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臨床檢驗(yàn)分析儀器臨床化學(xué)分析儀電解質(zhì)分析儀血?dú)夥治鰞x血液學(xué)測(cè)定裝置編輯課件比色和分光光度儀編輯課件朗伯-比爾定律及其應(yīng)用單色光經(jīng)過(guò)有色溶液時(shí),透過(guò)溶液的光強(qiáng)度不僅與溶液的濃度有關(guān),而且還與溶液的厚度及溶液本身對(duì)光的吸收性能有關(guān):

A=KCbA為消光值:A=lg(I0/I);K為溶液的消光(吸收)系數(shù);C為溶液的濃度;b為光程,即溶液的厚度(有時(shí)也以L表示)。編輯課件摩爾消光系數(shù)一種有色溶液對(duì)于一定波長(zhǎng)(單色光)的入射光的K值具有一定數(shù)值。若溶液的濃度以mol/l表示,溶液厚度以cm表示,則此時(shí)的K值稱為摩爾消光系數(shù),它是有色化合物的重要特征之一。編輯課件光電比色計(jì)的基本原理若先配制一已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液,根據(jù)朗伯-比爾定律,有:As=Ks·Cs·bs。待測(cè)濃度的溶液:Ax=Kx·Cx·bx。如使bx=bs,Kx=Ks,即光程和溶液已知,則有As/Ax=Cs/Cx

或:Cx=(Ax/As)Cs編輯課件光電比色計(jì)結(jié)構(gòu)光源與聚光鏡

光源強(qiáng)度保持不變是獲得準(zhǔn)確測(cè)定結(jié)果的重要因素(穩(wěn)壓器)。光電比色計(jì)通常用6~12V的鎢絲燈泡作發(fā)光光源(320~1100nm)。聚光鏡使從光源射來(lái)的光成為平行光。光源濾光片比色皿光電檢測(cè)器放大顯示編輯課件濾光片濾光片的作用是只讓一定波長(zhǎng)范圍的光透過(guò),而將其余不需要的波長(zhǎng)光濾去。常用的濾光片有吸收濾光片、截止濾光片、復(fù)合濾光片等。比色皿

比色皿是用來(lái)盛裝所分析的樣品液的。在可見(jiàn)光范圍內(nèi),常用無(wú)色光學(xué)玻璃或塑料制作;而在紫外區(qū),需要用能透紫外線的材料,如石英玻璃來(lái)制作。由于經(jīng)常用來(lái)盛裝各種化學(xué)溶液,比色皿除了應(yīng)具有良好的透光特性之外,還應(yīng)有較強(qiáng)的耐腐蝕性。編輯課件光電檢測(cè)器

在檢驗(yàn)儀器中常使用的光電檢測(cè)器有光電池、光電管、光電倍增管等,是利用光電效應(yīng)把光能轉(zhuǎn)化為電能的器件,它必須滿足以下三個(gè)條件:光電轉(zhuǎn)換必須滿足恒定的函數(shù)關(guān)系。

波長(zhǎng)響應(yīng)范圍寬。

靈敏度高,響應(yīng)速度快,產(chǎn)生的電信號(hào)易于檢測(cè)和放大,噪音低。

編輯課件分光光度法利用單色分光器產(chǎn)生波長(zhǎng)可連續(xù)變化的電磁波照射溶液。因溶液中的分子吸收能量而在宏觀上表現(xiàn)為透射光強(qiáng)度變小。若將照射前后光強(qiáng)度的變化轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)并記錄下來(lái),就可以得到一張光強(qiáng)度變化對(duì)波長(zhǎng)關(guān)系曲線圖——分子吸收光譜圖。由于分子吸收光譜與物質(zhì)本身的結(jié)構(gòu)有關(guān),吸光度的大小與物質(zhì)的含量有關(guān),利用吸收光譜的形狀和吸收程度的大小即可對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量的分析。這種方法就叫做分光光度法。編輯課件分光光度計(jì)紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)光焰光度計(jì)原子吸收分光光度計(jì)熒光分光光度計(jì)等編輯課件分光光度計(jì)儀器結(jié)構(gòu):

