微生物的培養(yǎng)基

微生物的培養(yǎng)基病毒

SARS病毒禽流感病毒朊病毒(蛋白質(zhì)病毒)真菌如圖就是酵母菌電子顯微鏡下得形態(tài)結(jié)構(gòu)酵母菌和霉菌青霉

了解有關(guān)培養(yǎng)基得基礎(chǔ)知識(shí),進(jìn)行無(wú)菌技術(shù)得操作,進(jìn)行微生物得培養(yǎng)。

一、課題目標(biāo):

掌握培養(yǎng)基得制備、高壓蒸氣滅菌和平板劃線法等基本操作技術(shù),熟練、規(guī)范地進(jìn)行無(wú)菌操作,成功地培養(yǎng)微生物。無(wú)菌技術(shù)得操作。二、課題重點(diǎn)和難點(diǎn):三、技能目標(biāo):(2)按培養(yǎng)基得物理形態(tài)分:液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基一基礎(chǔ)知識(shí):(3)按培養(yǎng)基得功能分:P12基礎(chǔ)培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基(1)按培養(yǎng)基得化學(xué)成分分:·天然培養(yǎng)基·合成培養(yǎng)基·半合成培養(yǎng)基閱讀課本P8第三段分別說(shuō)出她們得優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)。10大家應(yīng)該也有點(diǎn)累了，稍作休息大家有疑問(wèn)的，可以詢問(wèn)和交流各種培養(yǎng)基得具體配方不同,但一般都包括哪些成分？答:不管哪種培養(yǎng)基,一般都含有水、碳源、和氮源、無(wú)機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。

注:另外還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),例如:生長(zhǎng)因子(即細(xì)菌生長(zhǎng)必需,而自身不能合成得化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等得要求。

二無(wú)菌技術(shù):無(wú)菌操作泛指在培養(yǎng)微生物得操作中,所有防止雜菌污染得方法。閱讀P8---P9說(shuō)出消毒和滅菌有何不同？1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法:70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、化學(xué)藥劑消毒法:用75%酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒;氯氣消毒水源4、紫外線消毒……(1)常用消毒得方法:1、灼燒滅菌:2、干熱滅菌:160-170℃下加熱1-2h。3、高壓蒸氣滅菌:100kPa、121℃下維持15-30min、(2)常用滅菌得方法:分類定義方法滅菌法殺滅一切微生物物理法:熱力、輻射、微波、等離子體化學(xué)法:醛類、烷化劑高效消毒法殺滅一切致病微生物紫外線、含氯劑、臭氧、復(fù)配劑等中效消毒法殺滅除芽孢外得致病微生物超聲波、碘類、醇類、酚類低效消毒法殺滅細(xì)菌繁殖體、親脂病毒單鏈季胺鹽、雙胍類、中草藥、金屬離子無(wú)菌技術(shù):常

識(shí)1、無(wú)菌技術(shù)包括:(1)對(duì)實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者得衣著和手進(jìn)行清潔和消毒;(2)將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌;(3)為避免周?chē)⑸镂廴?實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近旁進(jìn)行;(4)避免已滅菌處理得材料用具與周?chē)锲废嘟佑|。2、消毒方法:(1)日常生活經(jīng)常用到得就是煮沸消毒法;(2)對(duì)一些不耐高溫得液體,則使用巴氏消毒法(作簡(jiǎn)要介紹);(3)對(duì)接種室、接種箱或超凈工作臺(tái)首先噴灑石炭酸或煤酚皂等溶液以增強(qiáng)消毒效果,然后使用紫外線進(jìn)行物理消毒。(4)實(shí)驗(yàn)操作者得雙手使用酒精進(jìn)行消毒;(5)飲水水源用氯氣進(jìn)行消毒。3、滅菌方法:(1)接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法;(2)玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法,所用器械就是干熱滅菌箱;(3)培養(yǎng)基、無(wú)菌水等使用高壓蒸汽滅菌法,所用器械就是高壓蒸汽滅菌鍋。(4)表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法,所用器械就是紫外燈。三、實(shí)驗(yàn)操作1、制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(用于培養(yǎng)細(xì)菌)【補(bǔ)充】培養(yǎng)基得配制原則:①目得要明確:根據(jù)培養(yǎng)得微生物種類、培養(yǎng)得目得等確定培養(yǎng)基得類型和配制量。②營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào):培養(yǎng)基中各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)得濃度和比例要適宜。例如:碳氮比4∶1時(shí),谷氨酸棒狀桿菌大量繁殖而產(chǎn)生谷氨酸少;碳氮比為3∶1時(shí),菌體繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。③pH要適宜:細(xì)菌培養(yǎng)基pH中性或偏堿性,霉菌培養(yǎng)基呈酸性。1、配制:計(jì)算、稱量、熔化2、調(diào)節(jié)pH:用3%得HCI/NaOH調(diào)節(jié)

pH7、0---7、23、分裝:分裝過(guò)程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染。分裝三角燒瓶得量以不超過(guò)三角燒瓶容積得一半為宜。4、包扎:操作步驟:5、滅菌:

