HPV的檢測和其臨床應用培訓課件

HPV乳頭瘤病毒科屬小DNA病毒乳頭瘤病毒的基因組主要編碼三組基因三個癌基因，包括E5、E6和E7，負責調(diào)節(jié)癌細胞轉(zhuǎn)化過程；兩個調(diào)節(jié)基因，包括E1和E2，負責調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄和病毒基因組的復制；兩個結(jié)構(gòu)蛋白基因，包括L1和L2，組成病毒顆粒8/23/20241HPV的檢測和其臨床應用HPV感染屬于常見的性傳播感染直接的皮膚-皮膚接觸是傳播的最有效途徑病毒不通過血液或體液傳播（例如精液）8/23/20242HPV的檢測和其臨床應用HPV感染生殖器HPV感染的潛伏期變化極大。一般來說，生殖器疣在HPV感染3-6月后顯現(xiàn)，然而也有研究表明潛伏期有數(shù)個月甚至幾十年；絕大多數(shù)的HPV感染是一過性的，新發(fā)感染大多1-2年內(nèi)會發(fā)生自愈；僅有少數(shù)的HPV感染會保持潛伏性，幾年或幾十年后會再激活。8/23/20243HPV的檢測和其臨床應用多數(shù)生殖道HPV感染無臨床癥狀與HPV相關(guān)的宮頸疾病包括：宮頸濕疣、宮頸病變和宮頸癌等從HPV感染到釋放病毒約有3周。但是，HPV感染至出現(xiàn)損傷之間可能數(shù)周到數(shù)月。病毒感染的早期可能存在免疫逃逸，故沒有炎癥反應8/23/20244HPV的檢測和其臨床應用完整的HPV感染循環(huán)HPV感染顆粒突破下肛殖道表皮HPV感染顆粒進入表皮細胞的基底層隨著基底層干細胞的子細胞分裂以及在垂直方向上的成熟化，病毒在基底層以上鱗狀細胞中復制成熟的病毒在表面細胞分離時釋放到環(huán)境中8/23/20245HPV的檢測和其臨床應用HPV分型最重要的分類學單元是型(type)與宮頸癌相關(guān)程度較為清楚的HPV型歸為高危型HPV（16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,68,73）和疑似高危型HPV（26,53,66）與尖銳濕疣等良性疾病相關(guān)的HPV被歸入低危型HPV（6,11,40,42,43,44,54,61,70,72,81，89），一般認為這類HPV的感染不會誘導宮頸癌的發(fā)生