從光源發(fā)出的光,經(jīng)單色器色散后,變?yōu)閱紊?。單色光?jīng)過(guò)比色皿中的被測(cè)溶液后照射到光電管上。光電管將這一隨溶液濃度不同而變化的光信號(hào)轉(zhuǎn)換成電信號(hào),再經(jīng)放大器,由微安表將透光度T或吸光度A顯示出來(lái)。調(diào)節(jié)單色器可以使不同波長(zhǎng)的單色光穿過(guò)比色皿,從而測(cè)量比色皿中的樣品對(duì)不同波長(zhǎng)的光的吸光度。

單色器的主要部件是玻璃棱鏡或衍射光柵,轉(zhuǎn)動(dòng)不同角度可獲得不同波長(zhǎng)的單色光。光源最常用的是鎢燈(360-800nm),紫外線時(shí)要增加氫燈或氘燈來(lái)產(chǎn)生紫外光。編輯課件

分光光度計(jì)調(diào)零和調(diào)滿刻度在實(shí)際使用中,分光光度計(jì)需要進(jìn)行調(diào)零(T=0)和調(diào)滿刻度(T=100%)。調(diào)零時(shí),關(guān)上光門(mén)使之沒(méi)有光線射入探測(cè)器,調(diào)節(jié)電位器2,提供一個(gè)合適的電壓以抵消光電管本身產(chǎn)生的暗電流或其它原因造成的零漂,使輸出信號(hào)為零(T=0)。調(diào)滿刻度時(shí),將參比溶液置于光路中,通過(guò)調(diào)節(jié)電位器1來(lái)調(diào)節(jié)光源燈兩端的電壓,改變光源燈的亮度使輸出信號(hào)為滿刻度。常用的分光光度計(jì)的光學(xué)系統(tǒng)有:?jiǎn)喂馐鈱W(xué)系統(tǒng)、雙光束光學(xué)系統(tǒng)和雙波長(zhǎng)/雙光束系統(tǒng)等。由于對(duì)不同波長(zhǎng)都需要作調(diào)零,采用單光束光學(xué)系統(tǒng)需要把參比溶液皿和樣品皿來(lái)回的換位,不利于光譜的掃描。使用雙光束光學(xué)系統(tǒng)可以便于光譜的掃描,編輯課件721分光光度計(jì)外形及內(nèi)部結(jié)構(gòu)穩(wěn)壓電路板編輯課件

火焰光度計(jì)每一元素都有其特定發(fā)射光譜,其譜波長(zhǎng)為特異性的。以火焰為激發(fā)源,對(duì)某些金屬元素的發(fā)射光譜進(jìn)行光度分析的方法稱為火焰光度法。編輯課件樣品經(jīng)噴口成霧狀,與燃料混合進(jìn)入火焰,待測(cè)堿金屬原子離解生成基態(tài)原子,并被火焰激發(fā),輻射出自身的特征譜線。用單色器或?yàn)V光片選擇出所測(cè)元素的特征譜線,送入光電檢測(cè)器,經(jīng)放大并顯示結(jié)果。

