光度測定法BET檢查技術(shù)學(xué)習(xí)培訓(xùn)課件

光度測定法BET檢查技術(shù)（一）、光度測定法方法學(xué)分類（二）、光度測定法原理（三）、光度法BET的試驗(yàn)材料（四）、動態(tài)顯色法BET（五）、動態(tài)濁度法BET（六）、終點(diǎn)顯色法BET2光度測定法BET檢查技術(shù)（一）、光度測定法方法學(xué)分類3光度測定法（定量法檢測）濁度法顯色法動態(tài)濁度法終點(diǎn)濁度法動態(tài)顯色法終點(diǎn)顯色法(比濁法)(比色法)動態(tài)終點(diǎn)法(湛江安度斯發(fā)明專利)（二）、光度測定法原理光電轉(zhuǎn)換原理光度測定法是利用鱟試劑與內(nèi)毒素的混合物在反應(yīng)過程的透光度變化與內(nèi)毒素濃度的關(guān)系來定量檢測內(nèi)毒素的一種方法。當(dāng)一束光線進(jìn)入如下光電轉(zhuǎn)換裝置時，該裝置將產(chǎn)生電流I，我們稱I為透光強(qiáng)度。4入射光反應(yīng)混合物透射光光電池I透光容器設(shè)：初始時的透光強(qiáng)度為Is，某時刻的透光強(qiáng)度為It

定義1：透光度（Rt）：

Rt=It/Is(%)

初始時It=Is，Rt=100%，Rt曲線變化趨勢是由高至低。定義2：吸光度(OD)：

OD=-lg(It/Is)

初始時It=Is，OD=0，OD曲線變化趨勢是由低至高。選擇不同的參數(shù)(Rt或OD)將得到不同變化趨勢的動態(tài)曲線。5T(分)IsItIeITAL與內(nèi)毒素反應(yīng)的動態(tài)曲線(Rt-T曲線)以透光度（Rt）為縱座標(biāo)，時間（T）為橫座標(biāo)，把TAL與內(nèi)毒素反應(yīng)引起反應(yīng)混合液透光度的變化連續(xù)地描繪在座標(biāo)系中，便得到該反應(yīng)的動態(tài)曲線如圖：6Rt（%）T（分）反應(yīng)動態(tài)曲線100孕育期反應(yīng)期結(jié)束TAL與內(nèi)毒素反應(yīng)的動態(tài)曲線(OD-T曲線)以吸光度（OD）為縱座標(biāo)，時間（T）為橫座標(biāo)，把TAL與內(nèi)毒素反應(yīng)引起反應(yīng)混合液吸光度的變化連續(xù)地描繪在座標(biāo)系中，便得到該反應(yīng)的動態(tài)曲線如圖：7ODT（分）反應(yīng)動態(tài)曲線0孕育期反應(yīng)期結(jié)束動態(tài)曲線的特點(diǎn)把標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素制備成三個濃度C1、C2、C3（C1>C2>C3），分別與TAL反應(yīng)，描繪出反應(yīng)的動態(tài)曲線如下圖：8C3Rt（%）T（分）C2C1分析動態(tài)曲線可看出：內(nèi)毒素濃度越高，孕育期越短；內(nèi)毒素濃度越高，反應(yīng)期曲線越陡；內(nèi)毒素濃度越高，進(jìn)入結(jié)束期越快。光度測定法BET試驗(yàn)的相關(guān)變量9C3100Rt（%）T（分）C2C1相關(guān)變量：

內(nèi)毒素濃度(C)

透光度(Rt或OD)

