植物生理學(xué)-實驗三植物光合速率測定

實驗3-1紅外線CO2氣體分析儀（CB-1101）法測定植物光合速率2021/6/71一、實驗?zāi)康睦斫庵参锕夂纤俣葴y定的方法掌握紅外線CO2分析儀測定植物光合速率的原理了解紅外線CO2分析儀的操作方法2021/6/72本實驗利用CO2的變化來測定。2021/6/73二、實驗原理

許多由異原子組成的氣體分子對紅外線都有特異的吸收帶。CO2的紅外吸收帶有四處，其吸收峰分別在2.69μm、2.77μm、4.26μm和14.99μm處，其中只有4.26μm的吸收帶不與H2O的吸收帶重疊，紅外儀內(nèi)設(shè)置僅讓4.26μm紅外光通過的濾光片，當(dāng)該波長的紅外光經(jīng)過含有CO2的氣體時，能量就因CO2的吸收而降低，降低的多少與CO2的濃度有關(guān)，并服從朗伯-比爾定律。分別供給紅外儀含與不含CO2的氣體，紅外儀的檢測器便可通過檢測紅外光能量的變化而輸出反映CO2濃度的電訊號。2021/6/74采用開放式氣路系統(tǒng)：該系統(tǒng)用雙氣室IRGA,以氣泵為動力，將流經(jīng)同化室前的空氣（參比氣）泵入一個氣室，流經(jīng)同化室后的空氣（樣本氣）泵入另一個氣室（分析氣室），最后將氣體排空，由儀器指示參比氣和樣本氣的CO2濃度差，根據(jù)流量、同化室中葉片的面積，求出葉片的光合速率。泵流量計

進氣樣品IRGA（C2）參比IRGA(C1)葉室參比室排氣2021/6/75植物材料：小白菜或者甘藍型油菜儀器：CB-1101紅外線CO2氣體分析儀三、材料與主要儀器2021/6/76CB-11012021/6/77CB-1101操作面板及氣路圖2021/6/78四、實驗步驟1、儀器組裝及調(diào)零：，打開電源預(yù)熱5min→打開氣泵開關(guān)→用堿石灰管分別連接面板上的“OUT”和“IN”。利用CO2調(diào)零調(diào)試儀器。2、樣品測定：將葉片正確放入葉室，并封閉葉室。

打開開路開關(guān)→按下初測按鈕→待數(shù)值穩(wěn)定后按下測終按鈕→待數(shù)值穩(wěn)定后按下完成按鈕→記錄測定結(jié)果【需要記錄起始CO2濃度C1、測定完成后CO2濃度C2，葉面溫度t，氣體流速V】2021/6/79五、原始記錄V，C1，C2，

S，tV為氣體流速，單位L/min;C1，C2為測定啟始和反應(yīng)完成后的CO2濃度，單位μL/L；S為光合測定的葉面積，單位為m2，本實驗固定為6.5×10-4m2

；P為氣壓，單位bar；t為同化室葉片表面溫度，單位℃。

S2021/6/710六、結(jié)果計算Pn-凈光合速率（單位為μmol·m-2·s-1）2021/6/711七、分析討論1、測定時為何需要從高空采氣？2、計算的結(jié)果為凈光合速率，為什么？3、本方法是否可以用于測定植物的呼吸速率，如果要測定呼吸速率操作過程中應(yīng)注意什么？4、如果要測定植物的實際光合速率，應(yīng)如何操作？5、結(jié)合自已的植物光合速率結(jié)果進行分析討論。

2021/6/712實驗3-2葉綠素含量的測定一、實驗?zāi)康亩?、實驗原?、吸光度具有加和性：混和溶液在某一波長下的吸光度為各組分在該波長下吸光度之和。不同組分在某波長下具有不同的吸光系數(shù)。2021/6/7132、葉綠素在紅光區(qū)具有最大吸收峰，但在不同溶劑下有不同的最大吸收峰波長在95%乙醇中，葉綠素a和葉綠素b的最大吸收峰的波長分別為665nm和649nm，兩者的濃度可根據(jù)以下方程組計算求得：Ca=13.95A665—6.88A649Cb=24.96A649—7.32A6652021/6/714三、實驗材料與儀器實驗材料：小白菜葉片或油菜葉片主要儀器：分光光度計2021/6/715四、實驗步驟

稱取葉片0.05～0.1g，剪碎或撕碎后放入10mL刻度試管中，加入5～6mL95%乙醇，置80℃水浴鍋中，至組織完全變白，取出冷卻。用95%乙醇定容至10mL，搖勻。以95%乙醇為空白，在波長665nm、649nm下測定吸光度。2021/6/716五、原始數(shù)據(jù)記錄A665，A649，W，V

2021/6/717六、結(jié)果計算Ca(mg/L)

=13.95A665

—6.88A649

Cb(mg/L)=24.96A649

—7.32A665葉綠素總濃度(mg/L)=Ca+Cb葉綠素的比值=Ca÷Cb葉綠素的含量

(mg/g)

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