IL-10在子宮腺肌病種植窗期在位內(nèi)膜表達(dá)和子宮腺肌病內(nèi)膜容受性關(guān)系

1/1IL-10在子宮腺肌病種植窗期在位內(nèi)膜表達(dá)和子宮腺肌病內(nèi)膜容受性關(guān)系1IL-10在子宮腺肌病種植窗期在位內(nèi)膜表達(dá)和子宮腺肌病內(nèi)膜容受性關(guān)系IL-10在子宮腺肌病種植窗期在位內(nèi)膜表達(dá)和子宮腺肌病內(nèi)膜容受性關(guān)系【摘要】目的：

分析IL-10在子宮腺肌病患者在位內(nèi)膜種植窗期的表達(dá)，探討子宮腺肌病患者內(nèi)膜容受性下降的免疫學(xué)因素。

方法：

分別取子宮腺肌病、非腺肌病患者在自然周期種植窗期的內(nèi)膜組織。

子宮腺肌病患者18例，對照組16例，采用免疫組化SP法檢測內(nèi)膜組織中IL-10的表達(dá)。

結(jié)果：

IL-10在腺肌病患者內(nèi)膜腺體和間質(zhì)的表達(dá)較非腺肌病患者減弱（P35IU/L；c.經(jīng)陰道彩色超聲下，子宮增大呈球形，肌層增厚，回聲增強粗糙不均，病灶與周圍組織界限欠清，病灶內(nèi)有散在分布的小液性暗區(qū)，CDFI可檢出短條狀或稀疏點狀血流信號，伴或不伴內(nèi)膜線移位。

同時符合以上三項中的兩項者診斷為AM。

1.2標(biāo)本收集及方法1.2.1入組患者均于月經(jīng)D2-4天抽靜脈血測基礎(chǔ)性激素（FSH、LH、E2、P），CA125。

1.2.2內(nèi)膜收集：

兩組患者分別于月經(jīng)周期排卵后6～7天種植窗期行內(nèi)膜活檢。

患者均簽署知情同意，且經(jīng)過上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬蘇州九龍醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會同意認(rèn)證許可。

取內(nèi)膜用S型宮腔組織吸引管（購自上海計劃生育研究所）吸取少許內(nèi)膜，每份內(nèi)膜以無菌生理鹽水洗凈2后分2管，置于4%多聚甲醛固定。

1.3研究方法1.3.1抗體來源：

IL-10（武漢博士德公司）一抗兔抗人IL-10多克隆抗體，二抗羊抗兔IgG抗體。

1.3.2標(biāo)本制作：

手術(shù)取出子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本，直接置于4%多聚甲醛（PFA）、4℃固定16h，經(jīng)磷酸鹽緩沖液（PBS）洗3次，每次5min，乙醇脫水，石蠟包埋，經(jīng)石蠟切片機(jī)切片，切片厚度為5um。

1.3.3免疫組化分析：

參照試劑盒提供的方法，分別進(jìn)行免疫組織化學(xué)實驗，脫蠟、抗原修復(fù)、染色、顯色、封片，由2人進(jìn)行雙盲觀察，全面觀察每張切片，以細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。

隨機(jī)選擇5個具有代表性的高倍視野，每個視野計數(shù)100個細(xì)胞中的陽性細(xì)胞數(shù)，取平均數(shù)作為該病例的最終結(jié)果。

以陽性細(xì)胞數(shù)所占比例分為：

陽性細(xì)胞數(shù)50%（+++）；根據(jù)陽性細(xì)胞所占比例及相應(yīng)染色強度進(jìn)行評分pi（i：

細(xì)胞漿染色強度），i為0、1、2、3時分別表示陰性（無著色細(xì)胞）、弱陽性（淺棕黃色）、陽性（棕黃色）、強陽性（深棕黃色）；p代表同一染色強度細(xì)胞所占計數(shù)細(xì)胞百分比，1、2、3、4、5分別表示染色細(xì)胞所占計數(shù)細(xì)胞總數(shù)的0%～15%、16%～50%、（上接至第6頁）3.3ER、PR與子宮腺肌病內(nèi)膜容受性的關(guān)系3目前國內(nèi)外統(tǒng)一的觀點認(rèn)為雌激素在AM的發(fā)病中起重要作用，AM患者子宮內(nèi)膜局部雌激素水平較高。

本實驗檢測在位內(nèi)膜ER和PR，ER在內(nèi)膜腺體中表達(dá)AM組較非AM組增強，P0.05。

子宮腺肌病患者內(nèi)膜容受性主要受到卵巢分泌的雌激素（E2）和孕酮（P）的調(diào)控。

有研究者報道，在兔子和人中，雌激素并不是胚胎著床必須的，P單獨作用就能啟動著床過程[7]。

但有研究表明，對于那些不依賴于卵巢分泌的E2的動物中，其子宮和胚胎可以從頭合成E2，提示E2對哺乳動物的胚胎著床都是必須的[8]。

而雌激素水平過高，內(nèi)膜腺體與間質(zhì)脫膜化發(fā)育不同步，胚胎不能正常著床，推測可能引起AM患者內(nèi)膜容受性下降，在本實驗中ER與IL-10的在內(nèi)膜的表達(dá)具一致性，提示IL-10可能也受E2的調(diào)控。

本研究通過比較IL-10在內(nèi)膜中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)子宮腺肌病患者在位內(nèi)膜中具有妊娠保護(hù)作用的IL-10的表達(dá)減弱，改變局部免疫環(huán)境，可能是致子宮內(nèi)膜容受性下降，胚胎不能成功著床的原因之一。

