糧油檢驗油料油脂中黃曲霉毒素B1的測定熒光定量快速檢測法

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前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由國家糧食和物資儲備局提出。

本文件由全國糧油標準化技術(shù)委員會（SAC/TC270）歸口。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。

本文件起草單位：河南工業(yè)大學，費縣中糧油脂工業(yè)有限公司，中糧油脂控股有限公司，河北玉星

食品有限公司，長壽花食品股份有限公司。

本文件主要起草人：劉玉蘭，劉配蓮，張剛，董迎章，馬宇翔，鄧斌，王月華，王戩東，裴婭曉。

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糧油檢驗油料油脂中黃曲霉毒素B1的測定

熒光定量快速檢測法

1范圍

本文件規(guī)定了黃曲霉毒素B1的熒光定量快速檢測方法的原理、試劑、儀器設(shè)備及材料、樣品制備、

樣品測定、結(jié)果判定和檢測限。

本文件適用于花生仁、玉米胚等油料及其油脂和餅粕中黃曲霉毒素B1的快速檢測。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T5491糧食、油料檢驗扦樣、分樣法

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

3原理

采用熒光側(cè)向免疫層析方法學原理，將待測樣品滴加在加樣區(qū)，樣品中的黃曲霉毒素B1與結(jié)合墊

中的熒光微球標記黃曲霉毒素B1抗體結(jié)合并通過毛細作用向前層析，達到檢測區(qū)后，檢測線T線上固定

的黃曲霉毒素B1抗原與剩余未結(jié)合的熒光微球標記黃曲霉毒素B1抗體結(jié)合。檢測線T線上結(jié)合的熒光微

球標記黃曲霉毒素B1抗體的量與樣品中黃曲霉毒素B1的濃度成反比。層析結(jié)束后，采用熒光定量快速

檢測儀讀取T線和C線的熒光強度并計算T/C值，通過儀器內(nèi)置的標準曲線即可計算出樣品中黃曲霉毒素

B1的含量并判斷陰陽性。

4試劑

除另有說明外，所用試劑均為分析純，實驗室用水應符合GB/T6682中三級水。

4.1樣本稀釋液(1)。

4.2甲醇。

（1）樣本稀釋液是由上海飛測生物技術(shù)有限公司研制。提供該信息是為了方便本標準用戶的使用，而不是對該試

劑的認可?？色@得相同結(jié)果的其它試劑均可使用。

5儀器設(shè)備及材料

實驗室常規(guī)儀器、設(shè)備及材料。

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5.1粉碎機：可使試樣粉碎后全部通過20目標準篩。

5.2天平：分度值0.01g。

5.3漩渦振蕩器。

(2)

5.4黃曲霉毒素B1熒光定量快速檢測卡：具體儲存條件參照使用說明。

5.5離心機。

5.6恒溫孵育器：孵育溫度37℃，工作條件：環(huán)境溫度5-37℃，環(huán)境濕度不大于80%。

（3）

5.7熒光定量快速檢測儀：工作條件：環(huán)境溫度5-40℃，環(huán)境濕度不大于90%。

5.8ID卡。

5.9條形碼。

6樣品制備

6.1扦樣與分樣

按GB/T5491執(zhí)行。

6.2樣品前處理

6.2.1花生仁、玉米胚或及餅粕等。取有代表性的樣品300g~500g，用粉碎機粉碎至樣本90%通過20

目標準篩，對粉碎后的樣品再次混勻后備用。

6.2.2花生油、玉米油等油脂。取有代表性毛油20g以上，4000r/min離心2min，取上層液體備用（除

毛油以外的植物油直接稱取，不用離心）。

6.2.3準確稱取5.0±0.05g粉碎后的樣品（或離心后的上層液體）于50mL離心管中，按料液比1:5

加入25mL甲醇水溶液（V甲醇:V水為8:2），震蕩提取5min。

6.2.4提取結(jié)束后，4000rpm離心2min（或靜置3~5min后過濾），得上清液。

6.2.5取100ul上清液，加入到600ul樣品稀釋液中（4.1），混勻備用。

注1：不同廠家熒光定量快速檢測卡的樣品處理方法可能不同，應按照使用說明規(guī)定的方法進行操作。

注2：待測樣品吸水量過大不易提取時，可采用1:10比例提取，檢測結(jié)果乘以2即為樣品中黃曲霉毒素B1的含量。

（2）黃曲霉毒素B1熒光定量快速檢測卡是由上海飛測生物科技有限公司研制。提供該信息是為了方便本標準企業(yè)

