BSL-2 實驗室生物安全手冊

中國科學院基礎醫(yī)學與腫瘤研究所科學實驗中心BSL-2實驗室生物安全手冊中國科學院基礎醫(yī)學與腫瘤研究所科學實驗中心BSL-2實驗室生物安全手冊中國科學院基礎醫(yī)學與腫瘤研究所科學實驗中心BSL-2實驗室生物安全手冊生物成像平臺2023年目錄1實驗室標識系統(tǒng) 33生物安全實驗室人員準入制度 45．生物安全實驗人員個體防護和實驗操作規(guī)程 56.生物安全實驗室設施/設備檢測和維護制度 77.生物安全實驗室廢物處理制度 88.意外事故處理及報告制度 99.消防及用電緊急預案 1010.感染性物質溢出處理 1211.從工作區(qū)撤離的規(guī)定和程序 14--實驗室平面圖、緊急出口和撤離路線實驗室平面圖人流物流圖緊急撤離圖實驗室標識系統(tǒng)3.緊急電話、聯(lián)系人保衛(wèi)科聯(lián)系人：翟成杰生物安全實驗室人員準入制度本實驗室為中國科學院基礎醫(yī)學與腫瘤研究所科學實驗中心操作病毒包裝純化的場所進入本實驗室進行實驗的人員首先向該實驗室的管理人員提出申請由管理人員安排相關培訓合格后開通門禁卡方可進入。實驗前必須在中國科學院基礎醫(yī)學與腫瘤研究所科學實驗中心網(wǎng)頁（/）上進行預約相應的生物安全柜或儀器，預約成功后，方可進入。使用本人門禁卡進入本實驗室，不得借給他人使用。非本實驗室工作人員外來合作者進修和學習人員進入實驗室參觀學習必須經(jīng)過相關人員批準由主管工作人員帶領進入實驗室嚴禁兒童進入BSL-2實驗室。本實驗室實行人員物品通過專用的通道進出實驗人員由人員出入通道進出實驗區(qū)實驗物品通過傳遞窗口進出入實驗區(qū)實驗物品帶出實驗室時必須保證沒有受到污染。實驗所用器皿，耗材，包括細胞株，包裝病毒材料需經(jīng)批準帶入本實驗室，實驗動物不得帶入本實驗室。所有實驗方案必須經(jīng)過所內所級中心管理委員（兼生物安全委員會通過并備案后方可實施。申請流程為：填寫《實驗方案申請書，然后由所級中心管理委員（兼生物安全委員會作出相應的風險評估報告后決定是否允許執(zhí)行。禁止操作在本備案過的病原微生物范圍之外的其他病原微生物實驗。實驗室人員在下列情況進入BSL-2實驗室內需經(jīng)實驗室負責人同意：身體出現(xiàn)開放性損傷；呼吸道感染或其他導致抵抗力下降的情況；正在使用免疫抑制劑或免疫耐受；妊娠期人員。連續(xù)工作或者其他原因導致的疲勞狀態(tài)5．生物安全實驗人員個體防護和實驗操作規(guī)程個人防護所有工作人員和實驗人員按照下列要求進行個人防護才能進入實驗室區(qū)域：（1）穿好實驗服，戴防護帽，口罩，手套，鞋套。實驗服外穿一次性隔離服。（2）根據(jù)實驗情況使用安全眼鏡、護目鏡和防護面罩。（3）實驗室配備洗眼裝置以應對意外污染事故。各種防護的具體要求口罩的穿戴佩戴時必須完全罩住鼻口及下巴調整金屬鼻夾的形狀保持口罩與面部緊密貼合。吸氣時口罩應該有塌陷狀，呼氣時口罩周圍不應該漏氣。手套的穿戴在使用手套前應檢查手套是否有穿孔或有裂縫在生物安全柜中操作感染性物質時應該佩戴兩副手套在操作中外層手套被污染立即用消毒劑噴灑手套并脫下后丟棄在生物安全柜中的醫(yī)療廢物盒中并立即帶上新手套繼續(xù)實驗一次性手套不可再次使用用后立即高壓滅菌后丟棄不得戴著手套離開實驗室區(qū)域戴手套的手避免觸摸鼻子面部或調整其他個人防護裝備避免觸摸不必要的物體表面如燈開關、門把手等。戴手套要點：1.選擇合適尺寸的手套；2.