畢業(yè)論文-延胡索酸二鈉對斷奶羔羊小腸發(fā)育情況的影響

1/1畢業(yè)論文--延胡索酸二鈉對斷奶羔羊小腸發(fā)育情況的影響延胡索酸二鈉對斷奶羔羊小腸發(fā)育情況的影響王婷，潘曉亮*，王新峰*，賴瀚卿1（石河子大學(xué)動物科技學(xué)院，新疆石河子，832000）關(guān)鍵詞：

延胡索酸二鈉；絨毛高度；隱窩深度；絨毛高度/隱窩深度摘要：

【目的】旨在探討延胡索酸二鈉對不同腸段內(nèi)環(huán)境的影響。

【方法】選用30只試驗(yàn)羊，隨機(jī)分為3組，每組10只。

對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組在基礎(chǔ)日糧基礎(chǔ)上添加0.5%和1%的延胡索酸二鈉，試驗(yàn)期60天。

【結(jié)果】實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：

（1)與對照組相比，添加延胡索酸二鈉組的小腸絨毛高度均顯著高于對照組(P0.05)，其中添加0.5%的延胡索酸二鈉組的十二指腸、空腸、回腸的腸絨毛高度分別增加了30.3%、30.1%、45.9%；(2)添加0.5%和1%的延胡索酸二鈉隱窩深度（十二指腸和空腸）小于對照組(P0.05)，回腸則是大于對照組；(3)添加了延胡索酸二鈉組的十二指腸V/C值明顯大于對照組(P0.05)，其中0.5%的添加量效果最好（V/C值增加了58.6%)，1%次之,其他各組之間差異不顯著(P0.05)。

【結(jié)論】延胡索酸二鈉可以影響羔羊腸道的發(fā)育。

TheInfluenceOfDisodiumFumarateOnTheSmallIntestinalVillusHeightAndCryptDepthinweaninglambsWANGTing1，PANXiao-liang1*，WANGXin-feng1*，LaiHanqing1(1.DepartmentofAnimalScienceAndTechnology,ShiheziUniversity,Shihezi832000)Keywords:DF（disodiumfumarate）;Villusheight;Cryptdepth;V/C(villusheight/cryptdepth)Abstract：

Itsaimedtoinvestigatetheinfluenceofdisodiumfumarate(DF)onthesmallintestinaldevelopmentoflambs.Thirtysheepwereselectedandrandomlydividedintothreegroups,tensheepeachgroup.Thecontrolgroupwasfedabasaldiet,theexperimentalgroupwith0.5%and1%DFaddedonbasicdiet,theexperimentalperiodof60days.Theresultsshowthat:(1)Comparewiththecontrolgroup,DFgroupeachsegmentvillusheightweresignificantlyhigherthanthecontrolgroup(P0.05),with0.5%DFtheduodenum,jejunumandileumvillusheightwereincreasedby30.3%,30.1%and45.9%;(2)With0.5%and1%DFthecryptdepth(duodenumandjejunum)werelessthanthecontrolgroup(P0.05),theileumdepthisshallowerthanthecontrolgroup;(3)AddDFduodenumV/Cwassignificantlyhigherthanthecontrolgroup(P0.05),addtheamountof0.5%wasthebest(V/Cwereincreased58.6%),withadd1%wasthesecond,Thedifferencesbetweentheothergroupswasnotsignificant(P0.05)這段英文語法好1基金項(xiàng)目：

石河子大學(xué)高層次人材專項(xiàng)（RCZX201203）和(RCZX201102)；兵團(tuán)綿羊重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放課題（2013KLS04）；自然基金項(xiàng)目（31360558）作者簡介：

