DB2305-T 027-2024 玉米抗大斑病抗性篩選及鑒定技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.20DB23052024-08-30發(fā)布雙鴨山市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布1DB2305/T027—2024本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由雙鴨山市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出并歸口。本文件起草單位：黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院佳木斯分院、蕪湖職業(yè)技術(shù)學(xué)院、寶清縣小城子鎮(zhèn)鄉(xiāng)村振興發(fā)展服務(wù)中心、寶清縣朝陽鎮(zhèn)鄉(xiāng)村振興發(fā)展服務(wù)中心。本文件主要起草人：高雪冬、顧鑫、于昌紅、畢永彬、丁俊杰、李燦東、劉俊剛、劉偉、楊曉賀、姚亮亮、張茂明、王自杰、張家智、李志民、李增杰、孟慶英、朱寶國、靳曉春、王雪潔、邱磊。2DB2305/T027—2024玉米大斑病抗性篩選及鑒定技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了玉米大斑病抗性篩選及鑒定技術(shù)的術(shù)語和定義、病菌準(zhǔn)備、種植、接種鑒定、抗性評(píng)價(jià)及篩選、田間檔案的要求。本文件適用于玉米大斑病的田間篩選及鑒定。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB4404.1糧食作物種子第1部分:禾谷類NY/T1248.1玉米抗病蟲性鑒定技術(shù)規(guī)范第1部分:大斑病DB23/T017玉米生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義NY/T1248.1界定的及下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1玉米大斑病玉米大斑病是以葉部產(chǎn)生大型病斑癥狀為主的玉米病害，又稱葉斑病、條斑病、枯葉病等，主要發(fā)生在東北、華北春玉米區(qū)和西南地區(qū)海拔較高、氣溫較低的山區(qū)。當(dāng)外界溫度在20～25℃左右，相對(duì)濕度90%以上利于大斑病的發(fā)展。3.2病圃在玉米大斑病常年發(fā)生較重區(qū)域選擇作為玉米大斑病抗性鑒定的地塊。3.3人工接種在適宜條件下,通過人為接種的方式將人工培養(yǎng)或收集的病原物置于植物適當(dāng)部位并使之發(fā)病的過程。3DB2305/T027—20243.4投芯接種將帶菌高粱粒投入玉米大喇叭口心葉中進(jìn)行接種。4病菌準(zhǔn)備4.1病菌采集4.1.1采樣地點(diǎn)選擇選擇在雙鴨山市玉米大斑病高發(fā)區(qū)采集具有典型大斑病癥狀的發(fā)病植株，以便獲取具有代表性的病害樣本。4.1.2樣本采集將上年采集的典型大斑病病葉夾在標(biāo)本夾常溫陰干保存，以確保樣本的純凈性和有效性。4.1.3樣本處理將帶有大斑病的葉片剪成3～4cm長段，用自來水沖洗，以便后續(xù)的病原菌分離和培養(yǎng)。4.2病菌制備4.2.1病原菌分離通過組織分離法或單孢分離法從發(fā)病植株葉片的典型病斑上分離大斑病病原物，然后進(jìn)行分離物純化，經(jīng)致病性測(cè)定后，在低溫-80℃下保存?zhèn)溆?。通過稀釋培養(yǎng)法和平板對(duì)峙法從采集的樣本中分離出具有拮抗活性的微生物菌株。具體方法是取典型病斑小塊，置于75%的酒精中浸泡2s～3s，取出后置于質(zhì)量體積比為1%的次氯酸鈉中浸泡2min～3min，再經(jīng)無菌水換洗，曬干后轉(zhuǎn)移至PDA平板培養(yǎng)基中，置于25℃~27℃環(huán)境中，黑暗培養(yǎng)3d后挑取病原菌至試管中保存。4.2.2菌株鑒定依據(jù)柯赫氏法則進(jìn)行致病力測(cè)定，確定其為玉米大斑病病病原菌的菌株,對(duì)分離出的菌株進(jìn)行形態(tài)學(xué)、生理生化特征和分子生物學(xué)鑒定進(jìn)行屬種鑒定,從比例占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)的病原菌中選取致病力較強(qiáng)的菌株作為接種的目標(biāo)菌株。4.2.3菌株培養(yǎng)4DB2305/T027—2024在PDA斜面培養(yǎng)基中加入少量無菌蒸餾水，用無菌接種環(huán)輕輕刮取表面的新鮮霉菌孢子，將孢子懸液置于250mL錐形瓶?jī)?nèi)，然后注入40mL洗脫液。