戴好手套后應完全遮住手及腕部，并覆蓋實驗服袖口。脫手套要點：用一手捏起另一近手腕部處的手套外緣，將手套從手上脫下并將手套外表面翻轉入內；用戴著手套的手拿住該手套；用脫去手套的手指插入另一手套腕部處內面；脫下該手套使其內面向外并形成一個由兩個手套組成的袋狀；丟棄在高溫消毒袋中并進行消毒處理。鞋套的穿戴在BSL-2實驗室內要堅持穿鞋套，防止實驗人員足部受到損傷。實驗服和一次性隔離服實驗服要與個人衣物分開定期進行清潔和消毒而隔離服比實驗服更適合在BSL-2實驗室以及生物安全柜中進行操作工作當防護服被危險材料污染后應立即更換。離開實驗室區(qū)域前應脫去防護服。5.1.3離開實驗室前需要安全地脫卸個人防護裝備一般脫卸順序為外層手套、隔離服口罩帽子鞋套最后為內層手套離開后需要立即洗手或者手部消毒。實驗操作洗滌時避免液體材料飛濺吸取稀釋液體時將吸管插入試管底部避免產生氣泡或氣溶膠。離心時應使用雙蓋封閉式離心機和全封閉式試管每管離心液總量低于最高容量一個刻度單位平衡時不得有液體滲漏到管套中轉頭只允許在生物安全柜中打開、裝載和卸載。離心機使用后立即用消毒液擦洗消毒。確保沒有感染病原體的材料才可從實驗室?guī)С觥Ｈ萜鞅砻鎽?5%乙醇消毒。每一實驗步驟完成后，均應清理臺面，所有用過的物品均應歸還原位。任何有活性的第三類病原體的操作都應在二級生物安全柜中進行開放式的實驗臺不允許操作此類病原體。在BSL-2BSL-2實驗室操作準則。在二級生物安全柜外操作有活性的第三類病原體（如將接種了病毒的細胞培養(yǎng)瓶放到培養(yǎng)箱的過程中，要遵守雙層防護的原則。實驗室應保持干凈整潔只有當前正在使用的儀器和物品才可放在實驗臺上。耗材應貯存在緩沖間處指定的架子上，隨用隨取。禁止用嘴吸液；必須使用輔助移液裝置。注射器和針頭只有在絕對需要時才可使用。用過的針頭絕不要重新蓋帽或彎折，必須放到專用的利器盒中。任何情況下書籍和實驗記錄本都不允許帶入BSL-2實驗室。生物安全實驗室設施/設備檢測和維護制度大型儀器設備精密儀器使用后需在登記本上進行登記使用者需經(jīng)專門的技術培訓。主要儀器設備建立使用記錄有操作規(guī)程注意事項相關技術參數(shù)和維護維修記錄，并置于明顯位置。使用儀器必須遵守操作規(guī)程。儀器設備應在檢定和校準的有效期內使用并嚴格按照檢定周期的要求進行自我或強檢，對使用頻率高的儀器按規(guī)定在檢定周期內進行期間核查。儀器設備所用電源必須滿足儀器設備的供電要求用電儀器設備必須安全接地電源插座不得超載使用儀器設備在使用過程中出現(xiàn)短路保護時必須在查明斷電原因后再接通電源不準使用有用電安全隱患的設（如漏電電源插座破損、接地不良、絕緣不好等。儀器設備在使用過程中發(fā)生異常隨時記錄在儀器使用登記上維修必須由專業(yè)人員進行，并做維修記錄。儀器設備使用結束后，必須按日常保養(yǎng)進行檢查清理，保持良好狀態(tài)。高壓滅菌器使用時，每月做一次生物學指示劑檢測。所有儀器設備在維修和維護保養(yǎng)前，運出實驗室前必須進行消毒處理。7.生物安全實驗室廢物處理制度實驗耗材：BSL-2實驗室使用過的可能接觸病原體的感染性廢棄物統(tǒng)一放入生物安全柜內的自封袋中，并由工作人員在裝滿3/4前及時處理。鋒利尖銳的實驗耗材如廢棄針頭玻璃刀片等垃圾需收集在生物安全柜臺面上專門的利器盒中嚴禁亂放入其他的廢棄物收集桶中并由工作人員在裝滿2/3前及時處理。試驗過程中產生的未接觸病原體的廢棄物棄于生物安全柜下方的廢紙簍中。