王婷（1990-），女，新疆石河子人，碩士，研究方向：

飼料資源開發(fā)利用，(E-mail)wangting14900@sina.com*通訊作者:潘曉亮（1960-），男，江蘇丹陽人，博士，教授，研究生導(dǎo)師，主要從事動物營養(yǎng)與環(huán)境調(diào)控研究，（E-mail）shz_panxiaoliang@王新峰（1971-），男，河南駐馬店人，副教授，研究生導(dǎo)師，主要從事動物營養(yǎng)飼料與腸道微生物研究，（E-mail）wxf@像不是很對.Thesedatasuggestthat,theDFcanaffectthedevelopmentoflambsintestinaltract.引言有機(jī)酸及其鈉鹽作為食品添加劑和調(diào)味劑應(yīng)用已經(jīng)十分普遍，如醋酸，蘋果酸及鹽酸，檸檬酸等。

但作為動物的飼料添加劑還比較少見，因?yàn)楫?dāng)今營養(yǎng)學(xué)家們還沒有完全發(fā)現(xiàn)有機(jī)酸在動物營養(yǎng)中所起作用的原理。

最新研究表明，延胡索酸等有機(jī)酸[1、2]可改善反芻動物的瘤胃發(fā)酵，它可以維持pH值的穩(wěn)定和降低乳酸的產(chǎn)量，有機(jī)酸可促進(jìn)乳酸利用菌的生長，使乳酸的利用增加，促進(jìn)其對乳酸的利用，增加二氧化碳的產(chǎn)生量，提高瘤胃內(nèi)pH值，而且能促進(jìn)纖維素分解菌的增殖及對纖維素的消化，對提高生產(chǎn)性能有重要意義。

因此，延胡索酸可能是一種有益的反芻動物飼料添加劑。

但是延胡索酸具有一定的酸性，添加后會降低瘤胃內(nèi)的初始pH。

由于pH值是瘤胃內(nèi)重要的生化指標(biāo)，過酸的環(huán)境極易導(dǎo)致瘤胃微生態(tài)失衡從而導(dǎo)致瘤胃酸中毒。

而延胡索酸二鈉鹽屬于堿性物質(zhì)則對瘤胃內(nèi)環(huán)境具有一定的緩沖作用，不會引起pH的顯著降低。

所以延胡索酸二鈉作為飼料添加劑比延胡索酸更為合適。

作為飼料添加劑，DF對綿羊瘤胃微生物的作用研究的不夠深入，對瘤胃的影響的報道也不一致，對羔羊腸道發(fā)育影響尚未見報道。

本實(shí)驗(yàn)通過研究DF對斷奶羔羊不同腸段發(fā)育情況的影響，為今后廣泛運(yùn)用DF作為飼料添加劑提供科學(xué)理論依據(jù)。

這段行間距有問題1材料方法1.1試驗(yàn)材料1.1.1試驗(yàn)材料延胡索酸二鈉購自陜西交大瑞森渭南化學(xué)工業(yè)有限責(zé)任公司純度98%1.1.2試驗(yàn)地點(diǎn)新湖總場農(nóng)場大西北畜牧有限公司種羊場。

1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)選取體況體重及年齡相近的薩?？撕团c德美雜交一代羔羊30只，60天左右斷奶，將其隨機(jī)分為3組（即對照組和2個試驗(yàn)組,每組10只），試驗(yàn)時間為60天，自由飲用清潔水。

對照組I飼喂不添加DF的基礎(chǔ)日糧；試驗(yàn)組II飼喂0.5%DF添加量的日糧（在風(fēng)干日糧基礎(chǔ)上添加）；試驗(yàn)組III飼喂1%添加量的日糧；試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1，本試驗(yàn)所使用的飼料配方及營養(yǎng)成分見表2。