反應(yīng)時間(T)1）動態(tài)法原理固定透光度(Rt)，建立內(nèi)毒素濃度與反應(yīng)時間關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線（C-T曲線），用供試品的反應(yīng)時間比對標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出供試品的內(nèi)毒素濃度。這里的反應(yīng)時間是指反應(yīng)混合液的透光度到達(dá)預(yù)設(shè)透光度值（Rt）的時間。10回歸分析Rt%預(yù)設(shè)透光度值R0T1T2T395100T(分)C1C2C3LgT=b-kLgCLgTT3T2T1C3C2C1LgC（1）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線11（2）測定樣品內(nèi)毒素濃度（Cs）用鱟試劑與未知內(nèi)毒素含量的供試品(S)反應(yīng)，得到反應(yīng)時間Ts，比對C-T關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線，可得出供試品的內(nèi)毒素含量Cs。12比對標(biāo)準(zhǔn)曲線TsT(分)Rt(%)R0CsLgT=b-kLgCLgCCsTsLgT952）終點(diǎn)法原理固定反應(yīng)時間（T），建立內(nèi)毒素濃度與透光度關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線（C-Rt曲線），用供試品的透光度比對標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出供試品的內(nèi)毒素濃度。13Rt(%)T(分)C1C2C3100R1R2R3預(yù)設(shè)反應(yīng)終止時間T0RtR3R2R1C3C2C1Rt=b-K·C回歸分析（1）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線14（2）測定樣品內(nèi)毒素濃度（Cx）用鱟試劑與未知內(nèi)毒素含量的供試品（X）反應(yīng)，得到透光度值Rx，比對C-Rt關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線，可得出供試品的內(nèi)毒素含量Cx。15CxToT(分)Rx100Rt(%)Rt(%)Rt=b-K·CRxCx比對標(biāo)準(zhǔn)曲線（三）、光度法BET的實(shí)驗(yàn)材料光度測定儀和BET軟件試劑實(shí)驗(yàn)用具1617光度測定儀RT-6500酶標(biāo)分析儀RT-6100酶標(biāo)分析儀ELx808IU酶標(biāo)儀18光度測定儀便攜式檢測儀動態(tài)試管檢測儀全自動式細(xì)菌內(nèi)毒素檢測軟件19試劑光度法BET鱟試劑20鱟試劑動態(tài)濁度法(KTA)終點(diǎn)濁度法(ETA)動態(tài)顯色法(KCA)終點(diǎn)顯色法(ECA)規(guī)格1.25ml/支—0.35ml/支1.25ml/支0.45ml/支檢測范圍10-0.01EU/ml3-4個數(shù)量級—50-0.005EU/ml3-4個數(shù)量級0.5-0.05EU/ml1個數(shù)量級試劑內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品

RSE或經(jīng)RSE標(biāo)化的CSE細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水

內(nèi)毒素含量小于0.005EU/ml且對內(nèi)毒素試驗(yàn)無干擾作用的滅菌注射用水。21試驗(yàn)器具器具分類器具名稱反應(yīng)試管玻璃試管（外徑8×75mm或10×75mm）、微孔平板稀釋容器大口徑玻璃試管移液器具刻度吸管及洗耳球，或移液器及無熱原吸頭等儀器光度儀、天平、電熱干燥箱（溫度250℃以上）、旋渦混合器其他試管架、異丙醇浸泡的無紡布、鑷子、剪刀、砂輪、封口膜或醫(yī)用膠布、標(biāo)記紙等22凡是與供試品或反應(yīng)試劑接觸的器具，必須經(jīng)除熱原處理。動態(tài)顯色法

（KineticChromogenicassay）23（四）、動態(tài)顯色法可測范圍最廣，

干擾最小檢測反應(yīng)混合物

的色度到達(dá)某一預(yù)先設(shè)定的透光度/吸光度值所需要的反應(yīng)時間反應(yīng)時間對數(shù)值與細(xì)菌內(nèi)毒素濃度的對數(shù)值成反比的關(guān)系。24反應(yīng)動態(tài)曲線動態(tài)顯色法反應(yīng)機(jī)理示意圖25Peptide-PNA（酶作用物*）內(nèi)毒素凝固酶凝固酶原pNA（對硝基苯胺）Peptide黃色405nm測光度值*通常把酶作用物稱為顯色基質(zhì)或底物動態(tài)顯色法特點(diǎn)發(fā)達(dá)國家使用最廣泛的光度法靈敏度高：0.001~0.005EU/ml檢測范圍廣：4個數(shù)量級，線性達(dá)0.999檢測品種：適應(yīng)廣抗干擾能力強(qiáng)26動態(tài)顯色法試驗(yàn)程序試驗(yàn)程序：