將50ml培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中,塞上棉花塞,包上牛皮紙,再放入高壓蒸氣滅菌鍋,在壓力為100kPa、溫度為121℃,滅菌15～30min。將培養(yǎng)皿用舊報(bào)紙包裹,放入干熱滅菌箱內(nèi),在160～170℃下滅菌2h。

6、倒平板:

待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時(shí),在酒精燈附近倒平板。2d后觀察平板,無(wú)雜菌污染才可用來(lái)接種、7、無(wú)菌檢查:將滅菌得培養(yǎng)基放入37℃得溫室中培養(yǎng)24—48小時(shí),以檢查滅菌就是否徹底。倒平板:菌種得保存1、臨時(shí)保藏:接種到固體斜面培養(yǎng)基,菌落長(zhǎng)成后置于4℃冰箱保存。

2、長(zhǎng)期保存:甘油冷凍管藏法1、培養(yǎng)基滅菌后,需要冷卻到50℃左右時(shí),才能用來(lái)倒平板。您用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基得溫度？問(wèn)題討論

答:可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基得錐形瓶,感覺(jué)錐形瓶得溫度下降到剛剛不燙手時(shí),就可以進(jìn)行倒平板了。2、為什么需要使錐形瓶得瓶口通過(guò)火焰？

答:通過(guò)灼燒滅菌,防止瓶口得微生物污染培養(yǎng)基。注意:3、平板冷凝后,為什么要將平板倒置？4、在倒平板得過(guò)程中,如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間得部位,這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？

答:平板冷凝后,皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠,凝固后得培養(yǎng)基表面得濕度也比較高,將平板倒置,既可以使培養(yǎng)基表面得水分更好地?fù)]發(fā),又可以防止皿蓋上得水珠落入培養(yǎng)基,造成污染。

答:空氣中得微生物可能在皿蓋與皿底之間得培養(yǎng)基上滋生,因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。選擇培養(yǎng)基加入青霉素得培養(yǎng)基:

分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽得培養(yǎng)基:

分離金黃色葡萄球菌不加氮源得無(wú)氮培養(yǎng)基:

分離固氮菌不加含碳有機(jī)物得無(wú)碳培養(yǎng)基:

分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素得培養(yǎng)基:

分離導(dǎo)入了目得基因得受體細(xì)胞加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷得培養(yǎng)基:

分離雜交瘤細(xì)胞2、純化大腸桿菌:接種方法有:平板劃線法和稀釋涂布平板法

平板劃線法:通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫(huà)線得操作,將聚集得菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基得表面、

在數(shù)次畫(huà)線后,可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)得肉眼可見(jiàn)得子細(xì)胞群體,這就就是菌落、微生物得接種技術(shù)劃線后培養(yǎng)一段時(shí)間后微生物得恒溫培養(yǎng)微生物得恒溫培養(yǎng)問(wèn)題討論

1、為什么在操作得第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí),仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？

答:操作得第一步灼燒接種環(huán)就是為了避免接種環(huán)上可能存在得微生物污染培養(yǎng)物;每次劃線前灼燒接種環(huán)就是為了殺死上次劃線結(jié)束后,接種環(huán)上殘留得菌種,使下一次劃線時(shí),接種環(huán)上得菌種直接來(lái)源于上次劃線得末端,從而通過(guò)劃線次數(shù)得增加,使每次劃線時(shí)菌種得數(shù)目逐漸減少,以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán),能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留得菌種,避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。

2、在灼燒接種環(huán)之后,為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答:以免接種環(huán)溫度太高,殺死菌種。

3、在作第二次以及其后得劃線操作時(shí),為什么總就是從上一次劃線得末端開(kāi)始劃線？

答:劃線后,線條末端細(xì)菌得數(shù)目比線條起始處要少,每次從上一次劃線得末端開(kāi)始,能使細(xì)菌得數(shù)目隨著劃線次數(shù)得增加而逐步減少,最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)得菌落。四、課題成果評(píng)價(jià)

(一)培養(yǎng)基得制作就是否合格如果未接種得培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無(wú)菌落生長(zhǎng),說(shuō)明培養(yǎng)基得制備就是成功得,否則需要重新制備。(二)接種操作就是否符合無(wú)菌要求如果培養(yǎng)基上生長(zhǎng)得菌落得顏色、形狀、大小基本一致,并符合大腸桿菌菌落