8/23/20246HPV的檢測和其臨床應用HPV與宮頸癌的相關(guān)性年輕性活躍的女性HPV感染率最高，感染高峰年齡為18～28歲多屬于一過性感染，通過自身免疫將HPV消滅只有持續(xù)感染HPV的婦女,才成為子宮頸癌高發(fā)人群HPV感染到發(fā)展成為子宮頸癌需要9-25年時間30%發(fā)展成為CIN1,10%發(fā)展成為CIN2,10%進一步發(fā)展成為CIN3，1%發(fā)展成為子宮頸癌8/23/20247HPV的檢測和其臨床應用宮頸癌前病變宮頸上皮細胞內(nèi)瘤變（CIN）；包括宮頸非典型增生和宮頸原位癌，反映宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的過程。從細胞學分為CINI、Ⅱ、III級，包含宮頸鱗狀上皮細胞內(nèi)病變和腺細胞內(nèi)病變。8/23/20248HPV的檢測和其臨床應用宮頸癌現(xiàn)狀女性第二大常見惡性腫瘤全世界每年新病例數(shù)為56.5萬在發(fā)展中國家宮頸癌的發(fā)生率為發(fā)達國家6倍，有50%的病例發(fā)生在中國和印度中國每年新病例為18.15萬中國每年有3萬多的婦女死于宮頸癌8/23/20249HPV的檢測和其臨床應用發(fā)展中國家的新發(fā)病例多是晚期患者未能早期診斷細胞學檢查未能普及陰道鏡應用條件受到限制民眾對宮頸癌的防范意識欠缺8/23/202410HPV的檢測和其臨床應用發(fā)病年齡原位癌的發(fā)病年齡為35-39歲浸潤癌為40-49歲8/23/202411HPV的檢測和其臨床應用宮頸癌的新動向近年來由于生活方式的改變發(fā)病率:有上升趨勢發(fā)病年齡:趨向年輕化8/23/202412HPV的檢測和其臨床應用HPV感染和宮頸癌在不同年齡組的發(fā)生率年齡(Years)HPV感染率(%)40-4415-1920-2425-2930-3435-3945-4950-54051015202530051015202530每10萬人中宮頸癌發(fā)生率8/23/202413HPV的檢測和其臨床應用哪些些婦女更容易患宮頸癌性生活過早早孕多產(chǎn)或多次人工流產(chǎn)自己或性伴侶有多個性伴侶曾經(jīng)或正患有生殖道HPV感染有或曾經(jīng)患有其它性病吸煙、吸毒和營養(yǎng)不良內(nèi)分泌紊亂或免疫力低下的婦女8/23/202414HPV的檢測和其臨床應用現(xiàn)在基本明確宮頸癌的病因就是高危型HPV的持續(xù)性感染。感染HPV病毒到發(fā)展成浸潤癌需要大約十年的歷程，這是重要不可忽視的時間，只要定期進行婦科健康檢查，就可以及早發(fā)現(xiàn)子宮頸癌癌前病變并加以治療，就可有效地扼制其癌變;預防子宮頸癌的發(fā)生。宮頸癌可以預防和治愈8/23/202415HPV的檢測和其臨床應用引起宮頸癌幾個方面因素8/23/202416HPV的檢測和其臨床應用HPV致宮頸癌機理5--10yearsHPV感染持續(xù)HPV感染細胞分化異常CIN高度CIN>30<30宮頸癌輔助—致癌劑免疫因素8/23/202417HPV的檢測和其臨床應用HPVE6癌蛋白與宮頸惡性病變的關(guān)系8/23/202418HPV的檢測和其臨床應用HPVE7癌蛋白的分子生物學特性

8/23/202419HPV的檢測和其臨床應用宮頸上皮細胞發(fā)生異常和瘤變的進化過程基底細胞膜正常輕度中度原位鱗狀細胞癌變 上皮 變型HSIL細胞異型CIN1CIN2CIN3LSIL巴氏涂片活檢8/23/202420HPV的檢測和其臨床應用HPV致宮頸癌進展示意圖LSILLSILCISCA8—10年（100%治愈）2—5年（死亡）正常低度病變高度病變原位癌浸潤癌8/23/202421HPV的檢測和其臨床應用關(guān)于HPV感染HPV感染多數(shù)不發(fā)展成為宮頸癌，可以在9-16(8-10)個月消失;間隔半年2次HPV（＋）;HPV持續(xù)感染;28%的持續(xù)感染者,在2年內(nèi)發(fā)展為CINI；70%的持續(xù)感染者4年內(nèi)發(fā)展為CINII;8/23/202422HPV的檢測和其臨床應用HPV實驗室檢測8/23/202423HPV的檢測和其臨床應用

臨床常用的HPV檢測方法病理學檢查細胞學檢查免疫組化檢測原位雜交技術(shù)檢測聚合酶鏈反應(PCR)技術(shù)DNA芯片分型檢測雜交捕獲DNA分析8/23/202424HPV的檢測和其臨床應用病理學檢查鱗狀上皮疣狀乳頭狀增生表皮角化不全棘層不規(guī)則增厚基底層增生上皮腳延長中表層出現(xiàn)灶狀分布的挖空細胞等。8/23/202425HPV的檢測和其臨床應用細胞學檢查凹空細胞、角化不良及濕疣外底層細胞細胞學診斷HPV感染敏感性較差8/23/202426HPV的檢測和其臨床應用免疫組化檢測檢測HPV的衣殼抗原來進一步明確HPV感染所得陽性反應定位明確,判斷可靠必須在HPV-DNA復制成熟后才有衣殼裝備敏感性較低8/23/202427HPV的檢測和其臨床應用原位分子雜交用來測定基因或特定核苷酸序列在核酸分子的所在部位，檢測重組體DNA）通過非放射性探針對石蠟組織進行檢測,能作定位檢測,假陽性率低,但靈敏度不高,大大降低了臨床使用價值。8/23/202428HPV的檢測和其臨床應用