霧化器與混合室、火焰共同組成火焰原子化器,是樣品原子化的場(chǎng)所。編輯課件

光源原子化器單色器檢測(cè)器信號(hào)處理檢測(cè)裝置樣品原子吸收分光光度計(jì)原子吸收光譜法(AtomicAbsorptionSpectrometry,AAS)是以測(cè)量氣態(tài)基態(tài)原子外層電子共振線的吸收作為基礎(chǔ)的分析方法,可對(duì)60多種元素作微量(ng/ml)定量測(cè)定(符合朗伯-比耳定律)。原子從基態(tài)到激發(fā)態(tài)吸收特定波長(zhǎng)的光使入射光變?nèi)?、變暗,通常為線狀光譜。溶液是分子吸收光譜。編輯課件熒光物質(zhì)經(jīng)高能量射線(如紫外線)激發(fā)后,所發(fā)出的比原激發(fā)光波較長(zhǎng)的可見(jiàn)光叫熒光。任何能發(fā)出熒光的分子都具有兩種特征光譜,激發(fā)光譜和發(fā)射光譜。編輯課件光源激發(fā)單色器樣品杯發(fā)射單色器檢測(cè)器電子放大及控制顯示熒光分光光度計(jì)激發(fā)單色器從光源中選擇出合適波長(zhǎng)的激發(fā)光,投射到樣品上。樣品杯里的熒光物質(zhì)吸收了激發(fā)光后,被激發(fā)發(fā)出該物質(zhì)的熒光光譜。熒光被發(fā)射單色器選出,由光電檢測(cè)器將此正比于物質(zhì)濃度的熒光強(qiáng)度轉(zhuǎn)換成電信號(hào),經(jīng)放大后顯示。激發(fā)光束和熒光光束相垂直,以防光源產(chǎn)生的激發(fā)光到達(dá)檢測(cè)器。編輯課件自動(dòng)生化分析儀編輯課件 生化分析儀是臨床診斷常用的重要儀器之一。它通過(guò)對(duì)血液和其他體液的分析來(lái)測(cè)定各種生化指標(biāo):如血紅蛋白、膽固醇、肌肝、轉(zhuǎn)氨酶、葡萄糖、無(wú)機(jī)磷、淀粉酶、白蛋白、鈣等。自動(dòng)生化分析儀就是把生化分析中的取樣、加試劑、去干擾物、混合、保溫反應(yīng)、檢測(cè)、結(jié)果計(jì)算和顯示、以及清洗等步驟進(jìn)行自動(dòng)化的儀器。目前,絕大多數(shù)生化分析儀都是基于光電比色法的原理進(jìn)行工作的。其結(jié)構(gòu)可粗略看成是由光電比色計(jì)或分光光度計(jì)加微機(jī)兩部分組成。由于整個(gè)測(cè)試過(guò)程是自動(dòng)完成的,所以除微機(jī)外,在采樣、進(jìn)樣、反應(yīng)等過(guò)程使用了一些特殊的部件。編輯課件生化分析儀分類可從不同的角度進(jìn)行分類。按反應(yīng)裝置的結(jié)構(gòu):連續(xù)流動(dòng)式、分立式和離心式三類。按自動(dòng)化程序:全自動(dòng)、半自動(dòng)和手工型三類。按同時(shí)可測(cè)定項(xiàng)目:?jiǎn)瓮ǖ篮投嗤ǖ纼深?。單通道每次只能檢測(cè)一個(gè)項(xiàng)目,但項(xiàng)目可以更換。多通道每次同時(shí)可以測(cè)多個(gè)項(xiàng)目。按儀器的復(fù)雜程度及功能:小型、中型和大型三類。小型一般為單通道、半自動(dòng)及專用分析儀。中型為單通道(可更換幾十個(gè)項(xiàng)目)或多通道,常同時(shí)可測(cè)2-10個(gè)項(xiàng)目,大型均為多通道儀器,同時(shí)可測(cè)10個(gè)以上項(xiàng)目,分析項(xiàng)目可自選或組合,不僅能進(jìn)行臨床生化檢驗(yàn),而且可進(jìn)行藥物監(jiān)測(cè)及進(jìn)行免疫球蛋白的測(cè)定。按規(guī)定程序可變與否:程序固定式和程序可變式分析儀兩類。編輯課件連續(xù)流動(dòng)式自動(dòng)生化分析儀

