膀胱移行細(xì)胞癌組織VEGF和COX2表達(dá)及意義

1/1膀胱移行細(xì)胞癌組織VEGF和COX2表達(dá)及意義膀胱移行細(xì)胞癌組織VEGF和COX2表達(dá)及意義【摘要】目的探討血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）和環(huán)氧化酶2（COX2）蛋白在膀胱移行細(xì)胞癌（TCCB）組織中的表達(dá)及其與腫瘤生物學(xué)行為之間的關(guān)系。

方法采用免疫組化SP法檢測(cè)68例TCCB和10例正常膀胱黏膜組織VEGF和COX2蛋白的表達(dá)。

結(jié)果正常黏膜組織中VEGF和COX2均不表達(dá)。

在Ⅰ～Ⅲ級(jí)和淺表性、浸潤(rùn)性TCCB組織中VEGF的陽性表達(dá)率分別為23.07%、58.62%、84.61%和43.75%、77.77%，VEGF的陽性表達(dá)率在不同組織學(xué)分級(jí)及不同臨床分期的TCCB組織中差異有極顯著性（2=14.11、8.29，Plt;0.01）；復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組其陽性表達(dá)率分別為78.94%和40.00%，差異有極顯著性（2=10.77，Plt;0.01）。

在Ⅰ～Ⅲ級(jí)和淺表性、浸潤(rùn)性TCCB組織中COX2的陽性表達(dá)率分別為15.38%、55.17%、80.77%和37.50%、75.00%，COX2的陽性表達(dá)率在不同組織學(xué)分級(jí)及不同臨床分期的TCCB組織中差異有極顯著性（2=15.27、9.73，Plt;0.01）；在復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組其陽性表達(dá)率分別為73.68%和36.67%，差異有極顯著性（2=9.40，Plt;0.01）。

在TCCB組織中，VEGF表達(dá)與COX2表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.55,Plt;0.01）。

結(jié)論VEGF和COX2陽性表達(dá)與TCCB病理分級(jí)、浸潤(rùn)及復(fù)發(fā)關(guān)系密切，VEGF和COX2可以作為判定膀胱移行細(xì)胞癌惡性程度及復(fù)發(fā)的參考指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】血管生成誘導(dǎo)劑；環(huán)氧化酶2；膀胱腫瘤；免疫組織化學(xué)；預(yù)后近年研究認(rèn)為，惡性腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移與癌細(xì)胞的浸潤(rùn)能力及其在轉(zhuǎn)移部位的生存能力等因素有關(guān)。

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF），又稱血管滲透因子或血管調(diào)理素，與惡性腫瘤的新生血管形成相關(guān)，在惡性腫瘤的發(fā)展和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要作用[1]。

環(huán)氧化酶2（COX2）作為前列腺素合成過程中的一個(gè)限速酶，其過度表達(dá)與多種上皮性腫瘤發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切[2～4]。

為了探討VEGF和COX2在膀胱移行細(xì)胞癌（TCCB）組織中的表達(dá)及其與腫瘤生物學(xué)行為的關(guān)系，本文采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)了TCCB組織和正常膀胱黏膜組織中二者的表達(dá)情況，現(xiàn)報(bào)告如下。

1材料與方法1.1標(biāo)本選擇隨機(jī)選取我院1999～2002年經(jīng)手術(shù)切除的初發(fā)性TCCB石蠟標(biāo)本68例，男49例，女19例;年齡30～85歲，平均60.2歲。

臨床病理分期按國(guó)際抗癌協(xié)會(huì)（UICCTNM）標(biāo)準(zhǔn)確定，其中淺表性(Tis～T1)腫瘤32例，浸潤(rùn)性(T2～T4)腫瘤36例。

病理分級(jí)按世界衛(wèi)生組織（WHO）1998年標(biāo)準(zhǔn)確定，其中Ⅰ級(jí)（G1）13例，Ⅱ級(jí)（G2）29例，Ⅲ級(jí)（G3）26例。

所選病例均有隨訪，其中復(fù)發(fā)38例。

10例正常膀胱黏膜組織標(biāo)本取自非腫瘤病人。

標(biāo)本均作5m厚的連續(xù)組織切片，分別進(jìn)行蘇木精伊紅、免疫組織化學(xué)染色。

所有病例術(shù)前均未經(jīng)放療、化療及免疫治療。

1.2檢測(cè)方法采用免疫組化SP法。

鼠抗人VEGF單克隆抗體和鼠抗人COX2單克隆抗體為SantaCruzBiotech公司產(chǎn)品,工作濃度為1∶100；生物素化羊抗鼠IgG及SP試劑盒為北京中山生物有限公司產(chǎn)品；DAB為Sigma公司產(chǎn)品。

用已知胃癌陽性切片作陽性對(duì)照，用PBS代替一抗作陰性對(duì)照,DAB顯色，蘇木精復(fù)染，中性樹脂封片。

具體操作步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)VEGF表達(dá)的判定：

以腫瘤細(xì)胞及其附近的血管內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)出現(xiàn)黃色或棕黃色為陽性染色，無瘤細(xì)胞著色或著色瘤細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性表達(dá),著色瘤細(xì)胞數(shù)10%為陽性表達(dá)。