裝有感染性廢棄物的自封袋需經(jīng)高溫高壓滅菌后，套雙層專用病毒垃圾袋再帶出BSL-2實驗室并由實驗室工作人員帶到醫(yī)廢垃圾回收處由醫(yī)療廢棄物處理單位統(tǒng)一回收處理。裝盛固體垃圾的垃圾桶應用腳踏式或加蓋。7.2實驗廢液實驗過程中產生的廢液即可棄于廢液缸中也可通過真空泵吸走若棄于生物安全柜臺面上的廢液缸中缸中廢液不可超過2/3處理時加入一定量的84消毒液至顏色澄清或按4片/升消毒片投放有效氯濃度為2000mg/L再傾倒于廢水槽中。若將廢液通過真空泵吸至廢液瓶中不可讓廢液瓶內廢液過滿當廢液瓶內廢液達到約2/3滿時就需要清理廢液當干燥瓶內變色硅膠變?yōu)榧t色時就需要更換。8.意外事故處理及報告制度8.1實驗室發(fā)生病原體泄漏按照該種病原體的生物安全危害評估結果快速有效地對意外接觸人員進行緊急醫(yī)學處置。8.2對污染區(qū)進行有效控制最大限度的清除和控制污染物對周圍環(huán)境的的污染和擴散。8.3般性的小型事故可在緊急處置后立即向實驗室主任和所級中心管理委員（兼生物安全委員會報告事故情況和處理方法以及時發(fā)現(xiàn)處理中的疏漏之處，使處理盡量完善妥當。8.4當重大事故發(fā)生時在進行緊急處置的同時要立即向實驗室主任和所級中心管理委員（兼生物安全委員會報告情況實驗室主任和所級中心管理委員會（兼生物安全委員會）要立即協(xié)調現(xiàn)場緊急處理和周圍環(huán)境污染防控。8.5建立意外事故登記詳細記錄事故發(fā)生的時間地點及經(jīng)過暴露方式損傷程度，接觸物種類，處理方法及處理經(jīng)過等。9.消防及用電緊急預案消防滅火緊急預案發(fā)生火災時在場人員時刻牢記人員安全永遠大于實驗如果聽到樓內警報器響起時BSL-2實驗室內的所有人員必須撤離人員可通過緩沖間和更衣室撤離，也可通過緊急出口撤離。處理小范圍火勢時可使用BSL-2實驗室內的滅火器實驗室配備的消防器材為干冰滅火器，發(fā)生火災時不可用水滅火。報警早、損失小。及時通過有線或無線電話向火警“119”臺和保衛(wèi)處值班室報警，電話：54921723。報火警時要做到（1）沉著鎮(zhèn)定，不要掛錯電話，延誤時間（2講清著火單位的名稱地址如哪個部門什么位置和什么明顯標志（3燃燒的是什么物質起火部位火勢大小有無人員被困以及報警人的姓名單位和電話號碼以便及時聯(lián)系（4報警后應立即派人在路口等候，引導接應消防車進入火場滅火（5報警時應組織在場人員立即撲救火災和疏散人員、物資。救火時應告知消防員和其他服務人員存在的潛在感染性物質避免發(fā)生人員感染處理小范圍火勢時可使用BSL-2實驗室內的滅火器實驗室配備的消防器材為干冰滅火器，發(fā)生火災時不可用水滅火。發(fā)生火災時如有人員被火圍困要立即組織力量搶救應堅持救人第一，救人重于救火的原則，救人是火場上的首要任務?；饒鰧と朔椒ㄖ饕写舐暫魡竞蜕钊雰炔繉ふ覂煞N進入火場救人要選擇最近最安全的通道如通道被堵塞可迅速破拆門窗或墻壁遇有火場煙霧較濃視線不清時可以爬行前進并采取呼喊查看細聽觸摸等方法尋找被困人員。深入火場尋人，要注意在出入口通道、走廊、門窗邊、墻角、櫥柜、桌下等容易掩蔽的地方發(fā)現(xiàn)人員。救人時應注意安全進入火場要帶手電和繩子火場煙霧彌漫沒有防毒面具可用濕毛巾捂嘴防止中毒可用棉被毯子浸水后蓋在身上防止灼傷?；饒鼍热朔椒☉鶕?jù)火勢對人的威脅程度和被救者的狀態(tài)來確定對神志清醒的人員可指定通道引導他們自行脫離險區(qū)對在煙霧中迷失方向的人員可指派專人護送出險區(qū)當搶救的正常通道被隔斷時應利用安全繩梯等將人救出。