表1試驗(yàn)設(shè)計(jì)日糧DF添加量試驗(yàn)動物/只對照組基礎(chǔ)日糧100.5%組基礎(chǔ)日糧+0.5%101%組基礎(chǔ)日糧+1%10表2本試驗(yàn)飼料配方及營養(yǎng)成分表混合飼料成分（%）月齡1~2月齡（前期料）3~4月齡（后期料）玉米粉3525苜蓿粉450玉米青貯070精料補(bǔ)充料154其他51日糧營養(yǎng)水平（%）粗蛋白（CP）15.0111.03總鈣（Ca）1.360.71總磷(P)0.330.29中性洗滌纖維（NDF）22.129.3酸性洗滌纖維（ADF）19.924.5粗脂肪6.135.53注：

精料補(bǔ)充料是用呼圖壁縣華峰農(nóng)牧科技有限責(zé)任公司生產(chǎn)的新望華峰牌顆粒飼料。

其他包括飼料添加劑、棉籽殼、棉粕、干草、無機(jī)鹽等。

1.3樣品的采集和處理試驗(yàn)第70天，每組隨機(jī)選擇4只，共計(jì)12只試驗(yàn)羔羊，頸靜脈放血處死，迅速取出十二指腸、空腸及回腸各3厘米左右。

使用0.9%的生理鹽水輕輕沖洗干凈后，分別浸入4%的多聚甲醛溶液中固定，留待檢測不同腸段絨毛高度和隱窩深度2試驗(yàn)方法2.1試驗(yàn)藥品[5]。

4%多聚甲醛、PBS緩沖液、各濃度乙醇（75%、85%、95%、100%I、100%II）、無水乙醇二甲苯（無水乙醇與二甲苯的比例為1：

1）、二甲苯、軟蠟（46～48℃）、硬蠟（54～56℃）、蘇木素（MAIXIN-BIO）、伊紅、氨水、0.5%鹽酸酒精。

2.2組織學(xué)方法立即切取小腸組織塊放入4%的福爾馬林溶液中固定。

按常規(guī)組織學(xué)方法，經(jīng)過75%、85%、95%、100%I、100%II無水乙醇的各濃度乙醇逐級脫水，用二甲苯透明、軟蠟透蠟、硬蠟包埋、修塊、切片（厚度為5-6m），貼片、烤片，最后進(jìn)行H.E.染色。

利用光學(xué)顯微鏡對組織切片進(jìn)行觀察，并用Motic-Image-advanced3.2圖像處理軟件測小腸粘膜結(jié)構(gòu)的指標(biāo)。

具體步驟如下：

A組織塊置固定液中固定24小時h95%后，取出經(jīng)流水沖洗24小時B組織塊經(jīng)梯度酒精脫水：

70%酒精6-12h80%酒精6-12h90%酒精6-12h95%酒精4-6h100%酒精I(xiàn)1h100%酒精I(xiàn)I1hC透明：

二甲苯I1015min二甲苯II10-15minD浸蠟：

依次從脫水柵欄中取出組織放入提前融好蠟的蠟缸中浸蠟2hE包埋：

準(zhǔn)備干凈的燒杯融化適當(dāng)?shù)南瀴K，將組織塊從蠟缸中取出，依次放入疊好的紙盒中，并迅速將融好的蠟液倒入紙盒中，確保組織塊在蠟液中不改變位置和方向。

冷凝成蠟條后，修整蠟塊（呈梯形，貼標(biāo)簽）F切片：

用旋轉(zhuǎn)切片機(jī)連續(xù)切片，厚度為4-7微米，切出一片接一片的蠟帶；G貼片與烤片：

用粘附劑（蛋白甘油）。

首先在潔凈的載玻片上涂抹薄層蛋白甘油，再將一定長度蠟帶或用刀片斷開成單個蠟片于溫水（＜42℃左右）中展平后，撈至玻片上鋪正，將載玻片放入45℃溫箱中干燥，但是需要適當(dāng)?shù)难娱L時間（3h左右）。

2.3染色2.3.1H.E染色（Hematoxylin和Eosin）的目的染色的目的是使細(xì)胞組織內(nèi)的不同結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)不同的顏色以便于觀察。