COX2陽性表達(dá)的判定標(biāo)準(zhǔn)：

胞質(zhì)和核膜染為棕黃色或棕褐色的細(xì)胞為染色陽性細(xì)胞，連續(xù)觀察5個(gè)高倍視野，各計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞數(shù)10%為陰性表達(dá)，著色瘤細(xì)胞數(shù)10%為陽性表達(dá)[5]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS11.0軟件進(jìn)行2檢驗(yàn)及Spearman相關(guān)分析。

果2結(jié)2.1TCCB組織中VEGF蛋白的表達(dá)VEGF主要著色部位為癌細(xì)胞胞質(zhì)，部分癌細(xì)胞周圍的血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)也著色，位于浸潤(rùn)邊緣的癌細(xì)胞染色較重。

68例TCCB組織中42例VEGF蛋白表達(dá)陽性（61.76%），10例正常膀胱黏膜上皮組織VEGF蛋白的表達(dá)均為陰性，二者差異有極顯著意義（2=11.01，Plt;0.01）。

2.2TCCB組織中COX2蛋白的表達(dá)COX2主要著色部位為癌細(xì)胞胞質(zhì)，少數(shù)為核膜著色，部分癌細(xì)胞周圍的血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)亦有著色。

68例TCCB組織中39例COX2蛋白表達(dá)陽性（57.35%），10例正常膀胱黏膜上皮組織COX2蛋白的表達(dá)均為陰性，二者差異有極顯著意義（2=11.47，Plt;0.01）。

2.3VEGF和COX2表達(dá)與TCCB病理分級(jí)、臨床分期、復(fù)發(fā)的關(guān)系VEGF在TCCBG1、G2、G3陽性表達(dá)率分別為23.07%、58.62%、84.61%，差異具有極顯著意義（2=14.11，Plt;0.01）；兩兩比較,三者間差異均有顯著性(2=4.56、4.48、14.26，Plt;0.05、0.01)；淺表性TCCB陽性表達(dá)率為43.75%，浸潤(rùn)性TCCB為77.77%，差異有極顯著性（2=8.29，Plt;0.01）；復(fù)發(fā)組的陽性表達(dá)率為78.94%，而未復(fù)發(fā)組為則40.00%，兩者間的差異有極顯著性（2=10.77，Plt;0.01）。

COX2在TCCBG1、G2、G3異常表達(dá)率分別為15.38%、55.17%、80.77%，差別有極顯著性（2=15.27，Plt;0.01）；兩兩比較,三者間差異均有顯著性(2=5.80、4.08、15.33，Plt;0.05、0.01)；在淺表性TCCB陽性表達(dá)率為37.50%，浸潤(rùn)性TCCB為75.00%，差異有極顯著性（2=9.73，Plt;0.01）;復(fù)發(fā)組陽性表達(dá)率為73.68%，未復(fù)發(fā)組為36.67%，差異有極顯著性（2=9.40，Plt;0.01）。

2.4VEGF與COX2表達(dá)的關(guān)系TCCB組織中VEGF與COX2的共同陽性表達(dá)率為48.53%（33/68）。

VEGF陽性組中COX2陽性表達(dá)率為78.57%（33/42）；VEGF陰性組中COX2陽性表達(dá)率為23.08%（6/26），兩者之間差異有極顯著性（2=20.22，Plt;0.01）。

相關(guān)分析表明，TCCB組織中VEGF與COX2的表達(dá)具有正相關(guān)性（r=0.55,Plt;0.01）。

3討論3.1VEGF在TCCB組織的表達(dá)情況研究表明，腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移取決于血管形成。

血管形成受大量促血管生長(zhǎng)因子和抗血管生成因子的調(diào)節(jié)，而在所有的調(diào)節(jié)因子中，VEGF是最重要的，它調(diào)控血管形成作用強(qiáng)，特異性高，與腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

VEGF是一種特異性促血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂因子，其基因定位于人染色體6p21.3上，全長(zhǎng)14kb[6]。

VEGF高表達(dá)于多種惡性腫瘤，如膠質(zhì)瘤、肺癌、乳癌和腎癌等。

而在正常人體組織中如心肌、肺、腎、肝臟等均可檢測(cè)到VEGF的表達(dá)，但其陽性率極低，僅維持正常的血管密度和基本滲透功能，以利于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的運(yùn)輸[7]。

本文結(jié)果顯示，VEGF蛋白在TCCB組織中呈高表達(dá)，而在正常膀胱黏膜組織不表達(dá)；VEGF在TCCB組織陽性表達(dá)率隨著TCCB的病理分級(jí)、臨床分期的增高而上升；浸潤(rùn)性TCCB與淺表性相比，前者VEGF陽性表達(dá)率明顯升高；VEGF陽性表達(dá)的腫瘤病人，其復(fù)發(fā)率顯著高于陰性表達(dá)的腫瘤病人。

