)地區(qū)性流行，流行持續(xù)數(shù)月至一年。24所致疾病引起的病理改變以間質(zhì)性肺炎及急性細(xì)支氣管炎為主，又稱原發(fā)性非典型性肺炎（primaryatypicalpneumonia）。臨床以咳嗽、發(fā)熱、頭痛、咽痛和肌肉痛為主。有時(shí)有呼吸道外并發(fā)癥，如皮疹、心血管和神經(jīng)系統(tǒng)癥狀。25免疫性

血清特異性IgM、IgG及SIgA和致敏的淋巴細(xì)胞；

呼吸道局部黏膜產(chǎn)生的SIgA對(duì)防止再感染有較強(qiáng)

保護(hù)作用；出現(xiàn)IgE介導(dǎo)的I型超敏反應(yīng)，促使哮喘病急性發(fā)作。

致病性與免疫性26血清學(xué)檢查冷凝集試驗(yàn)用病人血清與人O型血紅細(xì)胞或自身紅細(xì)胞混合，4℃過(guò)夜時(shí)可發(fā)生凝集，而在37℃時(shí)凝集又分散解離開(kāi)，但僅50％左右的患者才出現(xiàn)陽(yáng)性。此反應(yīng)為非特異性。快速診斷ELISA：檢測(cè)P1和P30蛋白mAbs。PCR：從痰標(biāo)本中檢測(cè)16SrRNA或P1蛋白基因。27微生物學(xué)檢查PCR分離培養(yǎng)

37℃，1-2周典型菌落鑒定生化反應(yīng)形態(tài)染色GIT,MIT標(biāo)本DNA測(cè)序ELISA快速、特異、敏感28防治原則疫苗的預(yù)防效果尚無(wú)定論。治療首選大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素。青霉素類(lèi)及頭孢類(lèi)抗生素?zé)o效。29

人型支原體（一）生物學(xué)性狀分解精氨酸。最適pH7.2～7.4；

固體培養(yǎng)基上形成200～300

μm的菌落，呈典型

的“油煎蛋”狀。（二）致病性寄居于泌尿生殖道，通過(guò)性接觸傳播，可引起附睪炎、盆腔炎、產(chǎn)褥熱等；新生兒感染則可引起肺炎、腦炎和腦膿腫。30（三）微生物學(xué)檢查法人型支原體在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)左圖：培養(yǎng)基對(duì)照；右圖：人型支原體分解精氨酸產(chǎn)堿，酚紅指示劑變紅。病原體檢測(cè)液體和固體培養(yǎng)基接種；特異抗血清做GIT與MIT進(jìn)一步鑒定。31核酸檢測(cè)

PCR檢測(cè)：檢測(cè)16S

rRNA基因。此法快速、特異，適宜于大批量標(biāo)本檢測(cè)。32預(yù)防：

加強(qiáng)宣傳教育，注意性衛(wèi)生，切斷傳播途徑。治療：人型支原體對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素不敏感，對(duì)紅霉素（100

mg/L）不敏感；可用四環(huán)素類(lèi)、喹諾酮類(lèi)藥物治療，但有耐藥株產(chǎn)生。（四）防治原則33

生殖支原體生殖支原體基本形態(tài)為燒瓶狀，能發(fā)酵葡萄糖使培養(yǎng)基變酸；培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)，須在無(wú)醋酸鉈SP-4培養(yǎng)基生長(zhǎng)但緩慢，菌落呈典型的“油煎蛋”狀；頂端結(jié)構(gòu)有黏附素MgPa，140

kDa，能黏附在人泌尿生殖道上皮，主要引起尿道炎；較難培養(yǎng)，生長(zhǎng)慢，不適宜于常規(guī)實(shí)驗(yàn)室分離培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)室最好的診斷方法是核酸檢測(cè)。34

穿透支原體1991年Lo首次從1例艾滋病患者尿中分離出一種新支原體，其形態(tài)為桿狀或長(zhǎng)燒瓶狀，一端為頂端結(jié)構(gòu)，具有黏附與穿入的作用。穿透支原體電鏡照片穿透支原體黏附并穿入紅細(xì)胞35穿透支原體發(fā)酵葡萄糖，分解精氨酸，不分解尿素，在SP-4培養(yǎng)基上生長(zhǎng)形成典型的“油煎蛋”狀菌落；頂端結(jié)構(gòu)能黏附于人紅細(xì)胞、單核細(xì)胞、CD4＋T淋巴細(xì)胞及人尿道上皮細(xì)胞，導(dǎo)致宿主細(xì)胞受損或死亡；可能是艾滋病發(fā)病的一個(gè)輔助因素。36解脲脲原體單個(gè)或成雙排列，直徑0.05-0.3mm，絲狀體少見(jiàn)。固體培養(yǎng)基中菌落小，直徑15-60mm。37生物學(xué)特性培養(yǎng)需要膽固醇和酵母浸液。pH要求較低，最適pH為6.0-6.5。具有尿素酶，能分解尿素產(chǎn)生氨和CO2，使培養(yǎng)基pH升高。不分解糖類(lèi)和精氨酸。38致病性傳播途徑：性傳播、垂直傳播。引起非淋菌性尿道炎（non-gonococcalurethritis，NGU）、前列腺炎、附睪炎等泌尿生殖道疾病。還與自然流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎和不孕有關(guān)。39微生物學(xué)檢查PCR液體培養(yǎng)基（含有酚紅和尿素）標(biāo)本典型菌落鑒定生化反應(yīng)GIT，MIT陽(yáng)性（紅色）陰性（黃色）固體培養(yǎng)基

37℃、5%CO2、90%N2D