對子宮腺肌病患者在位內(nèi)膜中IL-10的研究，有助于進(jìn)一步明確子宮腺肌病患者內(nèi)膜容受性下降的原因，同時采取針對相應(yīng)的處理方針，為子宮腺肌病患者內(nèi)膜容受性改善提供免疫治療方法。

51～85%、86～95%、96%～100%。

1.3.4統(tǒng)計學(xué)方法：

采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，4劑量資料組間比較用t檢驗，率的比較用卡方檢驗。

檢驗水準(zhǔn)a=0.05.2結(jié)果2.1兩組患者基本情況兩組比較年齡、BMI、基礎(chǔ)性激素、取內(nèi)膜日內(nèi)膜厚度等無顯著性差異（P0.05）。

痛經(jīng)、CA125升高比率，AM組較對照組明顯升高，P0.05。

（見表2）3討論3.1IL-10在子宮腺肌病在位內(nèi)膜的表達(dá)白細(xì)胞介素-10（IL-10）是一種公認(rèn)的介導(dǎo)免疫抑制的細(xì)胞因子，產(chǎn)生于Th2輔助細(xì)胞，抑制Th1細(xì)胞應(yīng)答及其細(xì)胞因子合成，同時抑制M的抗原提呈功能及其細(xì)胞因子合成，促進(jìn)B細(xì)胞增殖分化及抗體產(chǎn)生。

2009年FeiWang[3]選取34例因子宮腺肌病切除子宮的在位及異位內(nèi)膜和30例已生育者的正常內(nèi)膜，通過免疫組化檢測IL-10，發(fā)現(xiàn)IL-10在腺肌病患者在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜表達(dá)顯著升高，并在分泌期升高明顯，與郎景和教授的子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)理一致，認(rèn)為IL-10通過免疫抑制機(jī)制使在位內(nèi)膜通過薄弱的基底層侵入肌層，異位內(nèi)膜逃避機(jī)體免疫攻擊，使得異位病灶不能及時清除，從而持續(xù)生長。

2012年XiaoyanQin[4]通過免疫組化檢測，發(fā)現(xiàn)子宮腺肌病患者在位內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞IL-10R1表達(dá)增高，而無IL-10R2表達(dá)，子宮腺肌病患者5異位病灶處腺上皮細(xì)胞IL-10R1和IL-10R2表達(dá)均顯著升高，進(jìn)一步論證了IL-10和IL-10R相互作用，在子宮局部產(chǎn)生的免疫耐受，使得異位病灶逃避宿主免疫監(jiān)視，并在肌層生長，與子宮腺肌病發(fā)病密切相關(guān)。

該論點認(rèn)為IL-10在子宮的表達(dá)并維持的免疫抑制作用，使得異位病灶在腹腔或子宮肌層不能被機(jī)體宿主及時清除，從而形成了子宮內(nèi)膜異位癥或子宮腺肌病。

而成功的妊娠是一個免疫矛盾，一方面胎兒抗原不能作為半同種移植物被母體識別，另一方面為了在母體中生存，胎兒抗原又必須呈遞給母體，被母體接受。

因此，胎兒抗原的免疫識別對于維持妊娠極為重要，識別不足將可能導(dǎo)致種植失敗和復(fù)發(fā)性流產(chǎn)[5]。

IL-10在子宮內(nèi)膜表達(dá)不足引起免疫耐受抑制，胚胎不能成功著床，導(dǎo)致種植失敗及早期流產(chǎn)。

本實驗證實子宮腺肌病患者和非腺肌病患者種在位內(nèi)膜均表達(dá)IL-10，子宮腺肌病患者表達(dá)減弱，推測IL-10在子宮腺肌病患者內(nèi)膜的表達(dá)缺陷是其不孕的原因之一。

3.2IL-10與子宮腺肌病內(nèi)膜容受性的關(guān)系大量的研究認(rèn)為IL-10是主要的抗炎癥因子之一，在很多的慢性疾病及腫瘤相關(guān)性疾病中充當(dāng)重要角色。

而來自于子宮的IL-10，在人類的HLA抗原識別上具有兩個作用，在胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞誘導(dǎo)人類HLA抗原產(chǎn)生，下調(diào)經(jīng)典的I類和II類抗原形成，從而誘導(dǎo)免疫耐受使胎兒免于母體排斥。

62002年Vigano[6]等通過選擇性人工流產(chǎn)的脫膜細(xì)胞和非孕期子宮內(nèi)膜體外培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)人類子宮內(nèi)膜表達(dá)IL-10和IL-10受體，妊娠早期脫膜組織較非妊娠期內(nèi)膜組織中IL-10明顯上升，認(rèn)為IL-10是成功妊娠的標(biāo)志。

而子宮內(nèi)膜容受性是指子宮具有接受并容納活性胚胎，并成功建立妊娠的能力。

子宮內(nèi)膜進(jìn)入接受態(tài)是胚胎在子宮內(nèi)膜中定位、黏附、侵入并成功著床的關(guān)鍵。

種植窗期是指子宮內(nèi)膜只在特定的一段時期內(nèi)對胚胎具有接受性。

此時期是子宮內(nèi)膜接受性達(dá)到最高的時期，胚胎能夠成功著床。

在人類，種植窗期發(fā)生于正常月經(jīng)周期排卵后6～8天，子宮內(nèi)膜受到激素、細(xì)胞因子、黏附分子、microRNA等多種因素調(diào)節(jié)，發(fā)生一系列變化，從而具備接受胚泡著床的能力。

本實驗選取子宮腺肌病和非腺肌病患者種植窗期內(nèi)膜組織，結(jié)果證實IL-10在腺肌病患者在位內(nèi)膜腺體和間質(zhì)的表達(dá)較對照組明顯下降，提示子宮內(nèi)膜局部免疫耐受下降，這可能是導(dǎo)致胚胎不能成功著床，妊娠率下降的原因之一。

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