聚合酶鏈反應(PCR)技術(shù)設(shè)計與HPV-DNA互補的一對特異性核苷酸引物,以HPV-DNA為模板以指數(shù)增長的速率進行體外擴增敏感性最高,可對HPV進行分型,測定病毒載量,發(fā)現(xiàn)新基因型,對基因進行序列分析缺點為樣品間易交叉污染導致假陽性8/23/202429HPV的檢測和其臨床應用雜交捕獲DNA分析標本中的HPV-DNA與液相中的RNA探針結(jié)合,形成特異性的RNA-DNA雜交體,被微孔板內(nèi)的特異抗體所捕獲,然后被所加的發(fā)光底物檢測,其發(fā)光的強度與標本中的DNA量成比例,因而可對HPV進行半定量檢測效率高,適于大量人群檢測,臨床上操作簡便8/23/202430HPV的檢測和其臨床應用DNA裂解→RNA-DNA雜交→抗體捕獲→化學發(fā)光→計算機判讀裂解加入探針雜交加入二抗和發(fā)光劑8/23/202431HPV的檢測和其臨床應用

hC2方法，特異性強，準確率高，并能做到定量，但不能分出亞型。芯片技術(shù)，可在相同的條件下，分出亞型，但不能定量。因此，HPV亞型分類和定量檢測研究將成為今后的重要課題。亞型和量化，可能對疾病的演變和轉(zhuǎn)歸提供更有利的證據(jù)。8/23/202432HPV的檢測和其臨床應用宮頸癌的篩查8/23/202433HPV的檢測和其臨床應用篩查對象21歲以上有性生活史或具有性生活三年以上的任何婦女。高危人群：有多個性伴侶、性生活過早、HIV/HPV感染、機體免疫功能低下、衛(wèi)生條件差/性保健知識缺乏。某些情況無需進行篩查，如因良性疾病摘除子宮的婦女。

8/23/202434HPV的檢測和其臨床應用起始年齡：

在我國經(jīng)濟發(fā)達地區(qū)為25－30歲；經(jīng)濟欠發(fā)達地區(qū)為35－40歲。對于高危婦女人群，篩查起始年齡應適當提前。終止年齡：

65歲后患子宮頸癌的危險性極低，故一般不主張對65歲以上的婦女進行子宮頸癌篩查。

8/23/202435HPV的檢測和其臨床應用篩查間隔1、每年一次細胞學檢查，連續(xù)2次（-），可3年一次2、連續(xù)2次HPV（-），細胞學檢查（-）可5～8年一次3、高危人群：最好每年一次（CIN及以上、特殊職業(yè)、30歲以上高危HPV感染者）8/23/202436HPV的檢測和其臨床應用篩查方案根據(jù)《中國癌癥預防與控制規(guī)劃綱要（2004-2010）》推薦，一般可以選擇下面兩種篩查方案。

8/23/202437HPV的檢測和其臨床應用醋酸或碘染色后肉眼觀察（VIA/VILI）

陽性陰性陰道鏡+病理定期篩查（1次/年）相應治療初級篩查方案流程圖8/23/202438HPV的檢測和其臨床應用醫(yī)生取材HPV檢測+傳統(tǒng)巴氏涂片（TBS分級）HPV（-）HPV（+）HPV（-）HPV（+）細胞學≤ASCUS細胞學≤ASCUS細胞學≥

ASC-H細胞學≥

ASC-H陰道鏡檢查/多點活檢+ECC篩查（1次/3~5年）隨訪（1次/年）相應治療

一般篩查方案流程圖8/23/202439HPV的檢測和其臨床應用取材HPV檢測+液基細胞學檢查（TBS分級）HPV（-）HPV（+）HPV（-）HPV（+）細胞學≤ASCUS細胞學≤ASCUS細胞學≥ASC-H細胞學≥ASC-H

陰道鏡檢查/多點活檢+ECC篩查隨訪（1次/3~5年）（1次/年）相