單通道連續(xù)流動(dòng)式生化分析儀是在微機(jī)控制下,通過(guò)比例泵將標(biāo)本和試劑吸到連續(xù)的管道系統(tǒng)中,在一定的溫度下,在管道內(nèi)完成混合,去除干擾物,保溫反應(yīng),比色測(cè)定,信號(hào)放大,運(yùn)算處理,最后將結(jié)果顯示并打印出來(lái)。因?yàn)檫@種檢測(cè)分析是一個(gè)標(biāo)本跟著一個(gè)標(biāo)本在連續(xù)流動(dòng)狀態(tài)下進(jìn)行的,故稱之為連續(xù)流動(dòng)式分析儀。樣品和樣品之間可用空氣來(lái)隔離,叫空氣分段式系統(tǒng);也可用空白試劑或緩沖液來(lái)隔離,叫非分段式系統(tǒng)。

編輯課件分立式自動(dòng)生化分析儀分立式是指按手工操作的方式編排程序,并以有節(jié)奏的機(jī)械操作代替手工,各環(huán)節(jié)用傳送帶連接起來(lái),按順序依次操作。放在傳送帶上的編碼試管架,可使試管升降。當(dāng)反應(yīng)試管加好樣品后,即向保溫水浴移動(dòng),至一定部位(在勻速行進(jìn)中,距離即等于反應(yīng)時(shí)間)時(shí),又由另外的注射加液器加入反應(yīng)試劑,并伸入攪拌器攪拌均勻。反應(yīng)完畢后,由泵依次吸至流動(dòng)比色池中進(jìn)行比色,經(jīng)信號(hào)處理后,記錄或打印出結(jié)果。編輯課件離心式自動(dòng)生化分析儀

全部檢驗(yàn)過(guò)程在一個(gè)類似離心機(jī)轉(zhuǎn)頭樣的圓盤(pán)上進(jìn)行:將樣品和試劑放在特制的圓盤(pán)上(作為轉(zhuǎn)頭),當(dāng)離心機(jī)開(kāi)動(dòng)后,圓盤(pán)內(nèi)的樣品和試劑受離心作用而相互混合,并進(jìn)行反應(yīng)。最后流入圓盤(pán)外圈的比色槽中,通過(guò)比色計(jì)進(jìn)行檢測(cè)。在整個(gè)分析過(guò)程中,各樣品和試劑的混合,反應(yīng)和檢測(cè)的每一步驟,幾乎都是同時(shí)完成的。特點(diǎn)是微量(樣品1~50mL,試劑120-300mL)、快速(每小時(shí)大于600個(gè)樣品)。編輯課件血?dú)夂脱獨(dú)夥治鰞x