火場疏散物資是減少火災損失控制火勢防止蔓延的有效方法首先要及時疏散受火災威脅的易燃易爆物品對不能移動的上述物品要集中一部分水源均勻地冷卻其外壁降低其溫度其次要疏散重要文件資料和貴重設備及物品等并把疏散出來的物資集中存放到安全地點指定專人看管防止丟失被竊或壞人乘機破壞人員物質疏散后應在指定地點集中清點并查明有關情況，及時向指揮部報告。停電應急程序發(fā)生有預告的停電時實驗室管理人員應在第一時間群發(fā)郵件提醒實驗人員，避免在停電時間段進入實驗室。發(fā)生突發(fā)停電時實驗室管理人員應立即向實驗室主任匯報并及時與后勤保障部聯(lián)系，協(xié)助排除故障。停電發(fā)生時正在實驗的人員應關閉所使用儀器的電源及時退出實驗室。同時禁止其他人再次進入實驗室。供電恢復后設備按照先后順序逐個開啟先啟動送排風機組后啟動空調系統(tǒng)。以免瞬間的高啟動電流引起設備故障。供電恢復后實驗室管理人員巡視檢查設備的運轉情況確認實驗室內溫度、壓差等參數(shù)恢復正常。實驗室管理人員做好相應記錄。10.感染性物質溢出處理感染性或潛在感染性物質溢出生物安全柜內發(fā)生小范圍的病毒液體潑濺立刻停止實驗，保持生物安全柜的開啟狀態(tài)處理溢出物時切勿把頭伸入生物安全柜中根據(jù)感染物質的特性選用合適的消毒劑，傾倒于紙巾上，并立即覆蓋周圍區(qū)域（通?？梢允褂?4消毒液。使用消毒劑時，從溢出區(qū)域的外圍開始，朝向中心進行處理。作用適當時間（例如30min將所處理物質清理掉若使用含氯的消毒劑時需要再使用70%的乙醇將臺面擦干凈以免造成對于臺面的腐蝕最后將污染材料置于防漏、防穿透的廢棄物處理盒中，最后高壓滅菌。如果含有碎玻璃或其他銳器，則要使用鑷子簸箕或硬的厚紙板來收集處理過的物品并將它們置于可防刺透的容器中以待處理切勿直接用手進行操作工作面消毒后應更換手套并且無論是摘下手套還是更換手套都要洗手。生物安全柜內發(fā)生較大范圍的病毒溢灑，停止實驗，立即通知管理員。液體會通過生物安全柜前面或后面的格柵流到下面去生物安全柜內所有的物品都應該進行表面消毒后拿出生物安全柜確保生物安全柜的排水閥被關閉后將消毒液倒在工作臺面上使液體通過格柵留到排水盤內所有接觸過溢出物品的材料都要進過消毒或高壓滅菌處理生物安全柜內部進行全面的消毒并且紫外照射1小時。實驗室發(fā)生大范圍病毒泄露在生物安全柜外的事故請立即聯(lián)系管理員，緊急疏散所有在BSL-2的實驗人員聯(lián)系方式見實驗室內和大門口管理人員立即關閉實驗室30分鐘后進行消毒處理，并在門口設置嚴禁入內的警示標語。管理人員將對污染區(qū)域用紙巾或棉墊將污染液吸干，并且15%的84液從外向中心濕拖，保持20分鐘。所有污染的物品均丟棄至黃色垃圾袋中。紫外照射房間1小時后，再開放。在成功消毒后，對所級中心管理委員會（兼生物安全委員會）進行事故報告，并且告知關于溢出區(qū)域的污染情況及清除污染工作過程。病毒液體接觸到皮膚脫掉污染的手套或者其他防護物，立即用含75%乙醇消毒液或碘酒的棉球擦拭，切不可用8415分鐘。如果遇到針頭扎傷或者刀片割傷時，第一時間處理傷口，應立即用力捏住受傷部位向離心方向擠出傷口的血液不可來回擠壓同時用流動水清洗傷口，至少15分鐘。若感染性物質意外進入眼睛、口腔，立即用大量流動清水或生理鹽水沖洗，至少15分鐘。病毒污染眼部或眼睛周圍立刻用洗眼器或洗眼液沖洗眼部至少15分鐘，并到醫(yī)院開具抗病毒眼藥水。經(jīng)簡