27儀器試劑用具標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性試驗(yàn)干擾試驗(yàn)檢查法試驗(yàn)準(zhǔn)備方法驗(yàn)證日常檢查一）、試驗(yàn)準(zhǔn)備檢測波長：405nm對應(yīng)的反應(yīng)管或反應(yīng)板動態(tài)顯色法鱟試劑（KCA）內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品：CSE/RSE細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水旋渦混合器、微量振蕩器、移液器、稀釋管等28內(nèi)毒素測定儀檢測試劑試驗(yàn)用具二）、標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性試驗(yàn)試驗(yàn)?zāi)康?9驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室的條件驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)人員的實(shí)驗(yàn)技能是否滿足BET試驗(yàn)的要求驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)所用試劑二）、標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性試驗(yàn)30試驗(yàn)程序：CSE/RSE鱟試劑內(nèi)毒素測定儀預(yù)熱復(fù)溶、混合反應(yīng)容器，每個濃度平行三管，陰性對照平行二管插入反應(yīng)容器混勻稀釋為至少3個濃度的稀釋液，稀釋度為2～10倍，最低濃度不得低于所用鱟試劑的最低檢測限數(shù)據(jù)分析及結(jié)果判斷復(fù)溶1234567判斷標(biāo)準(zhǔn)1、陰性對照的反應(yīng)時間(TNC)應(yīng)大于標(biāo)準(zhǔn)曲線最低濃度的反應(yīng)時間(Tλ)2、標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)|r|≥0.9803、變異系數(shù)CV<10%31藥典要求廠家建議值二）、標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性試驗(yàn)二）、標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性試驗(yàn)

1、試劑32名稱廠家裝量規(guī)格動態(tài)顯色法TAL安度斯0.35ml/支10~0.01EU/ml內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品（CSE）中檢院100EU/支BET水（W）安度斯25ml/瓶內(nèi)毒素<0.003EU/ml2、儀器及軟件信息儀器名稱RT6500酶標(biāo)分析儀廠家深圳雷杜編號671401004波長405nm軟件名稱生物探針4.033二）、標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性試驗(yàn)采用數(shù)據(jù)庫管理二）、標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性試驗(yàn)3、反應(yīng)溶液制備選擇標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度：2.0、0.2、0.02EU/ml；取CSE1支，打開加入1ml水復(fù)溶，旋渦混合15分鐘，得原液100EU/ml的內(nèi)毒素溶液記為E1004、復(fù)溶鱟試劑34E100E100.4ml1.6mlWE20.2ml1.8mlWE0.20.2ml1.8mlWE0.020.2ml1.8mlW二）、標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性試驗(yàn)

5、進(jìn)入軟件，設(shè)置試驗(yàn)參數(shù)及反應(yīng)項(xiàng)目356、布板與測試36二）、標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性試驗(yàn)

7、加樣：按項(xiàng)目布板位置加樣0.025mlTAL溶液＋0.025ml內(nèi)毒素溶液,每個濃度平行三孔，NC平行二孔378、反應(yīng)：把反應(yīng)板放置儀器中，設(shè)置反應(yīng)60分鐘二）、標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性試驗(yàn)9、試驗(yàn)完成后進(jìn)行數(shù)據(jù)分析陰性對照反應(yīng)時間大于標(biāo)準(zhǔn)曲線最低濃度反應(yīng)時間相關(guān)系數(shù)絕對值大于0.98038CV＜10％9、試驗(yàn)完成后進(jìn)行數(shù)據(jù)分析E2.0E0.2E0.0239NC10、結(jié)果判斷40標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍：2.0~0.02EU/mlTNC

＞T

λ；|r|≥0.9997,CV<10%標(biāo)準(zhǔn)曲線符合規(guī)定!三）干擾初篩試驗(yàn)?zāi)康募霸?/p>

目的：初步篩選出供試品的無干擾濃度原理：在供試品溶液中添加已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素溶液，計(jì)算內(nèi)毒素回收率，判斷供試品濃度對BET的干擾情況。41干擾初篩試驗(yàn)反應(yīng)項(xiàng)目設(shè)置42編號反應(yīng)項(xiàng)目內(nèi)毒素濃度被加入內(nèi)毒素的溶液平行管數(shù)A供試品溶液無供試品溶液至少2B供試品回收溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線的中點(diǎn)（或附近點(diǎn)）的濃度（設(shè)為λm）供試品溶液至少2C標(biāo)準(zhǔn)曲線至少3個濃度（最低點(diǎn)設(shè)定為λ）檢查用水每一濃度至少2D陰性對照無檢查用水至少2A為稀釋倍數(shù)不超過MVD的供試品溶液