編輯課件測(cè)量血?dú)獾囊饬x呼吸是新陳代謝的重要部分,也是機(jī)體對(duì)O2的攝吸與消耗(獲得能量)及CO2的產(chǎn)生與排出的過(guò)程。呼吸分內(nèi)呼吸和外呼吸兩個(gè)環(huán)節(jié),內(nèi)呼吸為組織中毛細(xì)血管與組織間的氣體交換以及細(xì)胞氧化,外呼吸為肺泡通氣和肺泡壁的氣體交換。血液是運(yùn)送從大氣吸入的O2到組織、同時(shí)又運(yùn)送組織排放的CO2到肺部以排出體外的運(yùn)輸工具。血液中O2和CO2是反映人體代謝狀態(tài)的重要指標(biāo)。編輯課件血液中的氧氧在血液中的兩種存在形式:物理溶解(4%)與血紅蛋(Hb)結(jié)合成HbO2(96%)血氧飽和度: HbO2/(HbO2+Hb) 或:(O2含量-物理溶解的O2量)/O2含量; 正常人:動(dòng)脈0.93-0.98,靜脈0.6-0.7。血?dú)夥治鲋袦y(cè)量的氧分壓,是指血漿中物理溶解O2的張力,其參考范圍在10.66-13.33kPa(80-100mmHg)。編輯課件血液中的二氧化碳CO2在血液中的存在形式有三種:物理溶解(7.3%);與血紅蛋白(Hb)結(jié)合成氨基甲酸血紅蛋白(HbNH2+CO2→HbNHCOOH),(占24.4%);與水結(jié)合形成HCO3(68.3%)。血?dú)夥治鲋袦y(cè)量的二氧化碳分壓也是物理溶解于血漿中的CO2張力。其參考范圍在4.65―5.98kPa(35―45mmHg)。編輯課件血液酸堿度人體血液酸堿度來(lái)源于食物、飲料和藥物中的酸堿物質(zhì)及體內(nèi)代謝后產(chǎn)生的酸堿物質(zhì)。維持酸堿平衡的因素有:緩沖系統(tǒng)、肺調(diào)節(jié)、離子交換、腎調(diào)節(jié),并按上述順序分四級(jí)調(diào)節(jié)。在正常生理狀態(tài)下,pH應(yīng)穩(wěn)定在7.35-7.45之間編輯課件血液氣體的生理變化過(guò)程血液中H+濃度增高(pH變低)或CO2分壓增高時(shí),Hb與氧親合力降低H+濃度降低(pH變高)或CO2分壓降低時(shí),Hb與氧親合力增高。當(dāng)血液流經(jīng)組織時(shí),因組織細(xì)胞的pH比血液低,而CO2分壓較血液高,有利于HbO2釋放O2,同時(shí)又促進(jìn)了Hb和H+、CO2的結(jié)合。當(dāng)血流經(jīng)肺時(shí),肺泡的O2分壓高,HbO2的生成促使Hb釋放H+和CO2,同時(shí)CO2的呼出也有利于HbO2的形成。編輯課件血?dú)夥治鰞x血?dú)夥治鰞x是對(duì)人體血液及呼出氣的酸堿度(pH)、二氧化碳分壓(PCO2)、氧分壓(PO2)進(jìn)行定量測(cè)定的儀器??捎脕?lái)分析和評(píng)價(jià)人體血液酸堿平衡(紊亂)狀態(tài)和輸氧狀態(tài)。它還可以用于人體其它體液(腔液、胃液、腦脊液、尿液)的pH、PCO2、PO2的分析測(cè)量。由于該儀器分析快速、準(zhǔn)確、可靠,因此可以為分析病因和制定治療方案提供可靠的依據(jù);在臨床中常用于昏迷、休克、嚴(yán)重外傷等危急病人的搶救、外科大手術(shù)的監(jiān)視、治療效果的觀察和研究;是肺心病、肺氣腫、氣管炎、糖尿病、嘔吐、腹瀉、中毒等病癥診斷和治療中所必備的儀器。編輯課件血?dú)夥治鰞x的工作原理被測(cè)樣品在管路系統(tǒng)的抽吸下,被抽進(jìn)樣品室內(nèi)的測(cè)量管。測(cè)量管的管壁上開(kāi)有四個(gè)孔,孔里面插有pH、PCO2和PO2三只測(cè)量電極和一只參比電極。待測(cè)液進(jìn)入測(cè)量管后,同時(shí)被四個(gè)電極所檢測(cè),轉(zhuǎn)換成pH、PCO2和PO2三項(xiàng)參數(shù)所對(duì)應(yīng)的電信號(hào)。血?dú)夥治鰞x的結(jié)構(gòu)可分為:電極管路電路編輯課件血?dú)夥治鰞x的管路系統(tǒng)恒溫測(cè)量室裝有四只測(cè)量電極,是整個(gè)管路系統(tǒng)的中心。為保證儀器的準(zhǔn)確性,測(cè)量室嚴(yán)格恒溫,保證電極、管道及所有進(jìn)入的液體、氣體均恒溫在37土0.1℃,其內(nèi)部設(shè)有溫度傳感器、加熱器、過(guò)溫開(kāi)關(guān)和液位檢測(cè)器。

作用:系統(tǒng)通過(guò)管路進(jìn)行定標(biāo)(氣、液)。通過(guò)管路對(duì)電極、通道做清洗。測(cè)量樣品的通路。編輯課件電解質(zhì)分析儀

