高中三年級(jí)上學(xué)期生物《目的基因的檢測(cè)和鑒定》教學(xué)課件

基因工程的基本操作流程目的基因的檢測(cè)與鑒定基因工程的基本操作流程目的基因的篩選與獲取基因表達(dá)載體的構(gòu)建將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞目的基因的檢測(cè)與鑒定目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后，是否可以穩(wěn)定維持和表達(dá)其遺傳特性呢？？思考討論：目的基因的檢測(cè)與鑒定的實(shí)驗(yàn)方法DNARNA蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄翻譯中心法則請(qǐng)同學(xué)們根據(jù)中心法則原理，思考：1.如何確定目的基因進(jìn)入了轉(zhuǎn)基因生物受體細(xì)胞并能維持穩(wěn)定？2.如何確定轉(zhuǎn)基因生物細(xì)胞中的目的基因一定能夠進(jìn)行表達(dá)？3.如何確定轉(zhuǎn)基因生物獲得了新的性狀？DNARNA轉(zhuǎn)錄蛋白質(zhì)翻譯思路2：在RNA水平上，檢測(cè)目的基因是否成功轉(zhuǎn)錄；思路1：在DNA水平上，檢測(cè)目的基因是否成功插入；思路3：在蛋白質(zhì)水平上，檢測(cè)目的基因是否成功翻譯；思路4：在性狀水平上，檢測(cè)生物特定性狀是否成功表現(xiàn)。思考討論：目的基因的檢測(cè)與鑒定的實(shí)驗(yàn)方法特定性狀控制1.檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入目的基因

（2）方法：DNA分子雜交DNA探針，是一段帶有檢測(cè)標(biāo)記（同位素、熒光分子或化學(xué)發(fā)光催化劑），且順序已知的，與目的基因能發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)的DNA序列。（1）原理：DNA分子具有特異性DNA探針待測(cè)生物DNA①提取出轉(zhuǎn)基因生物的基因組DNA，并將其切割成小分子DNA片段；②

制作探針，將含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作標(biāo)記；③

使探針和轉(zhuǎn)基因生物的基因組雜交，若顯示出雜交帶，表明基因組中已插入目的DNA。（3）具體過(guò)程:1.檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入目的基因2.檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的目的基因是否成功轉(zhuǎn)錄為RNA

（2）方法：RNA分子雜交RNA探針，是一段帶有檢測(cè)標(biāo)記（同位素、熒光分子或化學(xué)發(fā)光催化劑），且順序已知的，與目的RNA能發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)的RNA序列。（1）原理：RNA分子具有特異性RNA探針待測(cè)生物RNA2.檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的目的基因是否成功轉(zhuǎn)錄為RNA①提取出轉(zhuǎn)基因生物的全部RNA；②

制作探針，將與含目的基因的RNA互補(bǔ)的RNA片段用放射性同位素等作標(biāo)記；③

使探針和轉(zhuǎn)基因生物的RNA雜交，若顯示出雜交帶，表明目的基因成功轉(zhuǎn)錄為RNA。（3）具體過(guò)程:①首先取出轉(zhuǎn)基因生物的蛋白質(zhì)；②

制備特定蛋白質(zhì)相應(yīng)的抗體；③

向基因生物的蛋白質(zhì)組中加入抗體，若顯示出雜交帶，表明目的基因已成功翻譯為蛋白質(zhì)。（3）過(guò)程:3.檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的目的基因是否成功翻譯為蛋白質(zhì)

（2）方法：抗原—抗體雜交（1）原理：蛋白質(zhì)分子具有特異性，利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理例如：怎樣檢驗(yàn)抗蟲(chóng)基因在棉細(xì)胞內(nèi)是否表達(dá)呢？沒(méi)有抗蟲(chóng)基因的棉植株有抗蟲(chóng)基因的棉植株棉鈴蟲(chóng)蟲(chóng)沒(méi)有死蟲(chóng)被殺死沒(méi)有表達(dá)若不能表達(dá)，要對(duì)抗蟲(chóng)基因再進(jìn)行修飾。4.檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物是否表現(xiàn)出特定的性狀，如抗蟲(chóng)、抗旱等目的基因成功表達(dá)常見(jiàn)轉(zhuǎn)基因生物在個(gè)體水平上鑒定、檢測(cè)的方法:轉(zhuǎn)基因生物檢測(cè)方法觀察目標(biāo)抗蟲(chóng)植物飼喂害蟲(chóng)害蟲(chóng)死亡抗病毒(菌)植物病毒(菌)感染未侵染上病斑抗鹽植物鹽水澆灌正常生長(zhǎng)抗除草劑植物噴灑除草劑正常生長(zhǎng)小結(jié)基因工程的基本操作流程目的基因的篩選與獲取基因表達(dá)載體的構(gòu)建將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