B為加入

m內(nèi)毒素且與溶液A有相同稀釋倍數(shù)的供試品溶液

C為用于制備標(biāo)準(zhǔn)曲線的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液

D為陰性對照試驗(yàn)步驟供試品限值的確定試劑的選擇MVD/MVC的計(jì)算反應(yīng)溶液的制備加樣及反應(yīng)結(jié)果判斷43123456判斷標(biāo)準(zhǔn)1、陰性對照的反應(yīng)時間（TNC）大于標(biāo)準(zhǔn)曲線最低濃度的反應(yīng)時間（Tλ）2、標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)|r|≥0.9803、回收率R滿足：50%≤R≤200%4、變異系數(shù)CV<10%44藥典要求廠家建議值三）干擾初篩試驗(yàn)1、樣品名稱及內(nèi)毒素限值45樣品名稱規(guī)格內(nèi)毒素限值注射用頭孢噻肟鈉1.0g/瓶L=0.050EU/mg干擾初篩試驗(yàn)2、試劑、儀器、軟件信息46名稱廠家裝量規(guī)格動態(tài)顯色法TAL安度斯0.35ml/支10~0.01EU/ml內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品（CSE）中檢院100EU/支BET水（W）安度斯25ml/瓶內(nèi)毒素<0.003EU/mlRT6500/671401004深圳雷杜生物探針4.0安度斯干擾初篩試驗(yàn)3、選擇標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍2.0~0.02EU/ml，λ=0.02EU/ml；λm=0.2EU/ml；4、MVC的計(jì)算MVC=λ/L=0.02/0.050=0.40（mg/ml）

47干擾初篩試驗(yàn)5、各反應(yīng)溶液的制備1）溶液C的制備

2）溶液A的制備取樣品1瓶溶解后，稀釋至10mg/ml(S10)、5mg/ml(S5)和2.5mg/ml(S2.5)48E100E100.4ml1.6mlWE20.2ml1.8mlWE0.20.2ml1.8mlWE0.020.2ml1.8mlW干擾初篩試驗(yàn)3）溶液B的制備（近似法）：0.9mlS10+0.1mlE2.0S10E0.20.9mlS5+0.1mlE2.0S5E0.20.9mlS2.5+0.1mlE2.0S2.5E0.2496、加樣及反應(yīng)反應(yīng)項(xiàng)目設(shè)置50編號反應(yīng)項(xiàng)目平行管D陰性對照BET水C標(biāo)準(zhǔn)曲線E0.02E0.2E2.0A供試品溶液10、5、2.5mg/mlB供試品回收溶液10、5、2.5mg/ml中添加0.2EU/ml的內(nèi)毒素溶液516、加樣及反應(yīng)復(fù)溶鱟試劑運(yùn)行軟件合并鱟試劑溶液填寫試驗(yàn)參數(shù)分別加入反應(yīng)溶液D、C、A和B設(shè)置各孔反應(yīng)項(xiàng)目分別加入鱟試劑溶液放置酶標(biāo)儀中，點(diǎn)“開始”10mg/ml回收率5mg/ml回收率TNC（>3600s）>Tλ相關(guān)系數(shù)絕對值|r|=0.9996>0.980試驗(yàn)有效有干擾2.5mg/ml回收率無干擾無干擾7、試驗(yàn)完成后進(jìn)行數(shù)據(jù)分析528、結(jié)果判斷53標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍：2.0~0.02EU/mlTNC