編輯課件鉀鈉分析儀鉀鈉分析儀是采用離子選擇性電極測(cè)量血清、血漿、尿、腦脊髓或其它品液中鉀鈉離子濃度的分析儀器。有些儀器除了鈉鉀離子外,還有能測(cè)量其它多種離子的電極,因而也常稱為電解質(zhì)分析儀。編輯課件鉀鈉分析儀的組成鉀鈉分析儀一般由鉀電極、鈉電極、參比電極、分析箱、測(cè)量電路、控制電路、驅(qū)動(dòng)電機(jī)及顯示器等組成。編輯課件血細(xì)胞計(jì)數(shù)器

編輯課件編輯課件血細(xì)胞計(jì)數(shù)血細(xì)胞計(jì)數(shù)主要是指計(jì)數(shù)單位容積中紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板的個(gè)數(shù)。傳統(tǒng)的血細(xì)胞計(jì)數(shù)是將血液稀釋后,滴在有分劃的玻璃片上,在顯微鏡下用人工計(jì)數(shù)。最基本的血細(xì)胞計(jì)數(shù)器只能用來(lái)計(jì)數(shù)紅細(xì)胞(RBC)和白細(xì)胞(WBC)。較復(fù)雜的儀器還可以用來(lái)計(jì)數(shù)血小板(PLT),測(cè)量血紅蛋白(HGB)。并根據(jù)以上四個(gè)參數(shù),自動(dòng)計(jì)算出紅細(xì)胞比容(HCT)、平均紅細(xì)胞容量(MCV)、平均血紅蛋白量(MCH)、平均血紅蛋白濃度(MCHC)等項(xiàng)參數(shù)。編輯課件血細(xì)胞計(jì)數(shù)器根據(jù)對(duì)白細(xì)胞分類的能力,血細(xì)胞計(jì)數(shù)器可分為三分類和五分類兩種。血細(xì)胞計(jì)數(shù)方法有:變阻脈沖法(簡(jiǎn)稱變阻法)、光電計(jì)數(shù)法和激光計(jì)數(shù)法等。

編輯課件變阻脈沖法血細(xì)胞計(jì)數(shù)原理血細(xì)胞是電的不良導(dǎo)體,如果構(gòu)成電路的某一小段電解液截面很小,其尺度可與細(xì)胞直徑相比擬,那么當(dāng)有細(xì)胞浮游到此時(shí),將明顯增大整段電解液的等效電阻。如果該電解液外接恒流源,則可得到一連串脈沖,對(duì)這些脈沖計(jì)數(shù),就可求得血細(xì)胞數(shù)量。由于各種血細(xì)胞直徑不同,所以其電阻率也不同,所測(cè)得的脈沖幅度也不同,根據(jù)這一特點(diǎn)就可以對(duì)各種血細(xì)胞進(jìn)行分類計(jì)數(shù)。這就是變阻脈沖法原理。編輯課件變阻法計(jì)數(shù)在大多數(shù)細(xì)胞計(jì)數(shù)器中是利用小孔管換能器裝置實(shí)現(xiàn)的。

紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板直徑不同,產(chǎn)生的脈沖幅度也不同,以白細(xì)胞最大,紅細(xì)胞次之,血小板最小。先利用脈沖幅度甄別器將幅度較小的血小板脈沖去掉,保留紅細(xì)胞和白細(xì)胞脈沖。因?yàn)榘准?xì)胞數(shù)量小于紅細(xì)胞數(shù)量的1/5,故其總數(shù)即可代表紅細(xì)胞數(shù)量。在計(jì)數(shù)白細(xì)胞時(shí),先利用溶血?jiǎng)⒓t細(xì)胞破碎,然后再對(duì)剩下的白細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。在計(jì)數(shù)血小板時(shí),將脈沖幅度甄別器的域值調(diào)低,計(jì)出紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板的總數(shù),再減去先前測(cè)出的紅細(xì)胞數(shù),便得出血小板數(shù)。編輯課件重合損失補(bǔ)償因?yàn)榧t、白細(xì)胞的直徑一般是7-10μm,大者也只有20μm左右,而寶石微孔的孔徑卻為100μm,會(huì)存在兩個(gè)、三個(gè)甚至更多細(xì)胞,一同或前后尾隨進(jìn)入小孔“敏感區(qū)”的可能性。雖然這種情況產(chǎn)生的脈沖幅度比單個(gè)細(xì)胞要高,但它只能產(chǎn)生一個(gè)信號(hào)脈沖,使計(jì)數(shù)有所丟失。這種現(xiàn)象稱為重合損失。為了彌補(bǔ)這種損失,通常設(shè)有重合校正電路或用軟件校正。重合損失是按泊桑(Poisson)分布規(guī)律加以校正的:計(jì)數(shù)值在8000以下時(shí)不校正。計(jì)數(shù)值在8000-38000時(shí),每計(jì)數(shù)1000個(gè)含補(bǔ)充的100個(gè)數(shù)。即每計(jì)900個(gè)便向千位進(jìn)1。在38000以上時(shí),每計(jì)數(shù)1000含補(bǔ)充的200個(gè)。即每計(jì)數(shù)800個(gè)向千位進(jìn)l。編輯課件血紅蛋白測(cè)量

血紅蛋白的單位是g/100m1(新制是g/L)。采用相對(duì)比色法進(jìn)行間接測(cè)量:用溶血?jiǎng)⒔?jīng)過(guò)稀釋的血液中的紅細(xì)胞破壞,血紅蛋白便溶解出來(lái),再加入氰化鉀試劑進(jìn)而轉(zhuǎn)化為顏色穩(wěn)定的氰化血紅蛋白。血紅蛋白含量越高,它的顏色就越深,透光性就越差(或吸光性越強(qiáng))。用光電器件檢測(cè)透射光強(qiáng)度,并與已定標(biāo)的血紅蛋白值相比較,即可得出血紅蛋白含量。常用的光路系統(tǒng)為了防止光散射和外來(lái)光干擾,均采用雙波長(zhǎng)法測(cè)量。編輯課件雙波長(zhǎng)測(cè)量法氰化血紅蛋白的光密度曲線在540nm處有一個(gè)吸收峰。光源燈發(fā)出的光,經(jīng)過(guò)透鏡和狹縫,再透過(guò)流動(dòng)比色皿到達(dá)一個(gè)半透半反鏡上分成兩束光,一束透射光和一束反射光。透射光經(jīng)過(guò)690nm濾光片到達(dá)一光電池,被光電池轉(zhuǎn)換為參考信號(hào)B;另一束反射光經(jīng)過(guò)540nm的濾光片,到達(dá)另一光電池,被光電池轉(zhuǎn)換為樣品信號(hào)A。編輯課件雙波長(zhǎng)測(cè)量吸光度計(jì)算設(shè)在540nm處為λ1,690nm處為λ2, 在λ1時(shí)的吸光度為 Aλ1=Kλ1CL+AS1;

同樣,對(duì)于λ2也有 Aλ2=Kλ2CL+AS2; 式中,AS1和AS2分別為在波長(zhǎng)λ1和λ2時(shí)的光散射和背景吸光度,因540nm和690nm相差不太遠(yuǎn),可以把AS1和AS2視為相等。因此,透過(guò)比色皿的參考信號(hào)和樣品信號(hào)的吸光度之差ΔA為

ΔA=(Kλ2一Kλ1)CL根據(jù)以上原理,只要在電路中求出參考和樣品兩信號(hào)之差,便可以求得相應(yīng)的血紅蛋白濃度,并有效地抑制和減少了光散射、背景吸收以及混濁樣品的影響,提高測(cè)量精度。編輯課件

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