線性范圍評(píng)估指南課件學(xué)習(xí)教案

會(huì)計(jì)學(xué)1線性范圍評(píng)估指南前言線性范圍評(píng)估資料是評(píng)價(jià)擬上市產(chǎn)品有效性的重要依據(jù)，也是產(chǎn)品注冊(cè)所需的重要申報(bào)資料之一依據(jù)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法（試行）》、《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)---定量測(cè)定方法的線性評(píng)價(jià)》的有關(guān)要求，參考CLSI有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)第1頁(yè)/共27頁(yè)線性范圍評(píng)估的基本原則實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)熟悉方法原理與操作，能對(duì)樣本進(jìn)行正確處理，確保儀器工作狀態(tài)正常，采用適當(dāng)?shù)男?zhǔn)品對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)。儀器的各項(xiàng)性能指標(biāo)（如精密度）應(yīng)與標(biāo)稱值相符，不存在明顯的攜帶污染等。應(yīng)使用同批號(hào)試劑及校準(zhǔn)品。第2頁(yè)/共27頁(yè)線性范圍的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法實(shí)驗(yàn)樣本的基本要求樣本基質(zhì)應(yīng)與臨床實(shí)驗(yàn)樣本相似，但不可采用含有對(duì)測(cè)定方法具有明確干擾作用物質(zhì)的樣本，如溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣本。進(jìn)行血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)時(shí)，理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測(cè)定上限的混合人血清。建立一種定量測(cè)定方法的線性范圍時(shí)，需在預(yù)期測(cè)定范圍內(nèi)選擇7-11個(gè)濃度水平。如將預(yù)期測(cè)定范圍加寬至130%，在此范圍內(nèi)選擇更多的濃度水平，然后依據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果逐漸減少數(shù)據(jù)點(diǎn)直至表現(xiàn)出線性關(guān)系，可發(fā)現(xiàn)最寬的線性范圍。第3頁(yè)/共27頁(yè)線性范圍的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法實(shí)驗(yàn)樣本的基本要求對(duì)標(biāo)稱線性參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證時(shí)，需在已知線性范圍內(nèi)選擇5-7個(gè)濃度水平。無論是建立或驗(yàn)證線性范圍，所選用的濃度水平應(yīng)可覆蓋整個(gè)預(yù)期測(cè)定范圍并包括與臨床有關(guān)的重要評(píng)價(jià)濃度，如最小測(cè)定濃度或線性范圍的最低限、不同的醫(yī)學(xué)決定水平、最大測(cè)定濃度或線性范圍的高限等。第4頁(yè)/共27頁(yè)線性范圍的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法實(shí)驗(yàn)樣本的制備方法不同濃度水平的樣本可通過將高濃度樣本與低濃度樣本進(jìn)行倍比稀釋得到，注意在進(jìn)行液體吸取時(shí)應(yīng)選擇精密度與準(zhǔn)確性好的移液裝置。制備時(shí)應(yīng)將樣本完全混合并避免蒸發(fā)或其他使樣本變質(zhì)的情況。每份樣本的濃度與體積單位應(yīng)統(tǒng)一。如果高/低濃度血清的值未知，可將每種血清編碼，用編碼代表每個(gè)血清的相對(duì)濃度。對(duì)于等濃度間隔樣本，可用連續(xù)整數(shù)（如1、2、3、4、5）代表連續(xù)樣本。進(jìn)行數(shù)據(jù)處理時(shí)可用樣本號(hào)代替X值。第5頁(yè)/共27頁(yè)線性范圍的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法實(shí)驗(yàn)樣本的制備方法樣本號(hào)123456低濃度血清(ml)1.000.900.800.700.600.50高濃度血清(ml)0.000.100.200.300.400.50樣本號(hào)7891011低濃度血清(ml)0.400.300.200.100.00高濃度血清(ml)0.600.700.800.901.00第6頁(yè)/共27頁(yè)線性范圍的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法實(shí)驗(yàn)樣本的制備方法樣本號(hào)12345低濃度血清(ml)1.000.750.500.250.00高濃度血清(ml)0.000.250.500.751.00第7頁(yè)/共27頁(yè)線性范圍的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法實(shí)驗(yàn)樣本的制備方法樣本的特殊處理：在無法得到適用的人血清時(shí)，需對(duì)樣本進(jìn)行一些特殊處理以滿足實(shí)驗(yàn)要求。這些處理過程包括稀釋、加入添加物或透析、熱處理等，無論進(jìn)行何種處理均應(yīng)以保持基質(zhì)恒定為基本原則。在評(píng)價(jià)報(bào)告中應(yīng)對(duì)所使用的稀釋液、添加物、溶劑等的材料來源加以注明。樣本稀釋液應(yīng)選用由廠家推薦或經(jīng)實(shí)驗(yàn)室證明可使用的產(chǎn)品，如可采用5%牛血清白蛋白或人白蛋白溶液。欲提高樣本濃度時(shí)可在樣本中添加分析物純品。在添加物為溶液狀態(tài)時(shí)，應(yīng)注意添加液體對(duì)樣本的稀釋作用（小于10%）并注明所用溶劑第8頁(yè)/共27頁(yè)線性范圍的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法實(shí)驗(yàn)過程建立線性范圍：需測(cè)定9-11個(gè)濃度水平，每個(gè)濃度水平重復(fù)測(cè)定3-4次。驗(yàn)證標(biāo)稱線性參數(shù)：需測(cè)定4-6個(gè)濃度水平，每個(gè)濃度水平重復(fù)測(cè)定3-4次。所有樣本應(yīng)在一次運(yùn)行中或幾次間隔很短的運(yùn)行中隨機(jī)測(cè)定，最好在一天之內(nèi)完成第9頁(yè)/共27頁(yè)線性范圍的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法數(shù)據(jù)記錄項(xiàng)目：樣品：儀器：試劑/批號(hào)：校準(zhǔn)品/批號(hào)：操作者：審核者：測(cè)定日期：樣本號(hào)測(cè)定1測(cè)定2測(cè)定3測(cè)定4均值1234567891011第10頁(yè)/共27頁(yè)線性范圍的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法數(shù)據(jù)可用性檢查可通過繪制散點(diǎn)圖對(duì)測(cè)定數(shù)據(jù)的可用性進(jìn)行初步檢查。以樣本號(hào)或樣本濃度為X軸，以測(cè)定結(jié)果為Y軸做圖，在圖上標(biāo)出針對(duì)每個(gè)樣本的測(cè)定值及每個(gè)濃度水平的測(cè)定均值，手工或用計(jì)算機(jī)做圖將均值點(diǎn)相連觀察數(shù)據(jù)點(diǎn)與直線間的偏差，如偏差過大，表明數(shù)據(jù)組存在明顯非線性，需要對(duì)測(cè)定過程進(jìn)行檢查，排除因操作錯(cuò)誤所至誤差，并對(duì)樣本進(jìn)行重新測(cè)定。如圖形與直線接近，表明可對(duì)數(shù)據(jù)組繼續(xù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。第11頁(yè)/共27頁(yè)線性范圍的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法剔除離群值離群值可由散點(diǎn)圖初步判斷，標(biāo)準(zhǔn)中建議采用格拉布斯（GRUBBS）法進(jìn)行離群值檢驗(yàn)。檢驗(yàn)步驟如下:每組數(shù)據(jù)中有4個(gè)測(cè)定結(jié)果，將4個(gè)測(cè)定值按大小順序排列,最大值記為max,最小值記為min;計(jì)算均值和標(biāo)準(zhǔn)差S，根據(jù)可疑值max或min分別按下式計(jì)算統(tǒng)計(jì)量t:t1=(max-均值)/S，t2=(min-均值)/S根據(jù)給定的顯著性水平a和重復(fù)測(cè)定次數(shù)查表得臨界值;如t值大于臨界值，則相應(yīng)的可疑值為離群值。第12頁(yè)/共27頁(yè)線性范圍的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法剔除離群值：Grubbs檢驗(yàn)臨界值(Ta)值表樣本數(shù)顯著性水平樣本數(shù)顯著性水平30.050.0250.010.00540.050.0250.010.0051.1531.1551.1551.1551.4631.4811.4921.496第13頁(yè)/共27頁(yè)線性范圍的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法對(duì)回歸方程進(jìn)行線性檢驗(yàn)多元回歸方程中以bi表示的系數(shù)為回歸系數(shù)。在二級(jí)與三級(jí)方程中，b2與b3為非線性系數(shù)。對(duì)回歸方程進(jìn)行線性檢驗(yàn)就是對(duì)每個(gè)非線性系數(shù)作t檢驗(yàn)，判斷回歸系數(shù)與零是否有顯著性差異。b0與b1不反映非線性，故不需對(duì)其進(jìn)行檢驗(yàn)第14頁(yè)/共27頁(yè)線性范圍的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法對(duì)回歸方程進(jìn)行線性檢驗(yàn)計(jì)算統(tǒng)計(jì)量t，計(jì)算公式為：t=bi/SEi其中，SEi為每個(gè)非線性系數(shù)的斜率標(biāo)準(zhǔn)誤Y為回歸方程預(yù)測(cè)值，與為測(cè)定均值