錐形瓶中加入直徑5mm的玻璃珠10粒~15粒與孢子混合，放入水浴振蕩器中不斷振蕩，使成團(tuán)的孢子散開。然后用單層棉紗布過濾以除去菌絲。將其裝入滅菌離心管中，用離心機(jī)分離沉淀孢子，去除上清液。再加入40mL洗脫液，重復(fù)離心操作3次。最后，制成濃度為(0.8～1.2)x106spores/mL的霉菌孢子懸液。如果需要精確計(jì)數(shù)，可以用改良察氏液體培養(yǎng)基稀釋孢子懸液，并用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。孢子懸液應(yīng)在當(dāng)天使用，如果不在當(dāng)天使用，應(yīng)在3℃至7℃保存，并盡量在4d內(nèi)使用。5種植5.1病圃選擇應(yīng)選擇光照充足、地勢(shì)平坦、耕層深厚，肥力較高，保水保肥性能好，排灌良好的地塊。5.2田間設(shè)計(jì)將獲得的玉米現(xiàn)有推廣品種及玉米自交系隨機(jī)排列種植，每隔50份材料設(shè)置1組已知抗病、感病對(duì)照材料,對(duì)照選用玉米自交系K10(高抗)、118(高感)。鑒定設(shè)計(jì)符合NY/T1248.1標(biāo)準(zhǔn)。玉米材料采用雙行區(qū)種植，小區(qū)行長4m，行距0.68m，植株密度為5000株/667m2。5.3播種耕層5cm～10cm地溫穩(wěn)定通過7℃~8℃,土壤含水量25%～30%適時(shí)播種，也可根據(jù)當(dāng)年農(nóng)業(yè)生產(chǎn)氣候條件適當(dāng)調(diào)整播種期。播種時(shí)期符合DB23/T017標(biāo)準(zhǔn)。所種植種子不進(jìn)行任何處理，播種方式采用人工播種，播種距離調(diào)整到19.6cm，每穴播2粒，出苗后每穴保留1株健康的植株。種子符合GB4404.1標(biāo)準(zhǔn)。5.4田間管理田間管理及蟲草害防治與大田生產(chǎn)相同，田間管理過程中不使用對(duì)大斑病有防治作用的藥劑，生產(chǎn)過程符合DB23/T017標(biāo)準(zhǔn)。6接種鑒定6.1接種時(shí)期大喇叭口期6.2接種方法6.2.1采用菌液灌心葉的方法進(jìn)行接種，于多云天傍晚接種，接種后8小時(shí)內(nèi)避免高溫及強(qiáng)降雨，以防病菌失活及被沖刷流失，每株灌5ml～10ml。如果被沖刷，需要在第二天繼續(xù)如此操作。6.2.2將接種過的高梁粒放入植株心葉中，每株接種5粒~10粒，每個(gè)品種至少接種10株。接種后24h內(nèi)可以人工輔助噴施清水，提高植株心葉內(nèi)的濕度，增加病菌侵染成功的幾率。5DB2305/T027—20246.3接種管理在接種圃中鋪設(shè)噴帶的灌溉設(shè)施，每天噴水10min～20min，保持土壤中含充足水分，土壤濕度不低于90%。6.4病情調(diào)查玉米抽絲期后25d進(jìn)行田間調(diào)查?？剐栽u(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)見表1。表1玉米大斑病病情分級(jí)穗位以下的葉片有零星病斑或葉片上無病斑，病斑占穗位上部葉片有零星病斑，穗位下部葉片上有少量病斑，病斑6.5計(jì)算公式通過對(duì)玉米鑒定材料群體中個(gè)體植株發(fā)病程度的綜合計(jì)算,確定各鑒定材料的病情指數(shù)。病情指數(shù)采用公式1計(jì)算，得到的值采用四舍五入法保留小數(shù)點(diǎn)后2位有效數(shù)字。病情指數(shù)(DI)=病情指數(shù)(DI)=×100調(diào)查總?cè)~數(shù)×97抗性評(píng)價(jià)及篩選7.1鑒定有效性判定感病對(duì)照品種達(dá)到高感程度時(shí)，該批次鑒定有效。7.2抗性評(píng)價(jià)表2玉米對(duì)大斑病抗病性評(píng)價(jià)分級(jí)6DB2305/T027—20247.3非一致性抗性判定7.2.1同一種質(zhì)在2年的鑒定結(jié)果中，2年的抗性級(jí)別是一致的，此抗性級(jí)別作為最終鑒定結(jié)論。7.2.2同一種質(zhì)在2年的鑒定結(jié)果中，相差一個(gè)抗性級(jí)別，則以最低抗性級(jí)別為準(zhǔn)。7.2.3同一種質(zhì)在2年的鑒定結(jié)果中，抗性級(jí)別相差2個(gè)及以上級(jí)別，則進(jìn)行第三次鑒定。感病對(duì)照品種達(dá)到高感程度時(shí)，該批次鑒定有效。7.3玉米資源篩選對(duì)玉米雜交種進(jìn)行接種鑒定時(shí)，優(yōu)先選擇高抗及中抗品種；結(jié)合產(chǎn)量性狀可以選用中感品種，并注意田間大斑病的綜合防治；慎重使用或者不建議推廣感病及高感玉米品種。所鑒定的玉米自交系為高抗及抗病，則視為該玉米自交系適用于抗玉米大斑病病