的使用，而不是對上海飛測熒光定量快速檢測卡檢測的認可，任何具有相同技術(shù)參數(shù)和性能的產(chǎn)品均可使用。

（3）熒光定量快速檢測儀是適合的商品測量儀器，此條信息是為了方便本標準的使用者，并不表示對該產(chǎn)品的指

定認可。

7樣品測定

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7.1檢測前準備

7.1.1將待用黃曲霉毒素B1熒光定量快速檢測卡、樣品提取液、樣品稀釋液恢復至室溫。

7.1.2將檢測卡恒溫孵育器開機，待溫度升至37℃后即可使用。

7.1.3將熒光定量快速檢測儀開機，預熱10min，插入本批次產(chǎn)品所對應的ID卡（每批次產(chǎn)品只需插一

次即可），如需切換檢測項目，掃描相應項目和批次的條形碼即可。

7.2樣品檢測

7.2.1從包裝袋中取出黃曲霉毒素B1熒光定量快速檢測卡，水平置于檢測卡恒溫孵育器上。

7.2.2用移液槍吸取稀釋后的待測液100ul加到檢測卡上的加樣孔中，開始計時孵育8min。

7.2.3孵育結(jié)束后，將檢測卡插入熒光定量快速檢測儀中，按讀數(shù)鍵或觸摸屏幕讀數(shù)即可。

8結(jié)果判定

8.1定量檢測結(jié)果將呈現(xiàn)于熒光定量快速檢測儀液晶顯示屏上，同時可按打印鍵打印獲得紙質(zhì)的檢測報

告（平行測定次數(shù)可根據(jù)使用方質(zhì)量控制要求進行調(diào)整，定量檢測結(jié)果保留2位小數(shù)）。

8.2陰性（-）：檢測結(jié)果＜cut-off值（可根據(jù)使用方質(zhì)量控制要求進行調(diào)整）。

8.3陽性（+）：檢測結(jié)果≥cut-off值（可根據(jù)使用方質(zhì)量控制要求進行調(diào)整）。

8.4無效：檢測儀報錯，則本次檢測無效，需重新測試。

8.5檢測結(jié)果超出定量范圍的上限，可取離心后的上清液（6.2.4），用樣品提取液稀釋5倍后混勻，再

按（6.2.5）檢測，檢測結(jié)果乘以5，即為樣品中黃曲霉毒素B1的最終含量。

9重復性

在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20%。

10檢出限

本方法測定油料和油脂中黃曲霉毒素B1的檢出限為0.5μg/kg，定量限為1μg/kg。

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LS

中華人民共和國糧食行業(yè)標準

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糧油檢驗油料油脂中黃曲霉毒素B1的測

定熒光定量快速檢測法

inspectionofgrainandoils-determinationofaflatoxinB1inoilgrease,rapid

quantitativemethodoffluorescenttechnique

（征求意見稿）

2022.5.20

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實施

國家糧食和物資儲備局發(fā)布

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糧油檢驗油料油脂中黃曲霉毒素B1的測定

熒光定量快速檢測法

1范圍

本文件規(guī)定了黃曲霉毒素B1的熒光定量快速檢測方法的原理、試劑、儀器設(shè)備及材料、樣品制備、

樣品測定、結(jié)果判定和檢測限。

本文件適用于花生仁、玉米胚等油料及其油脂和餅粕中黃曲霉毒素B1的快速檢測。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T5491糧食、油料檢驗扦樣、分樣法

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

3原理

采用熒光側(cè)向免疫層析方法學原理，將待測樣品滴加在加樣區(qū)，樣品中的黃曲霉毒素B1與結(jié)合墊

中的熒光微球標記黃曲霉毒素B1抗體結(jié)合并通過毛細作用向前層析，達到檢測區(qū)后，檢測線T線上固定

的黃曲霉毒素B1抗原與剩余未結(jié)合的熒光微球標記黃曲霉毒素B1抗體結(jié)合。檢測線T線上結(jié)合的熒光微

球標記黃曲霉毒素B1抗體的量與樣品中黃曲霉毒素B1的濃度成反比。層析結(jié)束后，采用熒光定量快速

檢測儀讀取T線和C線的熒光強度并計算T/C值，通過儀器內(nèi)置的標準曲線即可計算出樣品中黃曲霉毒素

B1的含量并判斷陰陽性。

4試劑

除另有說明外，所用試劑均為分析純，實驗室用水應符合GB/T6682中三級水。

4.1樣本稀釋液(1)。

4.2甲醇。

（1）樣本稀釋液是由上海飛測生物技術(shù)有限公司研制。提供該信息是為了方便本標準用戶的使用，而不是對該試

劑的認可?？色@得相同結(jié)果的其它試劑均可使用。

5儀器設(shè)備及材料

實驗室常規(guī)儀器、設(shè)備及材料。

2

XX/TXXXXX—XXXX

5.1粉碎機：可使試樣粉碎后全部通過20目標準篩。

5.2天平：分度值0.01g。

5.3漩渦振蕩器。

(2)

5.4黃曲霉毒素B1熒光定量快速檢測卡：具體儲存條件參照使用說明。

5.5離心機。

5.6恒溫孵育器：孵育溫度37℃，工作條件：環(huán)境溫度5-37℃，環(huán)境濕度不大于80%。

（3）

5.7熒光定量快速檢測儀：工作條件：環(huán)境溫度5-40℃，環(huán)境濕度不大于90%。

5.8ID卡。

5.9條形碼。

6樣品制備

6.1扦樣與分樣

按GB/T5491執(zhí)行。

6.2樣品前處理

6.2.1花生仁、玉米胚或及餅粕等。取有代表性的樣品300g~500g，用粉碎機粉碎至樣本90%通過20

目標準篩，對粉碎后的樣品再次混勻后備用。

6.2.2花生油、玉米油等油脂。取有代表性毛油20g以上，4000r/m