膀胱癌是富血管性的惡性腫瘤，VEGF表達(dá)將有助于膀胱腫瘤的血管新生。

隨著膀胱癌分期、分級(jí)的提高，VEGF蛋白表達(dá)率升高，這表明VEGF可能與膀胱腫瘤的生長(zhǎng)和浸潤(rùn)密切相關(guān)，其表達(dá)愈強(qiáng)，TCCB的惡性度愈高，復(fù)發(fā)率高，提示VEGF可以作為反映膀胱移行細(xì)胞癌生物學(xué)行為的一個(gè)重要指標(biāo)。

3.2COX2在TCCB組織的表達(dá)情況哺乳動(dòng)物的COX有COX1和COX2兩種類型。

COX1屬結(jié)構(gòu)型蛋白，在正常組織和細(xì)胞中表達(dá)；而COX2屬可誘生型酶，在正常生理狀態(tài)下多數(shù)組織內(nèi)幾乎檢測(cè)不到，而在細(xì)胞受到各種刺激時(shí)，如組織損傷、炎癥或細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化時(shí)表達(dá)增強(qiáng)。

人的COX2基因定位于1q25.225.3上，長(zhǎng)約8.3kb。

COX2的過度表達(dá)與多種上皮性腫瘤發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，并可以作為預(yù)防和治療腫瘤的靶分子，具有重要的臨床意義[8]。

研究表明，在結(jié)腸癌、乳癌、前列腺癌等許多上皮來源的惡性腫瘤組織中，COX2和前列腺素的合成都增加[2～4]。

體外實(shí)驗(yàn)中結(jié)腸癌細(xì)胞系在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染COX2基因后，細(xì)胞的增殖能力增強(qiáng)，細(xì)胞凋亡減少[9]。

本文結(jié)果也顯示，COX2蛋白在TCCB組織中呈高表達(dá)，而在正常膀胱黏膜組織不表達(dá)；COX2在TCCB組織陽性表達(dá)率隨著TCCB的病理分級(jí)的增高而增加，提示COX2可能參與了TCCB癌變細(xì)胞的分化；浸潤(rùn)性TCCB與淺表性相比，前者COX2陽性表達(dá)明顯增強(qiáng)，提示較晚期的TCCB產(chǎn)生較多量的COX2，以維持其生長(zhǎng)；COX2陽性表達(dá)的腫瘤病人，其復(fù)發(fā)率顯著高于陰性表達(dá)的腫瘤病人。

本研究結(jié)果提示，COX2表達(dá)與TCCB的分級(jí)、分期有顯著相關(guān)性；在高級(jí)別、易復(fù)發(fā)的病例中，COX2蛋白表達(dá)率升高，這表明COX2可能與TCCB的生長(zhǎng)和浸潤(rùn)密切相關(guān)，其表達(dá)愈強(qiáng)，TCCB的惡性度愈高，復(fù)發(fā)率也愈高，提示COX2可以作為檢測(cè)膀胱移行細(xì)胞癌惡性程度及復(fù)發(fā)的重要指標(biāo)之一。

3.3VEGF與COX2表達(dá)的關(guān)系腫瘤的生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移都依賴于新生血管的形成，大部分腫瘤都會(huì)分泌出大量的VEGF，從而調(diào)節(jié)血管形成及啟動(dòng)轉(zhuǎn)移過程。

在生長(zhǎng)旺盛的腫瘤，組織相對(duì)低氧誘導(dǎo)COX2表達(dá)，從而也引起VEGF的表達(dá)增加。

CIANCHI等[10]對(duì)31例結(jié)腸癌的研究提示，VEGF是COX2促血管形成作用的最重要相關(guān)因子，結(jié)腸癌組織COX2的表達(dá)水平和VEGFmRNA及蛋白表達(dá)水平都有著顯著相關(guān)性。

WILLIAMS等[11]研究結(jié)果顯示，COX2與VEGF的表達(dá)密切相關(guān)，在COX2基因缺失的成纖維細(xì)胞中，VEGF的表達(dá)下降了94%，在COX2基因缺陷的小鼠中VEGFmRNA含量明顯下降。

COX2也可以直接刺激腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生類花生四烯酸產(chǎn)物如TXA2、PGE2、PGI2等，這些物質(zhì)可以直接促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的移位和生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的血管形成。

MAJIMA等[12]報(bào)道，在PGE2、PGF2增加的同時(shí)，VEGFmRNA的生成也增加，VEGF以旁分泌形式作用于內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)血管生成。

本文研究結(jié)果表明，COX2在TCCB組織的表達(dá)模式十分接近于VEGF的表達(dá)模式，二者之間密切相關(guān)。

本研究結(jié)果表明，COX2和VEGF在TCCB的生長(zhǎng)、侵襲與轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。

將COX2和VEGF結(jié)合起來進(jìn)行分析，能更準(zhǔn)確反映TCCB的生物學(xué)行為，并可以作為判定TCCB惡性程度及復(fù)發(fā)的參考指標(biāo)。

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