本研究的目的是測定出羔羊小腸絨毛高度和隱窩深度。

這段沒必要2.3.2H.E染色步驟常規(guī)H.E染色，操作步驟為：

（1）脫蠟：

室溫條件下，切片于二甲苯（Ⅰ）5min二甲苯（Ⅱ）5min（2）過渡：

乙醇二甲苯（1：

1）混合液中2～3min（3）梯度乙醇水化：

于無水乙醇（Ⅰ）2min無水乙醇（Ⅱ）2min95%乙醇2min90%乙醇2min85%乙醇2min70%乙醇2min（4）染色：

切片置于蘇木素染色5～10min后，立即用水沖洗數(shù)次以洗去多余染料（5）分化：

鹽酸酒精快速分化5～10s，以鏡檢為準(zhǔn)(6)堿化：

侵入自來水20min，使切片逐漸變?yōu)樗{(lán)色；0.5%-1%伊紅液中染色，35min,自來水沖洗數(shù)遍（7）依次浸入75%乙醇85%乙醇95%乙醇均為1-2min無水乙醇（Ⅰ）無水乙醇（Ⅱ）乙醇二甲苯（1：

1）混合液分別為2～3min（8）組織切片透明：

二甲苯（Ⅰ）5min二甲苯（Ⅱ）5min（9）中性樹膠封片，顯微鏡下觀察試驗(yàn)方法沒必要太詳細(xì)2.4主要監(jiān)測指標(biāo)和方法2.4.1主要檢測指標(biāo)觀察和比較羔羊小腸形態(tài)和結(jié)構(gòu)的變化情況。

應(yīng)用Motic-Image-advanced3.2圖像處理軟件，各段小腸取5張切片，每張切片選5個視野拍照，每張照片測量5根最長的腸絨毛高度(以腸腺絨毛連接處到絨毛頂端為準(zhǔn))、最深的隱窩深度(以腸腺絨毛連接處到腸腺基部為準(zhǔn))。

2.4.2測量方法和數(shù)據(jù)處理分析光鏡下詳細(xì)觀察和計(jì)數(shù)每組羔羊的十二指腸、空腸、回腸的絨毛高度和隱窩深度。

具體檢測方法是：

①取每根腸管橫切面，選5根最長且排列整齊的絨毛測量每個腸絨毛的長度；②取每根腸管橫切面，測量標(biāo)準(zhǔn)跟腸絨毛的標(biāo)準(zhǔn)一樣。

所得數(shù)據(jù)使用SPSS13.0軟件包進(jìn)行One-Way-ANOVA分析。

結(jié)果以平均值標(biāo)準(zhǔn)誤表示，P0.05為差異顯著，P0.01為差異極顯著。

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1H.E染色圖片如圖所示，分別為70日齡羔羊小腸（回腸、空腸、十二指腸）對照組、添加0.5%DF組和1%DF組的H.E染色(410倍光鏡)下的絨毛形態(tài)圖。

小腸壁的內(nèi)表面有大量的環(huán)形皺襞，皺襞上有許多絨毛狀的突起，叫小腸絨毛,其高度稱為絨毛高度圖中用字母A表示。

小腸隱窩是絨毛根部上皮陷入固有層形成的管狀腺，開口于相鄰絨毛之間，其深度稱為隱窩深度圖中用字母B表示。

對照組0.5%DF組1%DF組3.2對十二指腸、空腸、空腸發(fā)育的影響表370日齡各組羔羊的絨毛高度、隱窩深度項(xiàng)目對照組絨毛高度（um）V393.5751.20隱窩深度（um）C451.7658.71V/C0.870.45絨毛高度（um）隱窩深度（um）V/C0.930.07回腸絨毛高度327.026.820.5%1%十二指腸a512.8017.99b492.5346.51ba372.4428.78a368.1429.62bA1.380.66B1.340.33B空腸365.9814.55a478.0865.69b494.6165.84b395.2540.10a293.9524.18b374.2836.36aaa1.640.32477.9283.44b1.330.25380.6032.19aab圖370日齡回腸HE染色(410倍光鏡)圖270日齡空腸HE染色（410倍光鏡）圖170日齡十二指腸HE染色(410倍光鏡)（um）隱窩深度（um）V/C311.9965.28367.7457.58308.7725.071.070.191.300.121.240.04注：