＞T

λ；|r|≥0.980；CV<10%標(biāo)準(zhǔn)曲線符合規(guī)定!注射用頭孢噻肟鈉濃度≤10mg/ml時，無干擾四）干擾試驗(yàn)?zāi)康模捍_定日常檢測供試品的稀釋倍數(shù)或檢測濃度建立一個品種的光度BET法，需三批樣品選擇3批供試品在同一濃度進(jìn)行干擾試驗(yàn)反應(yīng)項(xiàng)目設(shè)置同干擾初篩試驗(yàn)54判斷標(biāo)準(zhǔn)1、陰性對照的反應(yīng)時間（TNC）大于標(biāo)準(zhǔn)曲線最低濃度的反應(yīng)時間（Tλ）2、標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)|r|≥0.9803、各批樣品的回收率R滿足：50%≤R≤200%4、變異系數(shù)CV<10%55藥典要求廠家建議值四）干擾試驗(yàn)1、樣品名稱及內(nèi)毒素限值56樣品名稱規(guī)格內(nèi)毒素限值注射用頭孢噻肟鈉1.0g/瓶L=0.050EU/mg干擾試驗(yàn)2、試劑、儀器、軟件信息57名稱廠家裝量規(guī)格動態(tài)顯色法TAL安度斯0.35ml/支10~0.01EU/ml內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品（CSE）中檢院100EU/支BET水（W）安度斯25ml/瓶內(nèi)毒素<0.003EU/mlRT6500/671401004深圳雷杜生物探針4.0安度斯干擾試驗(yàn)3、根據(jù)干擾初篩試驗(yàn)結(jié)果，確定選擇供試品的無干擾濃度58無干擾選擇回收率接近100%的稀釋倍數(shù)*本試驗(yàn)選擇5mg/ml

為干擾驗(yàn)證濃度。無干擾無干擾594、反應(yīng)項(xiàng)目設(shè)置溶液編號反應(yīng)項(xiàng)目平行管D陰性對照BET水OOC標(biāo)準(zhǔn)曲線E0.02OOE0.2OOE2.0OOA1供試品溶液5.0mg/mlOOB1供試品回收溶液5.0mg/mlE0.2OOA2供試品溶液5.0mg/mlOOB2供試品回收溶液5.0mg/mlE0.2OOA3供試品溶液5.0mg/mlOOB3供試品回收溶液5.0mg/mlE0.2OO5、各反應(yīng)溶液的制備601）溶液C的制備：2）溶液A的制備：3）溶液B的制備（近似法）：E100E100.4ml1.6mlWE20.2ml1.8mlWE0.20.2ml1.8mlWE0.020.2ml1.8mlW取樣品1瓶溶解后，稀釋至5.0mg/ml(S5)0.9mlS5.0+0.1mlE2.01.0ml

S5.0E0.2干擾試驗(yàn)6、復(fù)溶2支鱟試劑，待澄清后，合并；7、加樣及反應(yīng)618、試驗(yàn)結(jié)果相關(guān)系數(shù)絕對值|r|=0.9997>0.980TNC（>3560s）>Tλ試驗(yàn)有效試驗(yàn)有效試驗(yàn)有效試驗(yàn)有效無干擾62

TNC

＞T

λ,|r|＞0.980,CV<10%標(biāo)準(zhǔn)曲線符合規(guī)定!

注射用頭孢噻肟鈉濃度5.0mg/ml時，無干擾；可以作為日常檢查濃度。試驗(yàn)有效9、結(jié)果判斷63五）檢查法（日常檢查）根據(jù)干擾試驗(yàn)結(jié)果，選擇無干擾的供試品濃度進(jìn)行BET日常檢查各反應(yīng)溶液的制備及反應(yīng)項(xiàng)目設(shè)置與干擾試驗(yàn)相同64判斷標(biāo)準(zhǔn)1、陰性對照的反應(yīng)時間(TNC)大于標(biāo)準(zhǔn)曲線最低濃度的反應(yīng)時間(Tλ)2、標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)|r|≥0.9803、各批樣品的回收率R滿足：50%≤R≤200%4、變異系數(shù)CV<10%若內(nèi)毒素含量＜L，判供試品符合規(guī)定；若內(nèi)毒素含量≥

