合成培養(yǎng)基的主要成分陳述

第第頁合成培養(yǎng)基的重要成分?jǐn)⑹黾?xì)胞培養(yǎng)基的種類很多，按其來源分為合成培養(yǎng)基和自然培養(yǎng)基（目前使用的培養(yǎng)基絕大部分是合成培養(yǎng)基），按其物質(zhì)狀態(tài)分為干粉培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基兩類。干粉培養(yǎng)基需由試驗者本身配制并滅菌，液體培養(yǎng)基由專業(yè)商家供應(yīng)，用戶可直接使用，特別方便。合成培養(yǎng)基的重要成分有：氨基酸、碳水化合物、無機鹽、維生素及其它輔佑襄助物質(zhì)：1、氨基酸氨基酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本單位。不同種類的細(xì)胞對氨基酸的要求各異，但有幾種氨基酸細(xì)胞自身不能合成，必需依靠培養(yǎng)液供應(yīng)，這幾種氨基酸稱為必需氨基酸。其中谷氨酰胺是細(xì)胞合成核酸和蛋白質(zhì)必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺時，細(xì)胞生長不良而死亡。因此，各種培養(yǎng)液中都有較大量的谷氨酰胺。但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置于—20℃冰箱中保管，在使用前加入培養(yǎng)液內(nèi)。已含谷氨酰胺的培養(yǎng)液在4℃冰箱中儲存2周以上時，還應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺。2、碳水化合物碳水化合物是細(xì)胞生長重要能量來源，其中有的是合成蛋白質(zhì)和核酸的成分。重要有葡萄糖、核糖、脫氧核糖、丙酮酸鈉和醋酸等。3、無機鹽培養(yǎng)液中無機鹽的重要功能是幫忙細(xì)胞維持滲透壓平衡。另外，通過供應(yīng)鈉，鉀和鈣離子，幫忙細(xì)胞調(diào)整細(xì)胞膜功能。培養(yǎng)液的滲透壓是一個特別緊要的因素,細(xì)胞通常可耐受260mOsm/kg～320mOsm/kg。標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液的滲透壓在此范圍內(nèi)波動。特別注意：向培養(yǎng)液中加入其它物質(zhì)有可能會明顯轉(zhuǎn)變培養(yǎng)液的滲透壓，特別是溶于強酸或強堿中的物質(zhì)。向培養(yǎng)液中添加HEPES時需按以下方法調(diào)整鈉離子濃度。緩沖系統(tǒng)大多數(shù)細(xì)胞所需pH在7.2—7.4、但是，細(xì)胞培養(yǎng)適pH值隨培養(yǎng)的細(xì)胞種類不同而不同。成纖維細(xì)胞喜愛較高pH（7.4—7.7）,而傳代轉(zhuǎn)化細(xì)胞系則需要偏酸pH（7.0—7.4）。由于多數(shù)培養(yǎng)液靠碳酸氫鈉（NaHCO3）與CO2體系進(jìn)行緩沖，因此，氣相中的CO2濃度應(yīng)與培養(yǎng)液中碳酸氫鈉濃度相平衡。假如氣相或培養(yǎng)箱空氣中CO2濃度設(shè)定在5%，培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為1.97g/L；假如CO2濃度維持在10%，培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為3.95g/L。細(xì)胞培養(yǎng)瓶蓋不應(yīng)擰得太緊，以保證氣體交換。HEPES是一種非離子緩沖液，在pH7.2—7.4范圍內(nèi)具有較好的緩沖本領(lǐng)，但是特別昂貴，在高濃度時對一些細(xì)胞可能有毒。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉（0.34g/L）共用，以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓加添。在這種培養(yǎng)條件下，細(xì)胞培養(yǎng)瓶的蓋子應(yīng)擰緊，以防止培養(yǎng)液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中。大多數(shù)培養(yǎng)液中含有酚紅作為pH指示劑，酸性培養(yǎng)液呈橙黃色，堿性培養(yǎng)液呈深紅色。4、維生素在細(xì)胞培養(yǎng)中，盡管血清是維生素緊要來源，但是很多培養(yǎng)基中添加了各種維生素以適合更多的細(xì)胞系生長。5、其它成分在一些較為多而雜的培養(yǎng)液中還包含其它一些成分。如在雜交瘤技術(shù)中常用的DMEM培養(yǎng)液，使用時還需要補加丙酮酸鈉和2—C2H6OS（2—Mercaptoethanol，2—Me）。2—Me對細(xì)胞生長有很緊要的作用。有人認(rèn)為它相當(dāng)于胎牛血清，有直接刺激細(xì)胞增殖作用。2—Me的活性部分是硫氫基，其中一個緊要作用是使血清中含硫的化合物還原成谷胱甘肽，能誘導(dǎo)細(xì)胞的增殖，為非特異性的激活作用。同時避開過氧化物對培養(yǎng)細(xì)胞的損害。另一個緊要作用是促進(jìn)分裂原的反應(yīng)和DNA合成，加添植物凝集素（PHA）對淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化作用，已廣泛應(yīng)用于雜交瘤技術(shù)，另外，也開始用于一些難以培養(yǎng)的細(xì)胞。2—Me是一種小分子還原劑，極易氧化。分子量為78.13，純