由公式df=L*R-Rdf計(jì)算自由度，L為樣本數(shù)，R為每個(gè)樣本的測(cè)定次數(shù)，Rdf為回歸自由度，即回歸方程中系數(shù)（包括b0）的個(gè)數(shù)第15頁(yè)/共27頁(yè)線性范圍的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法對(duì)回歸方程進(jìn)行線性檢驗(yàn)在t值表中尋找t界值（雙邊檢驗(yàn)，α=0.05），將計(jì)算出的t值與界值比較如p>0.05，表示非線性系數(shù)與零無顯著性差異，數(shù)據(jù)組被認(rèn)為具線性，此時(shí)可對(duì)數(shù)據(jù)組進(jìn)行精密度檢驗(yàn)，具體方法見后。當(dāng)精密度符合線性判斷要求時(shí)，數(shù)據(jù)分析可結(jié)束。如p<0.05，表示此非線性系數(shù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性，數(shù)據(jù)組為非線性，此時(shí)應(yīng)進(jìn)行臨床標(biāo)準(zhǔn)的線性與非線性檢驗(yàn)第16頁(yè)/共27頁(yè)線性范圍的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法臨床標(biāo)準(zhǔn)的線性與非線性檢驗(yàn)上述多項(xiàng)式回歸分析主要是利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行線性判斷，統(tǒng)計(jì)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)的線性可稱為一階線性，對(duì)數(shù)據(jù)組的要求很高。對(duì)于在臨床實(shí)驗(yàn)室中使用的測(cè)定方法，在其臨床應(yīng)用實(shí)踐中允許有一定的非線性誤差，此時(shí)通過對(duì)統(tǒng)計(jì)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)的非線性作程度判斷，可得到臨床標(biāo)準(zhǔn)的線性，即二階線性臨床標(biāo)準(zhǔn)的線性檢驗(yàn)中使用了兩個(gè)統(tǒng)計(jì)量，ADL（偏離直線平均差異averagedeviationfromlinearity）與PctBnd（百分區(qū)界percentbound）第17頁(yè)/共27頁(yè)線性范圍的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法臨床標(biāo)準(zhǔn)的線性與非線性檢驗(yàn)對(duì)于大多數(shù)分析物PctBnd取5%。如ADL小于所要求的臨界判斷值，則可認(rèn)為數(shù)據(jù)組具有臨床可接受的線性，所擬合出的最適非線性多項(xiàng)式無臨床意義ADL表示最優(yōu)擬合曲線與直線的平均差異