L，判供試品不符合規(guī)定。65

藥典要求廠家建議值五）日常檢查1、樣品名稱及內(nèi)毒素限值66樣品名稱規(guī)格內(nèi)毒素限值注射用頭孢噻肟鈉1.0g/瓶L=0.050EU/mg溶液編號反應(yīng)項(xiàng)目平行管D陰性對照BET水OOC標(biāo)準(zhǔn)曲線E0.02OOE0.2OOE2.0OOA供試品溶液5.0mg/mlOOB供試品回收溶液5.0mg/mlE0.2OO2、反應(yīng)項(xiàng)目設(shè)置67標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍2~0.02EU/ml,反應(yīng)平均時間561.0~2419.3秒。相關(guān)系數(shù)絕對值|r|=0.9997>0.980TNC（>3600s）>Tλ試驗(yàn)有效試驗(yàn)有效3、試驗(yàn)結(jié)果684、結(jié)果判斷內(nèi)毒素濃度（EU/ml）0.020.22.0反應(yīng)時間（秒）2419.3120356169標(biāo)準(zhǔn)曲線信息樣品批號123檢測濃度（mg/ml）5.05.05.0反應(yīng)時間（S）354012021437回收率（%）92.9999.44107.78內(nèi)毒素值（EU/mg）0.0010.0370.021結(jié)果判斷合格合格合格結(jié)果判斷實(shí)驗(yàn)成本:動態(tài)顯色微孔板法BET的實(shí)驗(yàn)成本與凝膠法BET相同甚至更低!是性價比最高的光度法。（五）、動態(tài)濁度法是凝膠法的擴(kuò)展第一個定量方法檢測反應(yīng)混合物的

濁度到達(dá)某一預(yù)先設(shè)定的透光度/吸光度值所需要的反應(yīng)時間反應(yīng)時間對數(shù)值與細(xì)菌內(nèi)毒素濃度的對數(shù)值成反比的關(guān)系。71反應(yīng)動態(tài)曲線動態(tài)濁度法試驗(yàn)程序試驗(yàn)程序：

72儀器試劑用具標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性試驗(yàn)干擾試驗(yàn)檢查法試驗(yàn)準(zhǔn)備方法驗(yàn)證日常檢查試驗(yàn)準(zhǔn)備檢測波長：340nm~660nm反應(yīng)試管或反應(yīng)板動態(tài)濁度法鱟試劑（KTA）內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品：CSE/RSE細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水旋渦混合器、移液器、稀釋管等73內(nèi)毒素測定儀檢測試劑試驗(yàn)用具動態(tài)濁度法動態(tài)濁度法除了使用動態(tài)濁度法鱟試劑和試驗(yàn)波長更寬外，其他實(shí)驗(yàn)方法、條件、要求以及實(shí)驗(yàn)操作與動態(tài)顯色法完全相同。74（六）、終點(diǎn)顯色法鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)，反應(yīng)達(dá)到預(yù)設(shè)的反應(yīng)時間時，加入終止液終止反應(yīng)，然后用分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀在405nm波長測定吸光度值（OD）；吸光度值（OD）與內(nèi)毒素濃度（C）成正比。利用標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素建立OD-C的標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線定量測定供試品的內(nèi)毒素含量。75終止時間（六）、終點(diǎn)顯色法終點(diǎn)顯色法系統(tǒng)組成1、終點(diǎn)顯色法細(xì)菌內(nèi)毒素檢測試劑盒2、酶標(biāo)儀-405nm波長3、微孔板恒溫儀4、微量振蕩器5、旋渦混合器6、移液器和無熱原吸頭等7、微孔細(xì)菌內(nèi)毒素檢查反應(yīng)板76終點(diǎn)顯色法試驗(yàn)程序試驗(yàn)程序77儀器試劑用具標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性試驗(yàn)干擾試驗(yàn)檢查法試驗(yàn)準(zhǔn)備方法驗(yàn)證日常檢查試驗(yàn)準(zhǔn)備酶標(biāo)儀檢測波長：405nm對應(yīng)的反應(yīng)板終點(diǎn)顯色法鱟試劑（ECA）內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品：CSE/RSE細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水旋渦混合器、微量振蕩器、移液器、稀釋管等78光度測定儀檢測試劑試驗(yàn)用具終點(diǎn)顯色法日常檢查舉例試劑及器具79終點(diǎn)顯色法試劑盒終點(diǎn)顯色法試劑內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（CSE）BET水反應(yīng)終止液酶標(biāo)儀405nm微孔平板96孔，無熱原微孔平板恒溫器提供37℃恒溫環(huán)境微量振蕩器混勻反應(yīng)混合液旋渦混合器混勻供試