實(shí)驗(yàn)二根系活力的測(cè)定a萘胺氧化法研究報(bào)告

實(shí)驗(yàn)二、根系活力的測(cè)定

——a-萘胺氧化法

植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)(二)植物生理學(xué)基礎(chǔ)與綜合實(shí)驗(yàn)?zāi)暇煼洞髮W(xué)生命科學(xué)學(xué)院一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私飧祷盍Φ纳硪饬x；掌握a-萘胺氧化法測(cè)定根系活力的原理與方法。了解植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中的一些注意事項(xiàng)。二、實(shí)驗(yàn)原理（一）植物根系的生理功能:

吸收：水分、無(wú)機(jī)鹽、CO2。輸導(dǎo)固著合成貯藏根系吸收無(wú)機(jī)鹽的過(guò)程：部位：根尖，根毛區(qū)最活躍。步驟1，呼吸釋放CO2；2，形成H2CO3；3，H+與HCO3-吸附在根表面。4，溶液中陰陽(yáng)離子分別與HCO3-、H+交換。5，吸收，進(jìn)入根內(nèi)部。6，運(yùn)輸。定性觀察根系表面紅色越深，說(shuō)明根系活力越強(qiáng)。定量測(cè)定剩余的α-萘胺在酸性環(huán)境中可與對(duì)氨基苯磺酸（sulfanil-amide）和亞硝酸鹽作用生成穩(wěn)定的紅色偶氮染料。定量測(cè)定對(duì)-苯磺酸-偶氮-α-萘胺生成的紅色偶氮化合物在pH7.0時(shí)在510nm處有最大吸收峰，可用分光光度法測(cè)定光吸收值，從而利用此反應(yīng)來(lái)間接測(cè)定溶液中α-萘胺的量。注意：OD510越大→α-萘胺剩余越多→根系活力越弱反應(yīng)液的酸度大則增加重氮化作用的速度，但降低偶聯(lián)作用的速度，顏色比較穩(wěn)定。增加溫度可以增加反應(yīng)速度，但降低重氮鹽的穩(wěn)定度，所以反應(yīng)需要在相同條件下進(jìn)行。三、實(shí)驗(yàn)材料與儀器設(shè)備（一）實(shí)驗(yàn)材料水稻(OryzasativaL.)等水生植物的須根系。（二）儀器與用品分光光度計(jì)、天平、恒溫培養(yǎng)箱、三角燒瓶、量筒、移液管、剪刀、玻棒。（三）試劑α-萘胺溶液：先用少量的95%酒精溶解，然后加水定容成。配制50μg/mL、50μg/mL溶液。0.1mol/L磷酸緩沖液，pH7.0。1%對(duì)氨基苯磺酸溶液：溶解于30%的醋酸溶液中。0.01%亞硝酸鈉溶液。四、實(shí)驗(yàn)步驟（一）定性觀察：處理：挖取處于不同生長(zhǎng)狀態(tài)的須根系植株（如水稻、豌豆苗根系等）數(shù)株，洗凈根部后再用濾紙吸去根上附著的水分。2.觀察將植株根系浸入盛有25μg/mLα-萘胺溶液并用黑紙包裹的容器中，靜置24-36小時(shí)后觀察根系著色情況。比較不同植株根系活力大小，并與植物生長(zhǎng)勢(shì)比較，分析植物生長(zhǎng)勢(shì)與根系活力之間的關(guān)系。（二）定量測(cè)定取50μg/mL的α-萘胺溶液和0.1mol/LpH7.0的磷酸緩沖液各25mL，置于三角瓶中，混勻。稱取根系2g浸沒(méi)于三角瓶中的溶液中。同樣地，取50μg/mL的α-萘胺溶液和0.1mol/LpH7.0的磷酸緩沖液各25mL，置于另一三角瓶中，混勻，不放根系作為對(duì)照。1、實(shí)驗(yàn)處理2、實(shí)驗(yàn)初始值測(cè)定5min后，分別從兩瓶中各取2mL溶液，按照步驟4作第一次測(cè)定。記錄OD（實(shí)驗(yàn)組）與OD0（對(duì)照組）。3、實(shí)驗(yàn)終了值測(cè)定將兩三角瓶置于25℃恒溫箱中避光保溫60min后，各取2mL，按照步驟4作第二次測(cè)定。記錄OD’（實(shí)驗(yàn)組）與OD’0（對(duì)照組）。4、a-萘胺含量測(cè)定取2mL培養(yǎng)液加10mL水混勻，再順次加入1mL對(duì)氨基苯磺酸溶液與1mL亞硝酸鈉溶液，混勻，觀察溶液顏色變化，再定容至25mL。室溫25min后，于510nm處測(cè)定吸光度（OD）值。5．標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：以50μg/mL的α-萘胺溶液為母液，配置40、30、20、10、5、0μg/mL的溶液各10mL。各取2mL，按照步驟4分別反應(yīng)，并測(cè)定OD值。以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制α-萘胺溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線?；蛘吒鶕?jù)濃度與OD值關(guān)系直接計(jì)算回歸方程。6．換算濃度分別查對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，或利用回歸方程直接計(jì)算出實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組溶液實(shí)驗(yàn)前后對(duì)應(yīng)的α-萘胺濃度（C、C’與C0、C’0）。7．計(jì)算根系活力根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算不同植株根系對(duì)α-萘胺的生物氧化強(qiáng)度（mgα-萘胺/gFW·h），并與植物生長(zhǎng)勢(shì)比較，分析它們之間的關(guān)系。

-萘胺生物氧化強(qiáng)度=48mL×（C-C′）-48mL×（C0-C0′）2g×1h五、思考題為什么利用a-萘胺氧化法測(cè)定植物的根系活力時(shí)需要在5min后作第一次測(cè)定？測(cè)定根系活力時(shí)最好選擇根的哪個(gè)部位？為什么？3.簡(jiǎn)述