第18頁(yè)/共27頁(yè)線性范圍的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法臨床標(biāo)準(zhǔn)的線性與非線性檢驗(yàn)對(duì)于大多數(shù)分析物PctBnd取5%。如ADL小于所要求的臨界判斷值，則可認(rèn)為數(shù)據(jù)組具有臨床可接受的線性，所擬合出的最適非線性多項(xiàng)式無臨床意義ADL表示最優(yōu)擬合曲線與直線的平均差異

第19頁(yè)/共27頁(yè)線性范圍的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法臨床標(biāo)準(zhǔn)的線性與非線性檢驗(yàn)一般設(shè)定ADL小于5%為臨床允許誤差，即取PctBnd為5%，通過查表（附錄A和B）得到ADL臨界值。如ADL小于臨界值，可認(rèn)為多項(xiàng)式具有臨床可接受的非線性，為二階線性。如ADL大于臨界值，則為臨床不可接受的非線性

第20頁(yè)/共27頁(yè)線性范圍的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法臨床標(biāo)準(zhǔn)的線性與非線性檢驗(yàn)第21頁(yè)/共27頁(yè)線性范圍的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法臨床標(biāo)準(zhǔn)的線性與非線性檢驗(yàn)第22頁(yè)/共27頁(yè)線性范圍的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法對(duì)數(shù)據(jù)組進(jìn)行精密度檢驗(yàn)測(cè)量數(shù)據(jù)的精密度可直接影響多項(xiàng)式回歸分析的結(jié)果，為提高統(tǒng)計(jì)功效，需對(duì)數(shù)據(jù)組進(jìn)行精密度檢驗(yàn)計(jì)算最優(yōu)擬合方程的回歸標(biāo)準(zhǔn)誤（σ）第23頁(yè)/共27頁(yè)線性范圍的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法對(duì)數(shù)據(jù)組進(jìn)行精密度檢驗(yàn)用最優(yōu)擬合方程的回歸標(biāo)準(zhǔn)誤（σ）與總平均濃度()的百分比代表不精密度跟據(jù)以下公式進(jìn)行判斷第24頁(yè)/共27頁(yè)線性范圍的評(píng)估及數(shù)據(jù)處理方法對(duì)數(shù)據(jù)組進(jìn)行精密度檢驗(yàn)不精密度滿足判斷式時(shí),說明數(shù)據(jù)的精密度好可作線性評(píng)價(jià)。反之則表示數(shù)據(jù)的精密度差，不能作線性評(píng)價(jià)。當(dāng)PctBnd取5%時(shí),尚可通過查不精密度和臨界值表判斷數(shù)據(jù)是否精密(