大寫字母表示差異極顯著（p0.01),小寫字母表示顯著性差異（p0.05),同一行中，不同字母表示差異顯著，相同字母表示差異不顯著。

3.2.1十二指腸的發(fā)育絨毛高度由上表分析可知，添加0.5%和1%的DF與對照組相比差異均顯著（P0.05)，以0.5%效果最好，腸絨毛高度增加了30.3%。

隱窩深度添加1%的DF與對照組相比差異顯著（P0.05)，隱窩深度減少了18.4%。

添加量為0.5%時差異不顯著（P0.05)。

V/C添加0.5%和1%的DF與對照組相比差異極顯著（P0.01)，其中以添加量為0.5%效果最好。

論文不能這么列，最好刪掉3.2.2空腸的發(fā)育絨毛高度由上表分析可知，添加0.5%和1%的DF與對照組相比差異均顯著（P0.05)，以0.5%效果最好，腸絨毛高度增加了30.1%。

隱窩深度添加0.5%的DF與對照組相比差異顯著（P0.05)，隱窩深度減少了25.8%。

添加量為1%時差異不顯著（P0.05)。

V/C添加0.5%的DF與對照組相比差異顯著（P0.05)，其中以添加量為0.5%效果最好，添加量為1%時效果次之。

。

3.2.3回腸的發(fā)育絨毛高度添加0.5%的DF與對照組相比差異顯著（P0.05)，以0.5%效果最好，腸絨毛高度增加了45.9%。

1%效果次之。

隱窩深度添加1%和0.5%的DF與對照組相比差異均不顯著（P0.05)，但以添加量為0.5%時效果最好，隱窩深度減少了18.0%，1%效果次之。

V/C添加0.5%和1%的DF與對照組相比差異均不顯著（P0.05)。

4討論腸絨毛(intestinalvillus)是由腸上皮和固有層共同向腸腔突出形成的細(xì)小突起，長約0.35～1mm，可使腸腔表面積擴(kuò)大約10倍，絨毛多呈柱狀、葉狀或指狀等[11、17]。

腸絨毛高度的增加能夠使小腸吸收營養(yǎng)物質(zhì)的面積增大，腸絨毛的完整性及高度決定了小腸的吸收面積，影響營養(yǎng)物質(zhì)的吸收及動物的生長。

關(guān)于不同種添加劑對腸絨毛高度的應(yīng)用報道也有不少，張運(yùn)濤等[12]報道，在蛋用仔雞日糧中添加酵母多糖，可以明顯保護(hù)雛雞小腸絨毛。

周瓊等[13、14]報道，美洲大蠊粉可使發(fā)生病理變化的小鼠腸黏膜及絨毛修復(fù)完好，并提高肉雞的腸絨毛高度。

張玲等[15]報道，鯽魚中添加木聚糖酶能提高鯽魚的腸絨毛高度，以0.05%的添加量最好。

本實(shí)驗(yàn)得出，添加量為0.5%的DF組的腸絨毛高度明顯高于對照組(P0.05)。

十二指腸、空腸、回腸的腸絨毛高度分別增加了30.3%、30.1%、45.9%。

說明DF具有促進(jìn)腸絨毛生長發(fā)育的功能，但機(jī)理尚有待進(jìn)一步研究。

小腸隱窩可促進(jìn)小腸的吸收功能。

該試驗(yàn)中可以明顯的看出DF組隱窩深度（十二指腸和空腸）小于對照組(P0.05)，雖然回腸在統(tǒng)計(jì)上差異不顯著,但添加1%的DF組隱窩深度比對照組小。

代兵等[16]（2011）對斷奶7日齡的仔豬腸道切片進(jìn)行了觀察，結(jié)果表明斷奶后7日齡，仔豬十二指腸和空腸絨毛高度較對照組有顯著升高，并且顯著降低了十二指腸和空腸隱窩深度，這說明在斷奶后早期，日糧中的谷氨酰胺對仔豬小腸細(xì)胞增殖和維持腸道正常形態(tài)具有重要作用。

王書平等[17]（2009）在研究谷氨酰胺在體內(nèi)的代謝過程及調(diào)控機(jī)制時發(fā)現(xiàn)，谷氨酰胺在體內(nèi)的生物合成與谷氨酸相同，其主流為葡萄糖轉(zhuǎn)化為丙酮酸，然后經(jīng)三羧酸循環(huán)轉(zhuǎn)變?yōu)閍-酮戊二酸再合成谷氨酸，谷氨酸再與氨合成谷氨酰胺。

而本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明日糧中添加DF可以增加小腸絨毛高度，降低隱窩深度。

其可能的機(jī)制為，延胡索酸是三羧酸循環(huán)的中間產(chǎn)物，日糧中添加一定量的延胡索酸有助于提高三羧酸循環(huán)的速度并且增加a-酮戊二酸的合成，最終使谷氨酰胺的合成增加。

絨毛高度/隱窩深度的比值(V/C值)隱窩是腸壁的凹陷，絨毛是腸壁的凸起，隱窩深度增加會減弱營養(yǎng)物質(zhì)的吸收能力，絨毛高度增加才會增強(qiáng)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收能力，這些都是反映小腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)及功能最直接的指標(biāo)[18]。

V/C值綜合反映小腸的功能狀態(tài)，比值下降，表示消化吸收功能下降。

比值上升，消化吸收功能增強(qiáng)。

該實(shí)驗(yàn)中添加DF組的十二指腸V/C值明顯大于對照組。

這一結(jié)果與張祥[19]（2007）的研究報道一致。

綜上所述，在飼料中添加一定量的DF能夠增加腸絨毛高度，降低隱窩深度，增加V/C值，從而改善腸道的生長發(fā)育。

5結(jié)論與對照組相比，添加延胡索酸二鈉組的小腸絨毛高度均顯著高于對照組(P0.05)，其中添加0.5%的延胡索酸二鈉組的十二指腸、空腸、回腸的腸絨毛高度分別增加了30.3%、30.1%、45.9%；添加0.5%和1%的延胡索酸二鈉隱窩深度（十二指腸和空腸）小于對照組(P0.05)，回腸隱窩深度則是大于對照組；添加了延胡索酸二鈉組的十二指腸V/C值明顯大于對照組(P0.05)，其中0.5%的添加量效果最好（V/C值增加了58.6%)，1%效果次之,其他各組之間差異不顯著(P0.05)。

即添加0.5%和1%的DF，對羔羊的腸道發(fā)育有明顯的改善作用，這一結(jié)果為今后廣泛運(yùn)用DF作為羔羊飼料添加劑提供了科學(xué)理論依據(jù)。

腸道發(fā)育可直接影響到羔羊的生長發(fā)育，尤其是剛斷奶的羔羊，消化系統(tǒng)發(fā)育不完善，過早的食用草料容易引起羔羊腹瀉等不良癥狀，影響其生長發(fā)育。

日糧中添加DF能促進(jìn)斷奶羔羊消化系統(tǒng)微生物的構(gòu)建，緩解一些不良癥狀結(jié)論再編一點(diǎn)參考文獻(xiàn)[1]李海英，劉志強(qiáng)，鄭文新，等.添加延胡索酸二鈉對絨山羊消化代謝的影[J].新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，49，2：

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